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02/12/2013 1 UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALFENAS – UNIFAL-MG INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOMÉDICAS DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA Microbiologia Geral Profa. Drª Ingridy Ribeiro Cabral REPRODUÇÃO E CRESCIMENTO MICROBIANO TIPOS DE REPRODUÇÃO ASSEXUADA • Fissão binária transversal • Brotamento • Fragmentação • Formação de exósporo 02/12/2013 2 Etapas da Fissão Binária Transversal 1- Elongação da célula parental 2- duplicação do cromossomo 3 - Distribuição do cromossomo e material celular. Formação do septo 4- Separação das células 1 2 3 4 Fissão binária transversal em E. coli 02/12/2013 3 Brotamento: Rhodopseudomonas acidophila Fragmentação: Nocardia sp 02/12/2013 4 Formação de exósporo: Streptomyces (actinomiceto-conídios) Curva padrão de crescimento Sistema fechado • Nenhum nutriente é adicionado ao meio • Nenhum produto de excreção é removido • As células se dividem por fissão binária • Número de células aumenta por um período de tempo, até que os nutrientes cessem ou até que o produto de excreção se acumulem em quantidades suficientes para que o crescimento posterior seja interrompido. 02/12/2013 5 CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO Log do n° de células viáveis x Tempo Imediatamente após a inoculação da bactéria no meio de cultura “novo” Ocorre síntese de proteínas, enzimas, RNA, e outras substâncias e, também, aumento da atividade metabólica. O tempo da fase depende da quantidade de inóculo usada; do tempo necessário para recuperação pela transferência e síntese de co-enzimas e enzimas A taxa de crescimento é nula LAG OU DE FASE DE ADAPTAÇÃO 02/12/2013 6 Condições de crescimento balanceado As células se dividem a uma taxa constante, em progressão geométrica, dependendo das condições de incubação e composição do meio de cultura A taxa de crescimento é máxima e constante. As células são uniformes em composição química e atividades metabólicas e fisiológicas Pico da atividade e eficiência fisiológica FASE LOG OU EXPONENCIAL FASE ESTACIONÁRIA O crescimento da população bacteriana é limitado pela exaustão dos nutrientes, intoxicação pelos produtos de excreção e falta de espaço Algumas células ainda se dividem e outras morrem Começa a diminuir o número de células viáveis. A taxa de crescimento é zero. 02/12/2013 7 FASE DE MORTE OU SENESCÊNCIA Acúmulo adicional de produtos metabólicos inibitórios e depleção dos nutrientes essenciais A taxa de crescimento é zero e a de morte é acelerada O número de células viáveis diminui de forma exponencial Métodos para quantificar o crescimento bacteriano DIRETOS INDIRETOS contagem em placa; filtração; NMP; contagem no microscópio turbidimetria; atividade metabólica; peso seco 02/12/2013 8 DIRETOS 1. Contagem em placa e diluição em série 2. Contagem em placa: “pour plate” e espalhamento 02/12/2013 9 3. Filtração 4. Número mais provável 02/12/2013 10 5. Contagem direta ao microscópio Um volume conhecido de uma suspensão bacteriana é colocado em uma área definida da lâmina de microscópio Uma amostra de 0,01 mL é espalhada na superfície de 1 cm da lâmina e um corante é adicionado Após a contagem de diferentes regiões da lâmina a média do número de bactérias pode ser determinado – multiplicado por 100 (para se determinar em mL) 02/12/2013 11 INDIRETOS 1. Turbidimetria • Quando uma bactéria de multiplica em meio líquido, esse meio fica turvo ou com alta densidade de células • Utilização do espectrofotômetro 2. Atividade metabólica • Assume que a quantidade de um produto metabólico determinado (ácido ou CO2) é diretamente proporcional ao número de bactérias presentes 3. Peso seco • Usado pra medir a quantidade de micro-organismo • O MO é removido do meio de crescimento, filtrado (ou centrifugado) e seco em dissecador, sendo então pesado.
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