Resumo_bichinho_1-2

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Os microorganismos
Tamanhos: vírus - 0,01um, bactérias - 0,5-0,6um length e 0,25-1um depth, leveduras - 5-8um, célula animal -10um
Anabolismo: reações de síntese X Catabolismo: reações degradativas.
Características: 
culturais – nutrientes exigidos; morfológicas – dimensões das células, seus arranjos, a diferenciação e identificação de suas estruturas; metabólicas – como o microorg desenvolve os processos químicos vitais, caminhos metabólicos; químicas – identificação dos principais constituintes químicos das células, sua purificação e caracterização; antigênicas – detecção de componentes especiais das células que fornecem evidencia de semelhanças entre as espécies; genéticas – analise da composição do DNA e a relação do DNA isolado de diferentes microog.
Isolamento: 
O ambiente entre as placas de petri deve estar estéril. O controle do microorganismos que crescera é feito por meio seletivo (presença/ausência de C orgânico). Esterilização é feita em autoclave. O meio será definido de modo a possuir os nutrientes necessários para crescimento (glicose, N, lactose, etc). Manipulação é feita em capela de fluxo laminar para evitar entrada e saída de microorganismos.
.Isolamento do sistema natural: diluição sucessiva usando água ou solução salina para evitar que meio fique hipo/hipertônico. Faz-se plaqueamento de todas, 159 unidades formadoras de colônias é o ideal para boa representação do meio.
.Esgotamento por estrias: esgota-se o conteúdo de uma placa até ter colônias isoladas.
.Diferenciação por pressão de O2: aeróbios precisam de muito, aeróbios facultativos pouco e anaeróbios morrem em sua presença. Na superfície do meio de cultura tem-se maior pressão de O2, maior coleta de microorg aeróbios. Se quiser anaeróbios, meio de cultura é vertido sobre a colônia, balançando a placa novamente em formato de 8 ate espalhar os microorg.
.Semeadura em superfície: inoculo espalhado no ágar com alça de vidro.
.Pour-plate: suspensão é misturada com ágar fundido a 45oC e cresce imobilizada quando ele se solidifica.
-> Para organismos aeróbios exclusivos, espalhamos os microorganismos nas superfícies (semeamento), para aeróbios facultativos, usamos incorporação (pour-plate, que consiste em colocar o microorganismo primeiro e depois o meio com ágar e depois balançar em formato de 8 a placa toda)
-> Para armazenar pode ser na placa mesmo mas ocupa muito espaço, então bota num tubo e ensaio com o meio nutriente (gelosa) e deixa solidificar inclinado para ter maior superfície de contato.
Bactérias 
Procarióticos X Eucarióticos
Eucariotos: todas organelas membrano-limitadas. 
Procariotos: DNA disperso no citoplasma da célula.
São organismos menores, mais simples estruturalmente, não possuem núcleo organizado nem organelas celulares envoltas por membranas.
	Eubactérias
	Arqueobactérias
	maior grupo
	menor grupo
	poucas habitam condições extremas
	sobrevivem em condições extremas (T, salinidade)
	algumas espécies fotossintéticas
	nenhuma espécie fotossintética
	não produzem metano
	todas produzem metano por redução de CO2
Morfologia: 
Dicocos – sozinhas ou pares (diplococos), cadeia (estreptococos), em 4(tétrades), em cubo (sarcinas), amontoado desorganizado (estafilococos) -> microorganismo patogênicos tem essa forma para terem maior poder de adesão no tecido animal ou vegetal. Bacilos – único, diplo, estrepto ou cocobacilo. -> se juntam pela ponta porque quando bactéria faz mitose, na maioria das vezes, não se destaca completamente, ficando presa ali, ao invés de ter 2 bactérias juntas pelo lado (maior superfície de contato). Vibrião – em vírgula. Espirilo – em espiral. Espiroqueta – muitas espirais.
-> Se tem processo com bastonetes e cocos juntos, já sabe-se que tem contaminação.
