Tecnicas de Obtencao de Sangue

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Técnicas de Obtenção de Sangue
Anticoagulantes 
Índices Hematimétricos
Profa Eloisa
Sangue
Sangue Venoso
Usado para a maioria dos exames de laboratório e fornece quantidade apreciável de amostra.
Sangue
Sangue arterial
Pouco frequente para hematologia
Profissional treinado
Artéria Radial, Femural e Dorsal
Sangue
Sangue capilar
Pesquisa de hemoparasitos e na colheita de amostras para execução de microtécnicas.
Problemas: quantidade de sangue necessário para as provas solicitadas, hemólise e identificação das amostras.
Não se deve massagear ou espremer o local previamente. 
Aumento no número de células (5 a 25%)
Hemólise 
Coleta com tubo capilar (com ou sem anticoagulante): maior volume de amostra
Técnicas de Obtenção de Sangue
Técnicas de Obtenção de Sangue
Seringa
Plástico, descartável e estéril
Pouco utilizada hoje
Recomendada para veias difíceis (idosos, crianças, obesos)
Barata para o laboratório
Vácuo
Prático
Coleta mais segura e mais rápida
Coleta de maior quantidade de sangue por punção
Menor manipulação da amostra
Concentração adequada de anticoagulante por volume sanguíneo
Anticoagulantes
Substâncias que tem a propriedade de impedir a formação do coágulo sanguíneo.
Interferem na cadeia de reações dos fatores da coagulação, impedindo a sua progressão ou alternativamente, inibem a produção hepática de fatores essenciais, reduzindo a sua concentração no sangue circulante.
Anticoagulantes
EDTA
EDTA (ácido etileno-diamino-tetra-acético) é encontrado sob a forma de ácido livre, sais di, tri ou tetrassódico ou sal dipotássico, sendo este último, o mais recomendado, por ser mais solúvel. 
Sequestrante de cálcio - bloqueia a formação de trombina e, portanto, o resto da coagulação.
1 a 2 mg/mL
Uso = hemograma (preserva a integridade dos elementos celulares)
 Não serve para estudos da coagulação, pois aumenta o tempo de protrombina.
Anticoagulantes
Oxalatos
São utilizados os oxalatos de potássio, de sódio, de amônio ou de lítio, sendo mais comumente empregado o oxalato de potássio. 
Frequentemente são empregadas misturas de dois sais. 
Agem na remoção de cálcio pela precipitação. 
Utilizados como agentes descalcificantes de ação reversível
oxalatos de sódio e de potássio são muito usados nos estudos de coagulação. 
Esfregaços para estudos hematológicos, feitos com sangue oxalatado, não são satisfatórios
Neutrófilos apresentam distorções, como vacuolização citoplasmática e nuclear. 
Anticoagulantes
Citrato de sódio
Quelante do cálcio
3,4 a 3,8 mg/mL de sangue
Uso = provas da coagulação (efeito reversível quando Ca exógeno é adicionado), VHS
Hemograma Completo
Eritrograma
Eritrócitos
Leucograma
Leucócitos
Plaquetograma
Plaquetas
Índices Hematimétricos
Índices Absolutos:
Contagem de eritrócitos (He) 
Dosagem de hemoglobina (Hb) 
Hematócrito (Ht) 
Índices Relativos:
Volume corpuscular médio (VCM) 
Hemoglobina corpuscular média (HCM) 
Concentração hemoglobínica corpuscular média (CHCM)
Contagem dos eritrócitos (E ou H)
Câmara de Neubauer
Diluição = 1/200
Quadrante central = 5 retículos dos 25
Cada retículo = subdividido em 16 quadradinhos
Área = 80/400 mm2
Altura = 1/10 mm
N de eritrócitos/ mm3 = N/80/400x1/10x1/200 = N x 10.000
Dosagem da Hemoglobina
(hemoglobinometria)
Princípio
Dosamento da concentração do pigmento hemoglobínico no sangue total (g/dl)
Objetivos
Medir a gravidade de anemia ou policitemia e monitorar a resposta à terapia.
Obter dados para o cálculo da hemoglobina corpuscular média e concentração de hemoglobina corpuscular média.
Dosagem da Hemoglobina
(hemoglobinometria)
Método da cianometahemoglobina
Método de escolha
Solução de cianeto e ferricianeto de potássio (líquido de Drabkin, pH 9.6 – para não precipitar proteínas)
Leitura em espectrofotômetro à 535 nm contra solução de branco
Dosagem da Hemoglobina
(hemoglobinometria)
Valores de referência
Recém-nascidos: 14 a 20 g/dl
1 semana de idade: 15 a 23 g/dl
6 meses de idade: 11 a 14 g/dl
Crianças de 6 meses a 18 anos: 12 a 16 g/dl
Homens: 14 a 18 g/dl
Mulheres: 12 a 16 g/dl
Achados anormais
Baixas concentrações de Hb podem indicar anemia, hemorragia recente ou retenção de líquido causando hemodiluição. 
Hb elevada sugere hemoconcentração originária de policitemia ou desidratação.
