imunoensaios
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imunoensaios


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IMUNOENSAIOS
MODELOS DE TESTES
Natalia Witzke Testoni \u2013 estagiária Laboratório Verner Willrich
IMUNOENSAIOS:
\u2022\u2022 IMUNOPRECIPITAÇÃOIMUNOPRECIPITAÇÃO
\u2022\u2022 IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃOIMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO
\u2022\u2022 RADIOIMUNOENSAIO (RIA)RADIOIMUNOENSAIO (RIA)
\u2022\u2022 ENZIMOIMUNOENSAIOENZIMOIMUNOENSAIO
\u2022\u2022 IMUNOENSAIOS FLUORESCENTESIMUNOENSAIOS FLUORESCENTES
\u2022\u2022 IMUNOENSAIO QUIMIOLUMINESCENTEIMUNOENSAIO QUIMIOLUMINESCENTE
n As técnicas de imunoprecipitação permitem identificar e até quantificar
precipitados resultantes da interação antígeno- anticorpo.
n Entre os principais interferentes, entre físicos-químicos e imunológicos,
o que mais interfere na quantidade de precipitado formado são as
concentrações relativas de antígeno e e de anticorpos.
IMUNOPRECIPITAÇÃO
Estrutura da malha quando há
excesso de Ac
Equivalência Estrutura da malha quando há
excesso de Ag
VAZ, A. J.; TAKEI, K.; BUENO, E. C.; Imunoensaios: Fundamentos e aplicações. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.
Segundo o princípio da nefelometria, as reações de
precipitação entre antígeno e anticorpo em soluções diluídas
produzem um aumento da reflexão da luz, que pode ser
diretamente medida pela dispersão da luz incidente.
Princípio de Tyndall:
Feixe de Luz
Sensor
Sensor
Sensor
IM
UN
OP
RE
CI
PI
TA
ÇÃ
O
NEFELOMETRIA:
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IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO
A característica principal da imunoaglutinação é
que um dos componentes é apresentado na
forma insolúvel em suspensão, de forma natural
em células ou adsorvido artificialmente em
micropartículas ou células.
VAZ, A. J.; TAKEI, K.; BUENO, E. C.; Imunoensaios: Fundamentos e aplicações. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.
n Fatores que diferem a formação dos
agregados:
\u2022 Classe do anticorpo envolvido
\u2022 Concentração iônica e pH do meio
\u2022 Presença de macromoléculas, íons, enzimas e
conservantes.
\u2022 Tempo e temperatura
\u2022 Padronização adequada da suspensão de
micropartículas ou células.
\u2022 Concentração ótima de antígeno ou Ac a ser fixado
nas micropartículas ou células.
\u2022 Estabilidade da ligação do Ag/Ac e acessibilidade
dessa molécula nas micropartículas ou células.
IM
UN
OE
NS
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AG
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VAZ, A. J.; TAKEI, K.; BUENO, E. C.; Imunoensaios: Fundamentos e aplicações. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.
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n AGLUTINAÇÃO DIRETA:
Neste teste, o antígeno faz parte naturalmente da célula, e
haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpo
contra esses antígenos (antígeno é naturalmente insolúvel).
Anticorpo conjugado
IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO
Ex: Identificação de antígenos eritrocitários na tipagem sanguínea, reação de Widal
Complexo precipitadoAntígeno
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AGLUTINAÇÃO INDIRETA:
Esse método emprega a absorção de anticorpos ou
antígenos protéicos solúveis na superfície de
micropartículas inertes (suporte).
As principais partículas usadas como suporte são o
látex, hemácias e gelatina.
IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO
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IMUNOAGLUTINAÇÃO
Anticorpo conjugado
Antígeno
Antígeno conjugado Anticorpo
A aglutinação ocorre quando há formação de
agregados suficientemente grandes de
micropartículas ou células interligados por
pontes moleculares de anticorpos
IND
IRE
TA
Complexo precipitado
HENRY
VantagensVantagens da técnica de imunoaglutinação:
\u2022 Baixo custo
\u2022 Elevada sensibilidade
\u2022 Leitura visual
\u2022 Facilidade de execução
DesvantagensDesvantagens da técnica de imunoaglutinação:
\u2022 Reprodutibilidade dos lotes de reagentes.