Citologia: 
Relaciona estrutura celular com sua função
.Parede celular: constituída por carboidratos, radicais são as partes soltas; dá forma e rigidez pra célula . GRAM (+): parede celular mais espessa; GRAM (-): parede menos espessa e possuem membrana externa de lipopolissacarídeos. Teste do gram: gram 1 cora de roxo todas as células, fixação é feita com mordente (gram 2), descora com álcool e contra-cora de rosa com gram 4. Gram (-) ficam rosas porque ao descorar com álcool, elas tem difusão anterior até a parede mais lenta e são descoradas do roxo.
-> Grande gama de bactérias gram (-) são patogênicas.
-> Para uso industrial é melhor o uso de gram (+): é mais fácil de romper para obter produto intracelular.
.Membrana citoplasmática: barreira osmótica da célula. Entre ela e a parede celular esta o espaço periplástico, onde atuam enzimas para quebrar moléculas e facilitar sua entrada na célula. Faz o processo seletivo que não é feito pela parede. Estrutura de fosfolipídeo.
-> Balanço de potencial oxirredução deve ser mantido por isso células devem produzir outras coisas além do produto de interesse (ex.: álcool). Por isso existe um máximo de rendimento de produção.
-> Bactérias não possuem mitocôndria mas possui a cadeia de citocromos dispersa no citoplasma e também tem o O2 como aceptor final de elétrons.
.Mesossomos: ligados no espaço periplástico ou no centro. Fazem divisão binária. O central tem função de divisão celular e os laterais secretam substâncias. Os outros transportam elétrons (nem toda bactéria tem). O local onde se encontra define a função.
.Inclusões granulares: fontes de reserva.
.Flagelos: nem todas bactérias possuem movimento. Flagelos são fixados na membrana citoplasmática e movimento rotacional causa movimento de chicote. Pode ser: Glicocalix ou Pili (ajuda no processo de adesão a qualquer coisa). Pili-F permite a tranferência de plasmídeos de uma célula para outra.
.Esporulação: esporo bacteriano é esporo de resistência. É produzido quando o ambiente externo da célula passa a não ser interessante, aí conjuga o material celular e libera esporo no meio por questão de sobrevivência. Esporos tem maior resistência a esterilização do que a forma vegetativa. Esporo não é corado no teste do gram.
.Reprodução: 
1 célula gera outras 2 idênticas. Outros microorganismos não possuem crescimento exponencial perfeitinho.
.Crescimento bacteriano: os nutrientes necessários são aqueles que as células tem em suas composições = para saber o meio a ser colocado (C,N,P, etc)
.Tipos de metabolismo: 
	tipo de metabolismo
	fonte de energia
	fonte de C
	quimiorganotrófico (heterotrófico)
	moléculas organicas
	moleculas organicas
	quimioautotrófico
	moleculas inorganicas
	moleculas inorganicas (CO2)
	fotoautotrófico
	Luz
	moleculas inorganicas (CO2)
	fotorganotrofico (fotoheterotrófico)
	Luz
	moleculas organicas
Temperatura – Muita alta coagula ptns e muito baixas reduzem o metabolismo.
-> Tuberculose demora para se duplicar por isso precisa de tratamento a longo prazo para se certificar que remédio está sempre presente.
pH – maioria gosta dele neutro mas há exceções: 1 trabalha na lixiviação de metais e outra produz ácido acético.
Relação com O2: 
Aeróbios estritos (O2 similar à atmosfera ~20%); microaerófilos (O2 inferior à atmosfera ~5%); anaeróbios facultativos (crescem na ausência e presença de O2. Sem O2: etanol; Com O2: fermento); anaeróbios estritos (morrem com O2. Realizam fermentação ou respiração anaeróbia); anaeróbios aerotolerantes (não requerem O2 mas o toleram, sem crescer).
Leveduras (eucarioto)
Pleomorfismo: não tem forma única como as bactérias. Razões: divisão celular por brotamento da célula mãe, deixando cicatriz que deforma a célula. São unicelulares. Dimórfica: em uma T, tem forma de levedura, em outra T se torna filamentosa (muito comum em células patogênicas pois ajuda na colonização de um ambiente já que hifa é mais fácil de obter nutrientes). Forma não ajuda na classificação.
