Aula 1 - Apresentação

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Apresentação da disciplina
QBQ 0316 – Bioquímica Experimental Carlos Hotta
07/08/2013
Objetivos
Abordar de forma prática conceitos que são 
apresentados de forma teórica em outras 
disciplinas
Exercitar a formulação e 
teste experimental de 
hipóteses
Desenvolver a capacidade de análise de dados experimentais
1 g de levedura
purificação
extração
caracterização
Atividades
• Aula teórica – embasamento teórico dos experimentos
• Planejamento das práticas – discussão sobre os procedimentos a serem executados 
nas aulas práticas
• Exercícios – exercícios de análise de dados experimentais
• Aulas práticas – execução dos experimentos no laboratório didático
• Análise de dados – análise dos dados obtidos nas aulas práticas
Avaliação
provas individuais (2)
exercícios (6)
relatórios (3)
em grupos de 3
8,5 1,5
Segurança no laboratório
• O uso do jaleco é obrigatório dentro do LBBM
• O jaleco não deve ser usado fora do LBBM
• Cabelos compridos devem estar sempre presos
• Sapatos devem ser fechados
• Não se deve comer ou beber no laboratório
• Somente iniciar os procedimentos após entender o que deverá ser feito
Regras de segurança no LBBM
Utilização de pipetas automáticas
• A micropipeta é um instrumento especializado 
em transferir volumes pequenos
• Pode vir em diversas faixas de volume
P20 – 0,5 a 20 µ l
P200 – 20 a 200 µ l
P1000 – 200 a 1000 µ l
• Possui ponteiras que permitem a utilização de 
diversos
Utilização de pipetas automáticas
Utilização de pipetas automáticas
http://www.youtube.com/watch?feature=player_detailpage&v=uEy_NGDfo_8
http://www.youtube.com/watch?feature=player_detailpage&v=uEy_NGDfo_8
Espectrofotômetro
Aparelho utilizado para se calcular quanto uma 
solução absorve de um determinado comprimento 
de onda (absorbância)
Laser verde em uma solução 
de rodamina B6 ->
Espectrofotômetro
Lei de Bouger-Lambert-Beer
• Usa-se luz de apenas um comprimento 
de ondas 
• Usa-se cubetas de tamanho fixo (1 cm)
• O coeficiente de absorção molar é 
próprio para cada substância
Leitor de microplacas
• Usa microplacas de 96 poços no lugar de 
cubetas
• Placas possuem 8 linhas e 12 colunas
• Cada poço cabe de 250 µ l a 300 µ l 
Prática 1 - Lise de células
Lise de células
Proteases podem 
degradar a nossa 
enzima!
Usa-se baixas 
temperaturas e/ou 
inibidores de proteases
Centrifugação diferencial
Centrifugação por gradiente
Prática 2 – dosagem de proteínas
Métodos diretos de dosagem de proteínas
Métodos indiretos de dosagem de proteínas
Métodos colorimétricos (exigem construção de uma curva-padrão)
Métodos indiretos de dosagem de proteínas
Quantificação de proteínas no lisado
Não se esquecer!
• Estar com os grupos formados e com numeração (grupos pares com 
Carlos grupos ímpares com Guilherme)
• Rever o protocolo antes da aula
• Muitas práticas exigem muito trabalho, sejam pontuais
• Tragam aventais!
• Antes de começar a prática, tenham certeza de como a pipeta e o 
espectrofotômetro funcionam
• Preparem o lisado com cuidado pois ele será usado no semestre 
inteiro!
• Os exercícios são essenciais para aprender os cálculos!
• Pode-se usar Escel e calculadora para se obter a equação da reta mas 
vocês deverão desenhar gráficos na prova! 
Mantenham o material sempre em gelo!