Micro contagem

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CURSO: TECNOLOGIA EM SANEAMENTO AMBIENTAL 
PROFESSORA: HOSINEIDE ROLIM 
DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA BASICA 
ALUNOS: SAMUEL OLIVEIRA DE SOUSA, MATHEUS ÉRIC DE OLIVEIRA 
LOPES, RODOLFO EDIBERTO, MARIA LARISSA BEZERRA DE OLIVEIRA 
 
 
CONTAGEM PADRÃO DE BACTÉRIAS HETEROTRÓFICAS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
1. INTRODUÇÃO 
O método de contagem de microrganismos em placa é um método 
geral, que pode ser utilizado, tanto para a contagem de grandes grupos 
microbianos, como os aeróbios mesófilos, os aeróbios psicrotróficos, os bolores 
e as leveduras e os clostrídios sulfito redutores, como também para a contagem 
de gêneros e espécies em particular, como Staphylococcus aureus, Bacillus 
cereus e Clostridium perfringens, por exemplo. Essa versatilidade é decorrente 
do princípio do método, que se baseia na premissa de que cada célula 
microbiana presente em uma amostra irá formar, quando fixada em um meio de 
cultura sólido adequado, uma colônia visível e isolada. Variando o tipo de meio 
(meio de enriquecimento, meio seletivo, meio seletivo-diferencial) e as condições 
de encubação (temperatura e atmosfera), é possível selecionar o grupo, gênero 
ou espécie que se deseja contar. O método convencional de contagem de 
microrganismos consiste basicamente no plaqueamento de alíquotas do produto 
homogeneizado e de suas diluições em meios de cultura sólidos, 
adequadamente selecionados em função do microrganismo a ser enumerado. O 
plaqueamento pode ser feito por semeadura na superfície do meio de cultura 
previamente distribuído em placas de Petri estéreis (semeadura em superfície), 
ou então o meio de cultura pode ser adicionado após a transferência das 
alíquotas para as placas de Petri vazias (semeadura em profundidade). As 
placas são então incubadas a uma combinação de tempo e temperatura 
adequada para a determinação a ser feita, durante a qual os microrganismos se 
multiplicam formando as colônias visíveis, que podem ser enumeradas 
manualmente ou com o auxílio de contadores automáticos. Apesar da aparente 
simplicidade dessa técnica, ela é bastante trabalhosa e sujeita a erros, levando 
em consideração que: os microrganismos estão arranjados em pares, tétrades, 
cadeias e cachos, consequentemente, o número de colônias que aparece na 
placa não corresponde ao número de células individuais presentes, além disso, 
quando muitas diluições precisam ser plaqueadas também pode haver erros, 
bem como algumas partículas de alimentos podem ser confundidas com 
colônias, levando a um falso resultado positivo, sendo a leitura dos resultados 
bastante difícil, pois pode variar de acordo com o analista, além de ser cansativa 
e imprecisa, mesmo quando contadores automáticos são empregados [1]. 
Os organismos vivos existentes no planeta são inúmeros tendo 
características específicas como as bactérias heterotróficas com reduzido 
tamanho, mas importância grande sendo encontradas em todas as regiões do 
mundo, de maneira geral, são organismo de pequeno tamanho, procarionte 
podendo ser autotróficas quando produzem seu próprio alimento ou 
heterotróficas quando não tem a capacidade de produzir o seu próprio alimento. 
No segundo caso, as bactérias do tipo heterotróficas são alimentadas por meio 
do consumo de moléculas orgânicas que vem de outros tipos de seres vivos e 
em sua alimentação pode ser saprófitas ou ainda parasitas. Quando as bactérias 
do tipo heterotróficas são parasitas as mesmas obtêm o seu alimento causando 
doenças em outros organismos vivos como sífilis, coqueluche, leptospirose, 
cólera, gonorreia e outras. Já as bactérias heterotróficas que são saprófitas se 
referem aos fungos, por exemplo, que obtêm o seu alimento a partir do processo 
de decomposição de matéria orgânica e por isso acabam usando cadáveres de 
plantas, animais e outros tipos de matéria orgânica. Uma vez obtido o seu 
alimento o mesmo vai passar no interior das bactérias do tio heterotróficas por 
duas possibilidades de processos que podem ser neste caso a fermentação a 
qual é utilizada para degradar moléculas orgânicas liberando pequenas 
quantidades de energia. No caso específico destes organismos as bactérias 
realizam a chamada fermentação láctica na qual os glicídios são transformados 
em ácido láctico que é usado na criação de alimentos como queijos, iogurtes e 
outros derivados do leite a partir desta modalidade de bactérias. Desta maneira, 
as bactérias heterotróficas são organismos vivos de reduzido tamanho, mas com 
características importantes sendo relevantes não apenas para a natureza mas 
para a vida do homem em si por variadas razões [2]. 
 
2. OBJETIVO DO EXPERIMENTO 
Determinar o número de colônias de bactérias presente na suspensão 
através dos métodos de contagem em placa. 
3. MATERIAIS UTILIZADOS 
a) Placas de Petri com meios de cultura; 
b) Pipetas; 
c) Tubos de ensaios; 
d) Bico de Busen; 
e) Alça de Drigalski. 
 
4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 
4.1. Spread-plate 
a) Inoculou-se 0,5ml da amostra, em seguida, foi espalhada pela 
superfície do meio de cultura sólido contido na placa de Petri com 
a alça de Drigalski até ficar homogênea; 
b) Esperou-se secar; 
c) Inverteu-se a placa, em seguida, ela foi encubada por 48 horas em 
uma temperatura entre 35ºC e 37ºC; 
d) Realizou-se a contagem das colônias. 
4.2. Pour-plate 
a) Inoculou-se 1ml da amostra; 
b) Fundiu-se os tubos com Agar e manteou-se a 45ºC em banho-
maria; 
c) Despejou-se o conteúdo do tubo em uma placa, em seguida, 
colocou-se a amostra; 
d) Homogeneizou-se o meio de cultura com movimentos circulares 
em forma de oito e esperou-se solidificar; 
e) Inverteu-se a placa, em seguida, ela foi encubada por 48 horas em 
uma temperatura entre 35ºC e 37ºC; 
f) Realizou-se a contagem das colônias. 
 
5. RESULTADOS E DISCUSSÕES 
Realizou-se a contagem propriamente dita na semana seguinte, após 
dar o tempo das bactérias se multiplicarem. A contagem tanto para superfície, 
quanto para profundidade, é feita com auxílio da lupa e da caneta marcadora 
azul. Foi possível contar 45 colônias de bactérias em uma das placas de Petri. 
 
FIG. 1- Meio de cultura com colônias de bactérias após a contagem. 
 
 
 
 
 
6. CONCLUSÕES 
Foi possível perceber que as técnicas spread-plate e pour-plate são 
importantes, pois permitem quantificar bactérias e que as diluições da amostra 
são feitas para viabilizar a contagem de microrganismos, dessa forma se torna 
um importante instrumento que pode auxiliar no controle bacteriológico, na 
avaliação das condições de higiene e de proteção de poços, fontes, 
reservatórios, piscinas e sistemas de distribuição de água para consumo 
humano. 
 
7. BIBLIOGRAFIA 
1. Contagem de bactérias totais, Felipe Carvalho, Nayara Louise. Universidade 
federal da paraíba. Centro de tecnologia. Departamento de engenharia de 
alimentos. 
2. Bactérias Heterotróficas, disponível em: 
http://www.clickescolar.com.br/bacterias-heterotroficas.htm. Acesso: 04 de 
Outubro de 2016.