Pode haver formação de pseudo-hifas (estruturas formadas durante o brotamento simples): não tem conexão entre uma célula e outra (diferente de hifas verdadeiras).
.Parede celular: contém polímero de interesse industrial. Parte amorfa dácerta flexibilidade. Contém enzimas que ajudam na degradação de compostos poliméricos para passar pela membrana. Quitina é seu principal componente.
.Membrana plasmática: parecida com a dos procariotos. Regula a entrada de nutrientes.
.Núcleo: membrano-limitado com envelopes nucleares com poros nucleares. Possui poros que permitem a passagem de RNA: RNA-m sai pelo poro e vais er traduzido no retículo endoplasmático.
.Mitocôndria: essencial. Maioria das leveduras é aeróbia facultativa e essa respiração na presença de O2 ocorre na mitocôndria.
.Retículo endoplasmático: aderido ao núcleo com ribossomos. Muita invaginação para aumentar área superficial com finalidade de transporte.
.Golgi: processamentos pós-traducionais.
Metabolismo: 
Mais comum é quimioeterotrófico. Tanto oxidativo quanto fermentativo (mitocôndrias com baixa atividade). Balanço redox é mantido por reações secundárias por isso rendimento nunca é 100%.
Reprodução:
 Assexuada (brotamento simples – invaginação na parede e célula fica ligada à célula mãe; brotamento fissão – célula filha se destaca) ou sexuada (iniciada pela liberação de feromônios, produz esporos).
.Produz fermento (leveduras ativas) com presença de O2 ou etanol por fermentação alcoólica.
Fungos Filamentosos
Eucariotos quimioeterotróficos, não possuem clorofila, em geral filamentosos, ramificados e multicelulares. Estruturas reprodutivas diferenciadas das vegetativas. Reprodução por meio de esporos (Esporos de reprodução). E aeróbios estritos.
Morfologia: 
Micélio = conjunto de hifas. Hifas: não-septadas, septadas mononucleares ou multinucleares (vários núcleos entre os septos). Podem ser vegetativas ou de reprodução . Septo evita transferência de material indesejado
.Saprófitas: se alimentam de resto. Conseguem digerir moléculas mais complexas (amido, celulose) por produção de enzimas. Fragmentos de esporos e hifas podem ser espalhados pelo vento.
-> teste do gram não funciona bem com fungos filamentosos pois células mortas emaranhadas e não vê nada.
Citologia:
.Parede celular: semelhante à levedura em termos de composição.
Possuem reserva de glicogênio como as leveduras.
.Organelas especificas: Corpúsculo de Woronin (tampona o septo com um poro central) e flagelos (para os aquáticos).
.Modo de crescimento: 
Oidias (enovelamento sob agitação, ocupando menos espaço, aumentando transferência de massa mas diminuindo difusão de nutrientes) e superficial (estática, formando tapete sobre meio de cultura para aumentar área com O2)
Reprodução: 
Assexuada (fragmentação, fissão de células somáticas ou produção de estruturas de reprodução) ou Sexuada (2 hifas diferentes ou a mesma hifa fazendo ramificação).
-> Na área industrial não deseja-se a reprodução sexuada pois gasta mais nutrientes para fazê-la e pode ter modificações maléficas para o processo.
-> Pode ter dois tipos de reprodução ao mesmo tempo.
Exigências fisiológicas e nutritivas:
	 
	 
	Fungos Filamentosos
	Bactérias
	pH
	limites
	2 a 9 **
	4 a 9 ***
	 
	ótimo
	5,6
	6,5 a 7,5
	T
	limites
	0-62 C
	0 - 80 C
	 
	ótimo
	22-30 C
	20 - 37 C
	Oxigênio
	 
	aerobios estrito
	aerobias, microaerofilas, anaerobias , ana. Facultativas
	Luz
	 
	nenhuma
	alguns grupos fotossinteticos
	Carbono
	 
	organico
	organico e inorganico
	[Carboidratos]
	 
	4%*
	0,5 - 1 %
* 4% porque tem necessidade de C orgânico e precisa de meio mais rico em açúcar 
** agüentam extremos de pH por isso bons produtores de ácidos
*** bacilos são bons produtores de ác. Lático mas tem que continuamente regular pH do meio.
Produzem antibióticos, ácido cítrico, maturação de queijos, enzimas, etc.