\u2022 Acessibilidade molecular para interação Ag-Ac
\u2022 Estabilidade da ligação do Ag/Ac no suporte
IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO
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RADIOIMUNOENSAIO (RIA)
\u2022 Os Radioimunoensaios utilizam anticorpos
conjugados com radioisótopos para quantificar os
ensaios.
\u2022 Os radioisótopos podem ser: Iodo 125 ou 131,
Cobalto, Trício.
\u2022 Devido a meia-vida dos reagentes utilizados, o risco
operacional e a necessidade de medidas especiais e
de elevado custo de biossegurança e descarte de
material levam a laboratórios optarem por técnicas
que empregam reagentes de maior estabilidade.
MAPHERSON, R.A., PINCUS, M. R. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods
VAZ, A. J.; TAKEI, K.; BUENO, E. C.; Imunoensaios: Fundamentos e aplicações. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.
http://www.dpcmedlab.com.br/areacientifica/metodologias.asp
1° MÉTODO:
Uma quantidade conhecida de antígenos marcados e Antígenos da
amostras são misturadas e reagem competitivamente com uma
quantidade fixa de Anticorpos fixos na fase sólida.
Depois que a reação imune atinge o equilíbrio, a mistura é lavada
para remover os conjugados não reativos, que são separados do
complexo imune preso na fase sólida. A concentração do analito é
inversamente proporcional ao sinal emitido.
RADIOIMUNOENSAIO (RIA)
Antígeno conjugadoAntígeno da amostra
Lavagem
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2° MANEIRA:
Método do sanduíche, onde um anticorpo ligado a fase sólida
forma um imunocomplexo. Um segundo Anticorpo conjugado se liga ao
imunocomplexo.
É feito uma lavagem para retirar os anticorpos conjugados não
reativos. E em seguida é feita a lavagem
RADIOIMUNOENSAIO (RIA)
Quantificação
MAPHERSON, R.A., PINCUS, M. R. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods
A concentração do
analito é diretamente
proporcional ao sinal
emitido.
RADIOIMUNOENSAIO (RIA)
\u2022 Vantagens:
\u2013 Alta sensibilidade
\u2013 Permite medidas rápidas e precisas
\u2013 Limiar de detecção em nanogramas e picogramas.
\u2022 Desvantagens:
\u2013 Custo
\u2013 Vida média dos reagentes
\u2013 Risco operacional (radiação)
Ténicas imunológicas -
\u2022 É similar a RIA, exceto que é a atividade
enzimática que é quantificada e não a
radioatividade.
\u2022 O EIA requer um processo secundário para
obter o sinal através das reações catalíticas
das enzimas.
ENZIMOIMUNOENSAIO (EIA)
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ENZIMOIMUNOENSAIO
Enzima
Enzima
Enzima
Ensaio competitivo Ensaio Não-competitivo (sanduíche)
Ensaio Antígeno
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ENZIMOIMUNOENSAIO (EIA)
Forma ativa
da enzima
ENZIMA
ENZIMA
ENZIMA
ENZIMA
ENZIMA
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Vantagens:
Reagentes são relativamente
baratos e tem uma longa
estabilidade
\u2022 Podem ser desenvolvidos
múltiplos ensaios simultâneos
\u2022 O equipamento é barato e
facilmente disponível
\u2022 Não há riscos de radiação
durante a marcação ou
descarte do teste
Desvantagens:
\u2022 A quantificação da enzima
pode ser mais complexa que
a de alguns radioisótopos.
\u2022 Atividade enzimática pode
ser afetada por constituintes
do plasma
\u2022 Ensaios homogêneos não
são tão sensíveis quanto os
RIA.
\u2022 EIA para moléculas protéicas
grandes necessitam de
reagentes imunoquímicos
complexos
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Ingrid Luiza
Ingrid Luiza fez um comentário
também queroo
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Antônio
Antônio fez um comentário
alguém tem o link pra baixar o livro imunoensaio?
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Ridna
Ridna fez um comentário
se alguém tiver esse de imunoensaios fundamentos e aplicações manda pra nós
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DELKIA
DELKIA fez um comentário
tb queria este! conseguiu?
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Francislaine
Francislaine fez um comentário
Alguém tem o livro " imunoensaios : fundamentos e aplicações ?
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