Aula 10 - Tecnicas microbiologicas

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Disciplina: Microbiologia para 
Engenharia Ambiental I
Docente: Ana Carolina
TTéécnicascnicas
microbiolmicrobiolóógicasgicas
Curva
padrão de 
crescimento
microbiano
pt-br.aia1317.wikia.com
MedidaMedida do do CrescimentoCrescimento BacterianoBacteriano
DiluiDiluiççãoão emem sséérierie e e contagemcontagem--PadrãoPadrão emem PlacasPlacas
bacilosnasopa.wordpress.com
MedidaMedida do do CrescimentoCrescimento BacterianoBacteriano
http://eco-sustentar.blogspot.com.br/
Unidade formadora de colônia
MedidaMedida do do CrescimentoCrescimento BacterianoBacteriano
FiltraFiltraççãoão
http://hblaboratorios.com.br/analises_ar.htm
MedidaMedida do do CrescimentoCrescimento BacterianoBacteriano
TurbidezTurbidez
www.unad.edu.co
www.quimis.com.br
www.infoescola.com
2
MedidaMedida do do CrescimentoCrescimento BacterianoBacteriano
ProduProduççãoão de de ggááss
www.unad.edu.co
FatoresFatores queque afetamafetam o o crescimentocrescimento microbianomicrobiano
pH: acidófilos, neutrófilos e alcalófilos
Temperatura: psicrófilos, mesófilos e termófilos
Oxigênio: aeróbios ou anaeróbios
Obrigatórios ou facultativos
http://microbiologia12.blogspot.com.br
FatoresFatores queque afetamafetam o o crescimentocrescimento microbianomicrobiano
pH: acidófilos, neutrófilos e alcalófilos
Temperatura: psicrófilos, mesófilos e termófilos
Oxigênio: aeróbios ou anaeróbios
Obrigatórios ou facultativos
http://microbiologia12.blogspot.com.br
a) Aeróbio obrigatório
b) Anaeróbio obrigatório
c) Aeróbio facultativo
d) Microaerófilo
e) Anaeróbio facultativo
FatoresFatores queque afetamafetam o o crescimentocrescimento microbianomicrobiano
pH: acidófilos, neutrófilos e alcalófilos
Temperatura: psicrófilos, mesófilos e termófilos
Oxigênio: aeróbios ou anaeróbios
Umidade
Pressão osmótica: halófilas
www.sobiologia.com.br
Mar Morto Mar Morto –– 2020--30% sal30% sal
http://www.euquerobiologia.com.br
FatoresFatores queque afetamafetam o o crescimentocrescimento microbianomicrobiano
pH: acidófilos, neutrófilos e alcalófilos
Temperatura: psicrófilos, mesófilos e termófilos
Oxigênio: aeróbios ou anaeróbios
Umidade
Pressão osmótica: halófilas
Radiações
FatoresFatores NutricionaisNutricionais
Fontes de carbono
Fontes de nitrogênio
Enxofre e fósforo
Oligoelementos (zinco, ferro, cobre, 
cobalto, cálcio, sódio, cloro)
Vitaminas
thaydabio.spaceblog.com.br www.efn.uncor.edu
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MeiosMeios de de culturacultura
www.scientia.blog.br
scienceblogs.com.br
scienceblogs.com.br
Mistura de nutrientes que possibilita o crescimento 
in vitro de microorganismos
MeiosMeios de de culturacultura
Quanto à composição
Naturais
São aqueles encontrados na 
natureza, de origem vegetal (p.ex.: 
pedaço de batata, de abóbora) ou 
animal (p.ex.: gema de ovo, pedaço 
de carne)
Artificiais
São aqueles fabricados em laboratório, 
constituído de substâncias químicas, 
podendo ser definidos ou indefinidos 
(complexos)
truques-dicas-companhia.blogspot.com
MeiosMeios de de culturacultura
Definidos
possui composição definida, ou seja, 
se conhece qualitativa e quantitativa
sua composição.
Indefinidos
A sua composição real não é conhecida, 
apenas é feita uma estimativa qualitativa.
Por exemplo: meios suplementados com 
sangue, gema de ovo
Quanto à composição
Composição em g/L:
Digestão peptídica de tecido animal: 20.00
Lactose: 10.00
Sais Biliares: 5.00
Cloreto de Sódio: 5.00
Vermelho Neutro: 0.07
Agar: 15.30
Ágar-sangue semeado 
com Bacillus cereus
(LFB/IOC/FIOCRUZ)
MeiosMeios de de culturacultura
Líquidos (Caldos)
desprovidos de ágar
Quanto ao estado físico
scienceblogs.com.br
Semi-sólido
até 1% de Agar
Sólido
1,5 a 2,5% de ágar
scienceblogs.com.br
http://microdidatica.wordpress.com
MeiosMeios de de culturacultura
Quanto a finalidade e características
Simples
Só possui os nutrientes básicos para o 
crescimento das bactérias em geral
Enriquecido
Além dos nutrientes básicos possui 
elementos nutritivos a mais, como 
fatores promotores de crescimento 
(sangue...), mas não é específico.