Actinomicetos
Procarioto (vulgarmente conhecidas por bactérias filamentosas), semelhanças morfológicas com fungos filamentosos (possuem micélio e esporos assexuais), semelhanças citológicas com bactérias (núcleo primitivo). Características próprias: reprodução por meio de esporos ou fragmentação, em geral imóveis, hifas finas, cheiro de terra molhada, resistem ao cloro (contaminando águas), elevado teor de Guanina – Citosina (material genético mais resistente). Gram só para coloração (não diferencia gram (+) e (-) – parede celular não é a mesma de bactéria não-filamentosa).
Morfologia macroscópica: 
Colônias esbranquiçadas, filamentos não são perceptíveis macroscopicamente, soltam pigmentos (meio fica escurecido), crescimento ressecado.
Citologia:
.Núcleo disperso – procarioto.
.Parede celular: além de camadas de peptídeoglicana, fora dela há ácidos micólicos junto a sacarídeos e lipídeos.
.Esporos endógenos – resistência e Esporos exógenos – reprodução 
.Possuem septo transversal
.Maioria gram positivo, o que não da nenhuma classificação taxonômica.
Teste para microorganismos álcool-resistentes: 
Bactérias resistentes a descoloração, mesmo por ácidos fortes diluídos e álcool absoluto são álcool resistentes. Devido ao alto teor de lipídios estruturais na parede celular, o que provoca hidrofobicidade, dificultando a ação dos mordentes. Teste de Ziejl-Neelsen: AAR – vermelho, não-AAR – azul (objetivo taxonômico).
Exigências fisiológicas e nutritivas:
Fonte de C orgânico – açúcares (não fazem fotossíntese)
Fonte de N – sais de amonio
Não exigentes em vitaminas (bom industrialmente pois torna meio de cultivo mais caro se precisasse e mais difícil de esterilizar pois alta T destrói vitaminas presentes)
Co2+ - esporulação ( se quiser esporular, botá-lo)
pH – 4,5-5,0 (semelhante a fungo)
T – mesofílica (ambiente)
Metabolismo lento – 7 a 14 dias (bactéria não filamentosa: 24 hrs. Industrialmente achar estratégias para crescer cultura separadamente)
Aeróbios estritos (maioria)
Aplicações: 
Antibióticos, vitamina B12 (única vitamina não produzida sinteticamente), enzimas, controle biológico (biocidas). => produtos de biossíntese (complexidade maior que o substrato).
.São produtos que são produzidos na faixa estacionaria de crescimento ( mais complexos) enquanto que produtos mais simples são produzidos na fase exponencial ( reações degradativas).
-> Microorganismos com metabolismo mais lento são bons para produtos mais complexos pois ficam mais tempo na fase estacionária. 
-> 1 reator para crescimento celular e outro para o produto.
Algas
Fotoautotróficas (algumas conseguem usar C orgânico), não necessitam de sistema vascular para transporte de nutrientes (diferente de plantas), maioria é móvel, coloração variada, reprodução variada (mecanismos vegetativos, assexuados e sexuais).
Encontradas em todas as partes do mundo (em ambientes constantemente úmidos).
Taxonomia:
Classificadas conforme: natureza dos pigmentos, natureza dos produtos de reserva e armazenamento, composição química da parede celular(outros microorganismos tem parede celular semelhantes entre si), morfologia e características das células e talos e flagelos.