Hematócrito (Ht)
Princípio
Hematócrito é o volume de células vermelhas compactadas por centrifugação, sendo expresso como porcentagem em relação ao sangue total
Objetivos
Auxiliar no diagnóstico de policitemia, anemia ou estados anormais de hidratação
Auxiliar no cálculo de dois índices de hemácias: VCM e CHCM
Hematócrito (Ht)
Microhematócrito
Mais utilizado
Sangue + EDTA
Tubo capilar para hematócrito
75 mm de comprimento e 1 mm de diâmetro interno
Preencher e fechar uma das extemidades (massa ou calor)
Centrifugar em centrífuga para microhematócrito = 12.000 rpm por 5 minutos
Leitura em régua especial (zero variável e 100 fixo)
Hematócrito
Hematócrito (Ht)
Valores de Referência
Recém-nascidos: 42% a 60% de Ht
1 semana de idade: 47% a 65% de Ht
6 meses de idade: 33% a 39% de Ht
Crianças de 6 meses a 18 anos: 35% a 45% de Ht
Homens: 42% a 54% de Ht
Mulheres: 36% a 46% de Ht
Achados anormais
Um Ht baixo sugere anemia, hemodiluição ou uma perda maciça de sangue. 
Um Ht alto indica policitemia ou hemoconcentração devido à perda sangüínea ou desidratação
Volume corpuscular médio (VCM)
Indica o volume médio de cada eritrócito (tamanho)
Mais importante dos índices
VCM= Ht x 10/H
Unidade = u3 = fentolitros (ftl)
Valores de referência
Normais = 80 a 100 ftl
O achado de microcitose é comum em anemias por deficiência de ferro, nas doenças crônicas e nas talassemias.
O aparecimento de macrocitose pode estar associado à presença de um grande número de reticulócitos, ao tabagismo e à deficiência de vitamina B12 e de ácido fólico.
Hemoglobina Corpuscular Média (HCM)
Índice hematimétrico que corresponde à média de hemoglobina por eritrócito
HCM= Hb x 10/H
Unidade= picograma (pg)
Valores normais = 27 a 34 pg
Elevado na presença de macrocitose e diminuído na presença de hemácias microcíticas.
Concentração da Hemoglobina Corpuscular Média (CHCM)
Avaliação da hemoglobina encontrada em 100 mL de hemácias. Esse índice permite a avaliação do grau de saturação de hemoglobina no eritrócito
CHCM= HB x 100/Ht
Unidade = g/dl ou %
Valores de referência = 32 a 36 g/dl
A saturação da hemoglobina normal indica a presença de hemácias ditas normocrômicas. Quando diminuída, teremos hemácias denominadas hipocrômicas e, quando aumentadas, hemácias hipercrômicas.
RDW
Variação do Volume das Hemácias 
É um índice que avalia o grau de variação no tamanho das hemácias, sendo um marcador da existência ou não de anisocitose. 
Sua unidade de medida é expressa através da porcentagem (%) em histogramas
Curva de freqüência da distribuição e tamanho dos eritrócitos, com o volume na abscissa e a freqüência na ordenada. 
Quando a curva situa-se mais à esquerda denota-se microcitose e mais a direita macrocitose. 
Quando ocorre dupla população hemática duas curvas podem sobrepor. 
Valor Normal: 12 a 14,5 % 
VHS – Velocidade de Hemossedimentação
Medida da altura da camada de hemácias de uma amostra de sangue venoso anticoagulado que se sedimenta em um tubo de vidro graduado num determinado período de tempo.
Marcador de resposta inflamatória
VHS
Método de Referência: Westergren. 
1,6ml de uma mistura de sangue venoso mais 0,4ml de citrato de sódio a 3,8% são colocados num tubo transparente com diâmetro interno de 2,5mm e graduado em milímetros. 
A marca zero da graduação fica na extremidade superior, exatamente a 200mm da ponta da pipeta. 
A técnica exige que o tubo com a amostra de sangue seja mantido exatamente na vertical e permaneça emrepouso pelo menos durante uma hora. 
A leitura é dada pela altura da coluna de plasma, no limite de separação com as hemácias sedimentadas. 
O resultado, expresso em milímetros por hora (mm/h), mede a eritrossedimentação, hemossedimentação ou VHS.
VHS
Método de Wintrobe
Utiliza-se um tubo de diâmetro interno constante e com uma escala graduada em milímetros (Tubo de Wintrobe). 
O tubo é preenchido convenientemente com sangue oxalatado até a marca zero e deixado em posição vertical por 1 hora, após o que, lê-se diretamente na escala descendente do tubo, a distância percorrida pelos eritrócitos.
Os valores normais diferem porque o tubo tem metade do comprimento e graduações diferentes do usado no método de Westergren.
VHS
VHS
Contagem de Leucócitos
Leucometria
A contagem total de leucócitos
Valores Absolutos
Não é feita distinção entre os tipos normais de células.
Leucocitose e leucocitopenia (ou leucopenia) designam respectivamente as contagens acima e abaixo dos limites de referência. 
A leucometria pode variar segundo raça, horário, alimentação, fumo e obesidade, além das variações patológicas
Contagem de Leucócitos
Contagem de leucócitos
Diluição 1/20 (líquido de Turk)
4 quadrantes laterais da Câmara de Neubauer
N x 50
Contagem de Leucócitos
Contagem diferencial
São observados os diferentes tipos de leucócitos, levando em conta suas características morfológicas e tintoriais.
Contagem de 100 células
Valor Relativo
Contagem de Plaquetas
Técnica de contagem em câmara de Neubauer, utilizando líquido de Rees e Ecker
N plaquetas contadas nos 25 quadrados X 10 X 100 = Plaquetas/ mm3