Ágar-sangue semeado 
com Bacillus cereus
(LFB/IOC/FIOCRUZ)
Meio PCA semeado 
com microrganismos totais a 30oC
(http://www.frilabo.pt/)
MeiosMeios de de culturacultura
Quanto a finalidade e características
Seletivo
Possui agentes inibidores de 
determinados microorganismos. 
Permite a identificação e isolamento 
da bactéria, pois é um meio sólido 
(permite a visualização de UFCs).
Por exemplo: Agar EMB à inibe 
Gram+
Diferencial
Permite a diferenciação de diferentes 
microorganismos.
Por exemplo: a diferenciação de 
bactérias fermentadoras e não 
fermentadoras da lactose no Agar 
EMB.
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AgarMacConkeyAgarMacConkey
meio seletivo para Gram negativo e diferencial para a utilização de lactose. O 
cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos 
especialmente enterococos e estafilococos.
• Lactose positiva – coloração avermelhada
• Lactose negativa – coloração inalterada
MeiosMeios de de culturacultura
Quanto a finalidade e características
De enriquecimento
É suplementado com nutrientes 
específicos para o microorganismo que 
se deseja pesquisar. Não suprime outros 
microrganismos.
Por exemplo: aminoácidos (lisina à
Salmonella)
www.portalsaofrancisco.com.br
Indicadores
Possuem agentes que indicam 
determinadas reações no meio, para a 
determinação do metabolismo da 
bactérias.
Por exemplo: Hemólise no ágar
sangue
Ágar-sangue semeado 
com Bacillus cereus
(LFB/IOC/FIOCRUZ)
CulturaCultura emem laboratlaboratóóriorio
� Quantidade de oxigênio
� Temperatura
� Cultura estoque
� Preservação
www.pro-analise.com.br
microbiologiaodontologica.blogspot.com
www.produtosparalaboratorio.com.br
http://medfoco.com.br
Bactéria Rickettsia rickettsi
Mycobacterium leprae
http://www.portalsaofrancisco.com.br
CulturasCulturas de de ccéélulaslulas
ColetasColetas
insightltda.com.br
labtestsonline.org
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TTéécnicascnicas de de semeadurasemeadura
Métodos de transferência de inóculos de um meio de cultura (ou 
material a ser analisado) para outro meio de cultura.
Técnicas assépticas
labtestsonline.org
www.deskartalab.com
dc406.4shared.com
TTéécnicascnicas de de semeadurasemeadura
www.scientia.blog.br
Estria sinuosa: semear com alça ou agulha 
bacteriológica, em zig-zag, partindo da base para 
a extremidade do bizel (superfície inclinada do 
meio).
Estria Reta: semear com agulha bacteriológica, 
fazendo uma linha reta, com cuidado de não 
ferir o Agar, partindo da base para a extremidade 
do bizel (superfície inclinada do meio).
TTéécnicascnicas de de semeadurasemeadura
Picada Central
semear com agulha bacteriológica, no centro do 
Agar. Dependendo da finalidade, o inóculo deve 
penetrar até 2/3 do tubo ou até o fundo deste.
http://microbiologia12.blogspot.com.br
TTéécnicascnicas de de semeadurasemeadura
Pour-plate ou disseminação (método 
em profundidade)
Transferir 1 ml da cultura para placa de Petri
vazia, colocar 10 – 20 ml do meio fundido (e 
resfriado a cerca de 45 – 50°C) sobre a cultura 
e homogeneizar suavemente com movimentos 
circulares.
Spread-plate ou distensão
Transferir 0,1 ml da cultura para o meio sólido 
na placa e espalhar uniformemente com a 
própria ponta da pipeta, ou alça bacteriológica 
/ swab / alça Drigalsky.
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TTéécnicascnicas de de semeadurasemeadura
Estria simples
transferir uma alçada da cultura para 
meio sólido em placa e estriar com a 
alça bacteriológica sobre o meio.
A estria pode ser realizada em 
movimento de zigzag (estria sinuosa) 
ou como uma linha reta sobre o meio 
(estria reta).
TTéécnicascnicas de de semeadurasemeadura
Esgotamentoem estrias ou estrias 
múltiplas:
transferir uma alçada da cultura para meio sólido 
em placa e estriar com a alça bacteriológica sobre 
o meio. A placa é dividida em 4 quadrantes e a 
inoculação pode ser feita de 2 tipos: 
3 estrias
4 estrias
www.fotonblog.com
IsolamentoIsolamento
www.splabor.com.b