Principais grupos:
.Todos os pigmentos são de grande interesse , consegue-se produzir sintético mas o produto natural é utilizado nas industrias de alimentos e produtos de beleza (todos os grupos produzem clorofila e carotenóide)
.Algas marrons produzem alginato (funciona como espessante)
.Algas douradas produzem material silicioso (são usadas como filtrante graças a presença de silício) 
.As que acumulam óleo são visadas para produção de biodiesel pois se reproduzem rápido e não competem por alimentos. Muito visadas para produção de combustível verde e ainda seqüestro de carbono (faz fotossíntese e usa CO2). Problemas de engenharia: muita célula, uma faz sombra na outra e pouca célula é muito diluído. Bioreator tem que ser transparente e não muito longo pra no meio não ter sombra.
Microalgas (bioreatores) X algas multicelulares (fazendas de algas)
Reprodução:
Sexuada (vegetativa – fragmentação, espórica ou gamética). Podem fazer esporângio por reprodução sexuada, conjugação, semelhante aos fungos, que diferem por terem esporos imóveis. Assexuada (mitose).
Citologia: 
Eucariótico, cloroplastos dispersos no citoplasma, pirenóide(síntese de produtos de reserva) e estigma (responsável pelo fenômeno de fototaxia).
Exigências fisiológicas e nutritivas:
H2O, CO2 e luz no meio são indispensáveis.
Fonte de energia: luz
Fonte de carbono: inorgânico ou orgânico (crescimento mais rápido mas nem todas as espécies tem essa capacidade)
Fonte de N: NO3- , uréia 
Fonte de P: inorgânico
Exigente em vitaminas
Micronutrientes: Mn2+, Mg2+, Na+, K+, Cl-
Aplicações: 
Vitaminas (A e D), alimentos (ricas vitaminas B1, C e K), alginato e agar, material filtrante (terras diatomáceas), tratamento de efluentes industriais(eutrofização: impede entrada de luz e perde cadeia alimentar presente), aqüicultura.
Cianobactérias: São procariotos e fazem fotossíntese. São bactérias fotossintetizantes. Apresentam metabolismo mais rápido que algas.
	 
	Cianobacteria
	Bacteria
	Clorofila
	Presente
	ausente
	O2 por fotossintese
	Sempre
	nunca
	flagelo
	Ausente
	presente
	complexidade morfologica
	Grande
	pequena
São gram (-): possuem paredes celulares pouco permeáveis aos antibióticos.
Produzem neurotoxinas
Reprodução: Assexuada por divisão binária (bactérias) ou por fragmentação (actinomicetos)
Controle de microorganismos
Esterilização – Eliminação total de todas as formas de vida de um material ou ambiente, através de métodos físicos ou químicos.
Desinfecção – Eliminação das formas vegetativas, mas não necessariamente as formas esporuladas, de microorganismos patogênicos presentes num material inanimado (superfícies inertes).
Sanitização – Diminuição da população microbiana ate níveis compatíveis com as exigências de saúde públicas (alimentos).
Assepsia – Procedimentos que visam evitar o retorno da contaminação a um objeto, superfície ou local.
Anti-sepssia – Desinfecção de tecidos vivos, como pele e mucosas.
Limpeza – Remoção de sujidades que indispensavelmente antecede os procedimentos de desinfecção ou esterilização.
-> Anti-sepssia (tecidos vivos) X Desinfecção (superfícies inertes) – tem ambos o objetivo de reduzir a carga microbiana e não eliminar.
Condições que afetam a atividade microbiana:
. tamanho da população (muito densa, maior T, mais agente desinfetante necessário)
.intensidade ou concentração do agente microbicida
.tempo de exposição ao agente
.temperatura (dependendo de T, agentes diferentes pois por ex.: etanol evapora a t altas)
.natural do material contendo os microorganismos
.características dos microorganismos (cada um tem metabolismo diferente)
.condições ambientais
Agentes físicos:
.Calor úmido (maior T, presença de água, menos tempo para destruir 100% pois tem H2O excitada)(com água usa T menor para obter mesmo efeito): Auto-clave (calor na forma de vapor d’água sob pressão, dependendo do tamanho tem transferência de calor diferente); Água em ebulição (destrói apenas formas vegetativas, não os esporos, reduz o potencial infeccioso); Tindalização (idem a ebulição mas fracionada: ferve 20min (mata vegetativa), espera 24 horas (esporos germinam), ferve novamente (mata esporos que germinaram), espera 24hrs e ferve de novo (desencargo de consciência)); Pasteurização (choque de temperatura, não esteriliza).
