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REAÇÕES DE CARACTERIZAÇÃO QUALITATIVA DE AMOSTRAS EM LABORATÓRIO CARBOIDRATOS: -Bial (orcinol): reação de distinção das pentoses de hexoses. Identifica pentoses, carboidratos contendo pentoses e ácidos urônicos; através da avaliação das funções orgânicas presentes nas moléculas e das características por elas proporcionadas. Nesta reação ocorre a formação do furfural sob ação de ácidos concentrados. O resultado positivo revela cor verde-azulada e com isso a formação de pentoses. Reagentes geralmente utilizados para teste: amido e glicose (não reagem: marrom), ribose (reage: verde-musgo). -Seliwanoff: teste que busca diferenciar cetoses de aldoses - sob ação desidratante de ácidos concentrados são transformados em derivados do furfural que se condensam com o resorcinol- formando um composto vermelho. As reações de cetoses (frutose) são mais rápidas e intensas que com aldoses (glicose); por isso o teste é, muitas vezes considerado específico para frutose. A sacarose pode dar resultado positivo se sofrer hidrólise parcial (glicose e frutose), para outros tipos de açúcares um aquecimento prolongado pode dar uma cor avermelhada. Positivo: vermelho escuro - cetoses/ cetopentoses: azul esverdeada/ aldose e dissacarideos: sem cor) Solvente: ácido clorídrico/ soluto: resorcinol -Iodo (lugol): Indica a presença de polissacarideos (amido), permitindo obter informações sobre o tamanho e grau de ramificação da molécula de carboidrato. Utiliza- se o Amido como controle positivo e o sal de cozinha, por exemplo, como negativo. O iodo se liga ao amido dando origem a uma substância de coloração azul tão intensa que, se pouco diluída, pode parecer arroxeada. (Amilopectina/ glicogênio: vermelho; celulose: transparente devido à forma da molécula; amilose/amido: azul) Utilização clínica: verificar a adulteração de óleos e gorduras. Lembrar, também, que o iodo é utilizado como antiseptico, podendo combater fungos e bactérias; entretanto é tóxico ao homem e não deve ser ingerido nem colocado em contato com mucosas. AÇÚCARES REDUTORES: -Benedict: reagente que avalia o poder redutor de açúcares; o grupo hidroxila livre no carbono 1 de alguns indica que são bons redutores e com isso capazes de reduzir íons metálicos em solução alcalina. Ao reduzir íons de Cu2+ para Cu +; nota-se a formação de um precipitado e coloração vermelha (alto índice de açúcar), se aparecer cor esverdeada indica baixo nível de açúcar e azul indica ausência de glicose. Geralmente a reação é feita em meio básico. A sacarose não sofre oxidação pois possui dois carbonos anoméricos envolvidos na ligação glicosidica. Reativo de Benedict: citrato de sódio penta hidratado, carbonato de sódio anidro, sulfato de cobre e água destilada. Utilização clínica: usado na detecção de excesso de açúcar na urina e alcaptonúria. -Barfoed: distinguir monossacarideos de dissacarideos. A formação de precipitado vermelho tijolo em menos de dois minutos indica monossacarideo e a não formação deste indica dissacarideo. Reativo: água destilada, acetato cúprico e ácido acético glacial. PROTEÍNAS -Biureto: analisa as proteínas totais da amostra. Ou seja revela a presença de ligações peptidicas, indicando as reações de proteínas e peptídeos com sulfato de cobre. O biureto é a estrutura originada a partir da decomposição da ureia quando essa é submetida a altas temperaturas (180C). Soluções alcalinas que contém Biureto desenvolvem cor violeta na presença de sulfato de cobre, visto que forma-se um complexo entre os átomos de Cu2+ e os átomos de nitrogênio da molécula de biureto. Geralmente utiliza-se como reagente: albumina e hidróxido de sódio. Utilização clínica: proteínas totais quando traduz concentração elevada pode indicar lupos, cirrose hepática e desidratação, por exemplo. Se está com valor diminuído pode ser sinônimo de desnutrição, insuficiência renal, queimaduras, hiper-hidratação e etc. -ESBACH: permite visualizar um precipitado amarelo para proteinas e estudar a dissolução deste precipitado.(NaOH) Utilização clinica: Presença de albumina na urina. -Metais pesados: precipitação de proteínas acima do ponto isoeletrico. Assim, ânions de metais pesados (Hg2+, Pb2+, Cu2+, Fe2+, Cd2+ e Zn2+ formam precipitados insolúveis de proteínas. Esta precipitação é mais intensa quando o Ph está acima do ponto isoeletrico, já que a carga líquida sobre a proteína é negativa e favorece a interação com cations provenientes do sal. Ou seja, a reação provoca a desnaturação de proteínas por meio de metais pesados. Alterando o pH pode ressolubilizar o precipitado -Ácido forte: quando a proteína está abaixo do seu pI, a carga líquida total da molécula é positiva, facilitando a interação desta com os ânions provenientes de acidos. Alterando o pH pode-se ressolubilizar o precipitado. Forma-se, na junção dos dois líquidos -que não devem ser misturados - um anel branco de albumina precipitada.
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