Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)

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Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) 
 
Numa reação de PCR, o fragmento de DNA que desejamos multiplicar (ou 
amplificar) é chamado de fragmento alvo ou DNA molde e constitui um pedaço do 
gene que se pretende estudar (em nosso caso é o gene da beta-globina). Além do 
DNA molde, há também os oligonucleotídeos (também chamados de primers ou 
iniciadores) que nada mais são do que pequenos fragmentos de DNA 
complementares às extremidades da região que se pretende amplificar. 
A PCR permite a rápida amplificação de um gene específico ou de um exon de um 
determinado gene como a primeira etapa para rastreamento de mutações não 
caracterizadas. 
Para a realização da técnica de PCR, são necessários os seguintes componentes: 
veja a figura abaixo: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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 Enzima – uma DNA polimerase termoestável que sintetize duas novas fitas 
complementares à sequência alvo (geralmente uma Taq DNA polimerase). 
 Quatro dNTPs – A, G, C, T ( que funcionam como os “blocos para a construção” 
do DNA). 
 Molde ou template – contendo a sequência alvo da PCR. 
 Dois pares de iniciadores ou primers – proporcionam os sítios de iniciação para a 
cópia da sequência alvo. 
 Solução tampão e sais – proporcionam o pH ideal e a força iônica para a 
atividade da enzima e da especificidade de hibridização do DNA. 
 Cátion meta divalente – pode ser o íon magnésio ou manganês para ativar a 
enzima. 
 Termociclador – aparelho capaz de fazer os ciclos térmicos necessários para que 
haja a amplificação do DNA. Observe um modelo da máquina na figura abaixo: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Como vamos analisar os resultados da PCR? 
Para analisar os resultados precisaremos realizar uma eletroforese em gel de 
agarose. Veja as figuras abaixo: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
A técnica de PCR apresenta várias aplicações; entre elas, podemos citar: 
• A PCR permite a rápida amplificação de um gene específico, como a primeira 
etapa para rastreamento de mutações não caracterizadas. 
• A PCR permite a rápida genotipagem de marcadores polimórficos. 
• A PCR pode ser usada para ensaio de mutações conhecidas. 
• PCR alelo-específico. 
• A PCR pode ser usada para rastreamento de mutações e polimorfismos de 
DNA, a detecção de variação de sequências no DNA é importante para a 
identificação de mutações que causam doenças em um determinado gene, 
bem como para a detecção de polimorfismos de DNA.