.Calor seco (oxidação das moléculas da célula): Fornos ou estufas (T mais elevada, sem água e tempo maior); Flambagem (combustão completa de microorganismos, aquecimento ao rubro na chama do bico de Bunsen 300-600oC); Incineração (combustão completa para descontaminação 1000oC)
.Radiação: Ionizante (raios X e gama) (retira elétrons da molécula criando H+, HO- e alguns peróxidos que causam lesões intracelulares – cadeia de ionização do DNA, é rápida); Não-ionizante (UV) (atua formando dímero de timina no DNA , é acumulativa, mais lenta)
.Filtração: barreira fixa (câmaras de fluxo laminar: ar filtra + radiação não-ionizante)
Agentes químicos:
Bactericida (mata microorganismos presentes num meio)
Bacteriostático (apenas inibe as atividade metabólicas dos microorganismos presentes no meio, o retirando, bactérias voltam a contaminar)
.Desinfetantes (compostos químicos para desinfecção): Fenol (0,5-1,0% anti-séptico, 5% desinfetante, 89% cauterizante) (coeficiente fenólico = 1, > 1 é mais eficiente) (alquil-fenóis aumentam ação microbiana e diminui toxicidade); Halogênios (agentes oxidantes, inibem as enzimas com grupos –SH e –NH2) (ex.: Cl2 e NaCl com H2O -> HOCl, custo barato e deixa residual); Ozônio (microbicida sem contaminantes, caro e não deixa residual); Desinfetantes surfactantes (diminui tensão superficial entre regiões de caráter polar e apolar); Agentes alquilantes (inativa as enzimas).
.Antisséptico (índice de toxicidade não deve ser maior que 1, não deve matar mais células eucarióticas que procariotas): Álcool (desnaturação de ptns, agente desidratante, antisséptico e desinfetante, maior ação em vegetativas que esporos, aumento da eficácia: 70% diluído em água, a qual potencializa sua entrada na célula); Iodo (forte agente oxidante, age sobre esporos, fungos e vírus, antisséptico eficaz); Hexaclorofeno (derivado do fenol); Peróxido de hidrogênio (antisséptico fraco, anti-sepsia de feridas pela liberação rápida de O2); agentes surfactantes (rompimento da membrana celular, altera permeabilidade celular, ex.: sabonete).
Métodos para avaliação da potencia anti-microbiana:
.mergulha cilindro numa cultura teste, biofilme é formado, retira e bota num lugar com concentração pré-definida do desinfetante. Para cada diluição, 5 tubos com o mesmo tipo. Cada diluição tem vários tempos de crescimento e cada tempo, 5 tubos. Ex.: 10 minutos: diluição 1-10 (5 tubos -), 1-100 (5 -), 1-1000 (3 -, 2 +), 1-10000 (5+) => usar a concentração mínima do agente químico para matar 100% dos microorganismos, nesse caso 1-100).
.comparar eficiência do desinfetante com a eficiência do fenol (1,0) (>1,0 é mais eficiente)
.cada agente pode ter métodos de ação diferentes.
Mutação:
É uma modificação de genes ou cromossomos, acarretando uma variação hereditária (alteração na sequência de nts do DNA, que codifica a informação contida na molécula e resulta na formação de PTN alteada, com atividade ou não).
.DNA linear para eucariotos e actinomicetos e circular para procariotos.
.Replicação só é ativada uma vez a casa ciclo maquinário de replicação, chamado de replicon. Em eucarioto, são vários e procariotos, só 1 replicon. Fita nova é feita no sentido 5’-3’, ligase junta os fragmentos de Okasaqui depois de tirar o primer. Girase tira torção, helicase abre dupla fita e SSB mantém aberta. Fitas sempre anti-paralelas e replicação em regime semi-conservativo. Erros nesse processo que não são reparados geram mutações e dão mudanças no genótipo, que pode ou não afetar o fenótipo. Esse erro só é detectado na 2ª geração (quando fita mutada é usada como molde).
