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Effects of whole cigarette smoke on human beta defensins expression and secretion by oral mucosal epithelial cells Efeitos da fumaça de cigarro na expressão e secreção de beta-defensinas pelas células epiteliais da mucosa oral Universidade Federal de Santa Catarina Centro de Ciências Biológicas Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia Curso de graduação em Odontologia Wang et al. - Tobacco Induced Diseases (2015) 13:3 Disciplina: Imunologia Aplicada à Odontologia Professor: Carlos Roberto Zanetti Alunas: Caroline Nau, Heloise Diene e Júlia Olbertz VISÃO GERAL Peptídeos antimicrobianos (AMPs) são moléculas efetoras do sistema imune inato e têm efeitos antibacterianos, antifúngicos e antivirais. As defensinas humanas, um grupo de pequenos AMPs catiônicos, incluem: As alfa-defensinas de origem intestinal e de neutrófilos; As beta-defensinas (HBDs) da pele, mucosa oral e outras origens epiteliais. HBD-1, -2 e -3 representam o principal grupo de antimicrobianos expressados nas superfícies das mucosas pelas células epiteliais e possuem efeito antitumoral, efeito quimioatrativo e efeito de imunomodulação. VISÃO GERAL Todo ano, certa de 5-6 milhões de pessoas morrem de doenças relacionadas ao fumo câncer doenças cardiovasculares desordens pulmonares úlceras na mucosa gastrointestinal. A incidência e mortalidade de câncer oral estão fortemente correlacionadas com dois principais fatores de risco: consumo de tabaco e etilismo. VISÃO GERAL A fumaça do cigarro é um fator de risco bem conhecido para periodontite, candidíase oral e leucoplasia oral. SOBRE A FUMAÇA DE CIGARRO... É composta por duas fases, sendo 5% de partículas (+ de 4 mil componentes químicos) e 95% de vapor Possui efeitos: na adesão intercelular epitelial [Gualerzi et al.] diferenciação de queratinócitos [Gualerzi et al.] apoptose das células epiteliais gengivais [Semlali et al.] inibição dos processos de reparação celular [Semlali et al.] desregulação morfológica e funcional dos fibroblastos da gengiva [Semlali et al.]. Aumenta a regulação dos níveis de RNAm e a produção de proteínas de HBD-2 e HBD-3 pelas células epiteliais gengivais humanas [Semlali et al.]. O atual estudo foi designado a avaliar a alteração da expressão e secreção das HBDs pelas células epiteliais da mucosa oral humana expostas à WCS. OBJETIVO DO ESTUDO: MÉTODOS Células Leuk-1 - cultivadas em insertos de Transwell, colocados dentro de uma câmara exposta à fumaça de cigarro com temperatura constante; Na câmara, uma bomba peristáltica controla o acúmulo de substâncias tóxicas na cultura celular e a velocidade de importação da fumaça. GRUPO EXPERIMENTAL células (Leuk-1) expostas à fumaça por 5, 10, 20 e 40 minutos; GRUPO CONTROLE células (Leuk-1) expostas ao ar filtrado por 10 minutos (uma vez que não houve diferença nos níveis de excreção e expressão de HBD-1, -2 e -3 entre os diferentes tempos). MÉTODOS PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) quantitativo em tempo real (qRT-pcr) Microscopia de imunofluorescência e confocal ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) RESULTADOS A exposição à WCS diminuiu a regulação dos níveis de RNAm de HBD-1 e aumentou a regulação dos níveis de RNAm de HBD-2 e 3 em células Leuk-1 RESULTADOS A exposição à WCS reduz o nível de proteínas da HBD-1 nas células Leuk-1. RESULTADOS A exposição à WCS aumenta o nível de proteínas da HBD-2 e HBD-3 nas células Leuk-1 RESULTADOS Localização subcelular do HBD-1, -2 e -3 Através de imunofluorescência e microscopia confocal, a localização subcelular do HBD-1, -2 e -3 em células Leuk-1 foram determinadas: HBD-1 foi principalmente detectada no citoplasma perinuclear e no núcleo. A fraca expressão de HBD-2 foi observada principalmente no citoplasma perinuclear e nas vesículas citoplasmáticas. A localização subcelular do HBD-3 foi principalmente no citoplasma perinuclear e na área de nucléolos, expressada fracamente. Após 40 minutos, porém, a expressão de HBD-1 no citoplasma perinuclear quase desapareceu, e a expressão de HBD-1 na área de nucléolo era fraca. A expressão de HBD-2 e HBD-3 localizadas no citoplasma perinuclear aumentaram. RESULTADOS A exposição à WCS diminui a secreção de HBD-1 em células Leuk-1 DISCUSSÃO O sistema utilizado permite que todas as fases da fumaça do cigarro, incluindo partículas e gás, sejam avaliadas em combinação (WHOLE cigarette smoke - WCS) A cavidade oral é a porta de acesso de toxinas para outras partes do organismo. Os resultados revelaram pela primeira vez que a exposição à WCS diminui a expressão e secreção de HBD-1 em células epiteliais da mucosa oral humana. Também mostraram que a exposição à WCS aumentou a expressão de HBD-2 e HBD-3, e aumentou a secreção de HBD-2 nas células epiteliais humanas da mucosa oral. No momento da entrada para a cavidade oral, a fumaça do cigarro alcança a mucosa oral, onde as células epiteliais agem como a primeira linha de defesa e têm papel crucial em manter a homeostase do hospedeiro, participando da imunidade inata. DISCUSSÃO O aumento da expressão de HBD-2 e HBD-3 pode ser devido a resposta pró-inflamatória das células. Fumaça e cigarro podem estimular uma nova produção de HBDs, levando ao aumento de IL-1 beta que, por sua vez, pode estimular ainda mais a produção de HBDs. O estudo buscou compreender a relação entre fumar e a supressão da defesa local e ocorrência de doenças orais. expressão anormal de HBDs devido a exposição à fumaça de cigarro está envolvida em algumas doenças bucais. DISCUSSÃO CONCLUSÃO O presente estudo revelou que a exposição de WCS pode modular a expressão e secreção de HBDs por células epiteliais da mucosa oral; Essa exposição pode estabelecer uma relação entre cigarro e desenvolvimento de doenças orais; Estabelecer uma relação entre tabagismo e níveis anormais de peptídeos antimicrobianos é crucial para entender a disfunção na defesa local em indivíduos tabagistas, podendo oferecer uma nova perspectiva para interpretar a patologia de doenças induzidas pelo tabaco. REFERÊNCIAS Wang, Wen-mei et al., Effects of Whole Cigarette Smoke on Human Beta Defensins Expression and Secretion by Oral Mucosal Epithelial Cells, Tobacco Induced Diseases, 2015 Bhagawati, Sharanamma, Role of Defensins in Oral Diseases: An Overview, Journal of Indian Academy of Oral Medicine and Radiology, April-June 2012
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