PROVAS BIOQUÍMICAS IMViC

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PROVAS BIOQUÍMICAS IMViC (Indol, Vermelho de Metila, Voges-Proskauer, Citrato) 
Diferenciar espécies da família Enterobacteriaceae da qual fazem parte os coliformes 
 
1 Fermentação de carboidratos (glicose) 
 
1.1 VM (Vermelho de Metila) 
 
Meio utilizado: Caldo Clark-Lubs (contém glicose na sua composição) 
Esse teste avalia se a bactéria fermenta a glicose pela via ácida mista, com a produção de vários 
ácidos (ácido fórmico, lático, acético), que provoca a redução do pH de 7 para valor igual ou 
menor que 4,4, faixa de viragem do indicador vermelho de metila para vermelho. Assim a 
presença da cor vermelha após a adição do indicador é indicativa da positividade do teste do 
VM. 
 
1.2 VP (Voges Proskauer) 
 
Meio utilizado: Caldo Clark-Lubs 
Verificar se a bactéria fermenta a glicose pela via butilenoglicólica. Esse teste se baseia na 
detecção do produto intermediário acetil-metil-carbinol (acetoína). Após incubação da cultura 
procede-se a adição de KOH 40%, que na presença de O2 atmosférico e usando α-naftol como 
catalisador da reação, oxida acetoína a diacetil. Essa substância reage com o aminoácido arginina 
presente na peptona do meio de cultura e forma uma substância de cor vermelha. Portanto, a cor 
vermelha também indica a positividade do teste do VP. 
 
2 Teste do Citrato 
 
Este teste determina se a bactéria é capaz de utilizar o citrato de sódio como única fonte de 
carbono para o metabolismo e crescimento. Ou seja, se a bactéria avaliada possui a enzima 
citratase para degradar o citrato de sódio. O meio utilizado é o ágar Citrato de Simmons, que 
além do citrato de sódio contém mono fosfato de amônia, como única fonte de nitrogênio. O azul 
de bromotimol, também presente no meio, é o indicador de pH que é verde em pH neutro. A 
degradação do citrato de sódio e do fosfato de amônia leva a formação de sais de amônia que 
promove a alcalinização do meio elevando o pH do para 7,6, fazendo com que este se torne azul. 
Nesse teste, utilizam-se tubos com meio inclinado para a cultura ter mais acesso ao oxigênio, que 
é necessário para utilização do citrato de sódio. Assim a cor azul caracteriza a positividade do 
teste do citrato e a cor verde indica um teste negativo. 
 
3 Indol 
 
O indol é produzido pela ação da triptofanase sobre o triptofano existente no meio de cultura 
SIM. O indol pode ser detectado pela formação de um anel vermelho na parte superior do tubo, 
após a adição de p-dimetilaminobenzaldeído (reativo de Kovac’s). 
 
4 Produção de H2S (meio SIM) (Apesar de não fazer parte do teste do IMViC ajuda no 
processo de identificação) 
Algumas bactérias são capazes de degradar compostos contendo enxofre inorgânico (como o 
tiossulfato de sódio) e orgânico (aminoácidos sulfurados cistina, cisteína, metionina) presentes 
na peptona presente no meio SIM). Essas reações acontecem através de enzimas específicas, 
como a tiossulfato redutase, e produzem o gás H2S que é incolor. Este reage com o ferro 
(indicador, presente na composição do meio SIM) formando um precipitado preto (sulfeto 
ferroso). 
Motilidade Apesar de não ser uma característica bioquímica ajuda no processo de identificação. 
O meio SIM contém apenas 0,3% de do agente solidificante ágar o que permite a melhor 
observação da motilidade da bactéria inoculada em torno da picada. A motilidade é observada 
através do aspecto do meio, Se a motilidade é positiva o aspecto do meio será turvo enquanto 
que motilidade negativa o crescimento só será observado na zona da picada.