.Alteração genética forçada põe também um gene que de um fenótipo para separar das outras e identificar sucesso (geralmente põe resistência a antibiótico)
.Bactérias trocam plasmídeo in vivo
.Só erros na replicação são passados para frente.
Mutação pontual (substituição de 1ntd por outro em um gene):
.Silenciosa – não altera os aminoácidos
.Misense – altera o aminoácido
.Nonsese – código de finalização é posto
Mutação frameshift (deslocamento do quadro de leitura, há a deleção/inserção de pares e altera os códons a serem lidos).
Mutação espontânea (sem causa aparente, rara, em células bacterianas ocorre a cada 106 a 1010 células).
Mutação Sítio-Dirigida (por ação humana, usa transposon, o qual tem poder de quebrar um cromossomo ou um plasmídeo e se inserir no meio, geralmente quebrando ou inativando um gene para entrar no meio, e contém um gene de transporase que faz a quebra e um gene que se deseja inserir) (sequência chave de pareamento nas pontas: há o pareamento, corta DNA, insere transposon e cola).
-> Mutação de DNA passa para geração seguinte, de RNA não.
-> Mutação é muito menos freqüente em eucariotos pois taxa de geração de bactérias é infinitamente maior. Em 80 anos tem-se 4 gerações de seres humanos e 2min debactérias.
Agentes mutagênicos:
.Químicos: 
Análogos estruturais (se encaixam na fita de DNA, mas fita parental não reconhece, então polimerase pode botar outra base qualquer ou não botar, cause mutação pontual)
Ácido nitroso (bloqueia duplicação do DNA ao remover grupos aminos das bases purina e primidina)
Agente alquilante (promovem reações de “cross-link” entre bases e impede abertura do DNA)
Agente intercalante (se intercalam entre bases nitrogenadas, deformam a fita de DNA ou provocam deslocamento do quadro de leitura)
.Físicos:
Radiações Ionizantes (gera radicais livres que provocam envelhecimento e em altas concentrações matam a célula) 
Radiações Não-Ionizantes (formação de dímeros entre bases primidinas adjacentes do mesmo filamento de DNA)
-> Polimerase repara alguns erros, mas se for excessivo, não consegue.
Mutação Sítio-Dirigida: Oligonucleotídeo que codifica nova fita é inserido na nova célula. Aplicação: tentativa e erro (muda ate dar algo que você quer, tiro no escuro e seleciona melhores mutantes)
-> Mutação na indústria tem o objetivo de aumentar o rendimento do processo.
-> Geralmente, uma amostra da cepa modificada e que será utilizada é armazenada num “banco de dados” internacional por longos períodos (evitar contaminação, mutação e manter viabilidade).
Conservação de microorganismos:
Evitar contaminação, mutações nas células e manter viabilidade para diminuir gastos (caso perca a célula) – diminui as atividades metabólicas.
Métodos de preservação:
.Transferência periódica para meios de cultura novos (repique contínuo, porém esta induzindo crescimento e possíveis mutações, tempo máximo = 6 meses)
.Culturas sob camada de óleo mineral (tempo máximo = 12 meses)
-Nessas duas técnicas o espaço ocupado é grande mas são métodos bastante simples.
.Secagem em suportes inertes (geralmente empregado para fungos, t máximo = 6 a 10 anos)
.Estocagem a baixa temperatura – congelamento (nitrogênio liquido (196oC), mas tem que usar agente crioprotetor, para deixar cristais de água não-pontiagudos senão estes podem perfurar e matar a célula, t máximo = 20 anos)
.Liofização (amostra pré-congelada com solução crioprotetora, retira água e a deixa completamente seca, t máximo = 10 a 20 anos)
Ativação de microorganismo: Repiques sucessivos, Choque térmico (cepas resistentes ao calor), Radiação