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Relatório De Aula Prática MICROBIOLOGIA Prof. Wellington Matheus Henrique Aparecido Honório Limeira/2016 Índice: 1. Introdução...............................................................................................03 2. Objetivo...................................................................................................04 3. Materiais..................................................................................................05 4. Procedimento..........................................................................................06 5. Conclusão...............................................................................................07 6. Referência...............................................................................................08 7. Anexos....................................................................................................09 Introdução: A coloração de Gram foi desenvolvida em 1884 por Hans Christian Joachim Gram, médico bacteriologista dinamarquês. É um procedimento de coloração diferencial, pois não cora todos os tipos de células igualmente; e muito útil, pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-positivas e gram- negativas, de acordo com diferenças na parede celular das bactérias. Consiste no tratamento sucessivo do esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, iodo, etanol - acetona e fucsina básica. A reação de Gram de uma bactéria pode fornecer informações valiosas para o tratamento de uma doença já que bactérias gram-positivas tendem a ser mortas facilmente por penicilinas e cefalosporinas e as bactérias gram-negativas geralmente são mais resistentes, pois os antibióticos não podem penetrar na camada de lipopolissacarídeos. 3 Objetivo: Desenvolver habilidades para executar as técnicas de preparação de esfregaços e para o método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as à composição química da parede celular das mesmas. Desenvolver a habilidade, também, para utilizar o microscópio óptico, observando as bactérias após a coloração de Gram. 4 Materiais utilizado: Reagentes: Água Acetona + Álcool Cristal violeta Lugol Safranina Materiais: Alça de Platina Lâminas de vidro Pipetas de Pasteur Suporte para coloração das lâminas Equipamentos: Microscópio óptico Lente óptica 100x Bico de Bunsen 5 Procedimentos: 1. Realizar a “captura” da bactéria com a Alça de Platina; 2. Fazer o esfregaço na lâmina de vidro; 3. Passar 3x a lâmina de vidro sobre o Bico de Bunsen, para que a bactéria não fique viva; 4. Cubra o esfregaço com cristal violeta e deixe por aproximadamente 1 minuto; 5. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; 6. Cubra a lâmina com lugol e deixe agir por aproximadamente 1 minuto; 7. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente; 8. Adicione álcool-acetona sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante; 9. Lave em um filete de água corrente; 10. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos; 11. Lave em um filete de água corrente; 12. Deixe secar ao ar livre; 13. Coloque uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço; 14. Leia em objetiva de imersão (100x). 6 Conclusão: Concluímos que ao final de todo o procedimento podemos observar muito bem a coloração de Gram nas bactérias gram-positivas e gram-negativas. De modo geral, vimos dois tipos de formas bacterianas, bacilos e cocos. Observamos que as bactérias gram-positivas formam um complexo corado azul intenso; que as bactérias gram-negativas apresentam-se em coloração avermelhada (Anexo 1). Houve bastante dificuldade durante a manipulação do Microscópio, mesmo que alguns estavam com defeito na luz, na lente ou no mesmo. 7 Referências: http://www.biomedicinabrasil.com/2011/06/coloracao-de-gram.html (Acessado em 29 de maio de 2016 às11:07) 8 Anexos: 1. 9
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