aula prática de triglicerídeos e colesterol

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TRIGLICÉRIDES
Este exame faz parte do perfil lipídico, usado para avaliar doença cardíaca.
Método: Enzimático - Trinder
Material Biológico: Soro (jejum de 12 horas)
Princípio:
Os triglicerídeos são determinados de acordo com as seguintes reações:
lipoproteína
 
lipase
Triglicérides glicerol + ácidos graxos
Glicerol 
quinase
Glicerol + ATP glicerol -3-fosfato + ADP
Glicerol-3-fosfato-oxidase
glicerol -3-fosfato + O2 H2O2 + fosfato
peroxidase2 H2O2 + 4 aminoantipirina + 4-clorofenol cromógeno cereja (quinoneimina) + 4 H2O
A intensidade da cor cereja formada é diretamente proporcional à concentração de triglicérides presentes na amostra.
Reativos:
Reagente nº1: Reagente enzimático – Conservar entre 2 a 8 ºC. Contém:Tampão, 4-clorofenol, lípase lipoprotéica, glicerol quinase, peroxidase, glicerol 3-fosfato oxidase, ainoantipirina, ATP, ativador, estabilizante, surfactante e conservante. 
 Reagente nº 2: - Conservar entre 2 a 8 ºC . Contém Triglicérides 100,0 mg/dL e diluente. 
Técnica:
Em tubos de ensaios marcados, Branco, Padrão, Controle e Amostra pipetar:
	
	Branco
	Padrão
	Amostra 1
	Amostra 2
	Amostra
	---
	---
	20 μL
	20 uL
	Padrão
	---
	20 μL
	---
	---
	Água deionizada
	20 μL
	---
	---
	---
	Reativo de trabalho 
	2,0 mL
	2,0 mL
	2,0 mL
	2,0 mL
Misturar e colocar os tubos no Banho-Maria a 37ºC durante 10 minutos. Ler em 500 nm. A cor é estável por 30 minutos.
Cálculos:
Absorbância Amostra x conc. Padrão = mg/dL
Absorbância Padrão
Observação: nunca libere os resultados de triglicérides sem observar o aspecto do soro.
Procedimento: deixar o soro ou plasma em repouso a 4ºC durante 16 a 24 horas e observar o aspecto do mesmo. A presença de uma camada cremosa de superfície indica presença de quilomícrons (TG exógenos).
	Aspectos do soro
	Interpretação
	Límpido
	TG < 200 mg/dL
	Turbidez leve
	TG ± 300 mg/dL
	Lactescência ou Turbidez intensa
	TG > 600 mg/dL
	Leitoso
	TG > 1000 mg/dL
Interpretação dos resultados:
	
	Desejável
	Limite
	Elevado
	Muito elevado
	Crianças e adolescentes (2-19 anos)
	≤ 100 mg/dL
	100- 129 mg/dL
	>130 mg/dL
	
	Adultos (>20 anos)
	< 150 mg/dL
	150 - 200 mg/dL
	200 – 499 mg/dL
	≥500 mg/dL
Observações:
Este método obedece a Lei de Lambert Beer até 1000 mg/dL. Para valores maiores diluir a amostra com NaCl 0,85% e repetir a determinação. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 100 e 250 mg/dL.
O produto colorido é estável por 30 minutos.
O triglicéride é estável no soro por 2 dias entre 2-8ºC.
A presença de hemoglobina (> 180 mg/dL) promovem positivas no resultado do TG. Realizar Branco Amostra. 
Níveis elevados de ascorbato (vitamina C) e bilirrubina acima de 5 mg/dL produzem interferências negativas. Esta interferência pode ser eliminada mantendo-se o soro na temperatura ambiente por um mínimo de 90 minutos antes da realização da dosagem.
Algumas substâncias como álcool, contraceptivos orais e estrógenos elevam os valores de triglicerídeos.
Patologia Clínica:
Aumento: hiperlipidemias primárias e secundárias (Diabetes Mellitus, alcoolismo, síndrome nefrótica, insuficiência renal crônica).
COLESTEROL TOTAL
Este exame faz parte do perfil lipídico, usado para avaliar doença cardíaca.
Método: Enzimático Colorimétrico
Material Biológico: Soro 
Lipoproteína 
lipasePrincípio:
Ésteres de colesterol colesterol + ácidos graxos
colesterol + O2 colesterol-3-ona + H2O2
Colesterol oxidase
2 H2O2 + 4 aminoantipirina + fenol cromógeno cereja + 4 H2O
peroxidase
A intensidade da cor cereja formada é diretamente proporcional à concentração de colesterol presentes na amostra.
Reativos:
Reagente nº1 – reagente enzimático: Conservar entre 2-8ºC.
O reativo de trabalho contém: tampão 75 mmol/L, pH 7,0; fenol 4,5mmol/L; lipoproteína lipase ≥ 700 U/L; colesterol oxidase ≥ 200 U/L; peroxidase ≥ 300 U/L; 4-aminoantipirina 0,3 mmol/L; colato de sódio 0,5 mmol/L; azida sódica 1,54 mmol/L.
Reagente nº2: Conservar entre 2-8ºC. Contém colesterol 200,0 mg/dL. Evitar o contato com mucosas e pele. Pipetar com cuidado.
Técnica:
Em tubos de ensaios marcados, Branco, Padrão e Amostra pipetar:
	
	Branco
	Padrão
	Amostra 1
	Amostra 2
	Amostra
	---
	---
	20 μL
	20 μL
	Padrão
	---
	20 μL
	---
	
	Água deionizada
	20 μL
	---
	---
	
	Reativo de trabalho 
	2,0 mL
	2,0 mL
	2,0 mL
	
Misturar e colocar os tubos no Banho-Maria a 37ºC durante 10 minutos. Ler em 500 nm. A cor é estável por 30 minutos.
Cálculos:
Absorbância Amostra x conc. Padrão = mg/dL
Absorbância Padrão
Interpretação dos resultados:
	
	Desejável
	Limite
	Elevado
	Crianças e adolescentes (2 a 19 anos)
	< 150 mg/dL
	150-1699 mg/dL
	≥ 170 mg/dL
	Adultos (≥ 20 anos)
	< 200 mg/dL
	200-239 mg/dL
	≥ 240 mg/dL
Observações:
Este método obedece a Lei de Lambert Beer até 500 mg/dL. Para valores maiores diluir a amostra com NaCl 0,85% e repetir a determinação. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 150 e 300 mg/dL.
O produto colorido é estável por 30 minutos.
 A amostra de soro deve ser separada dentro de 2 horas da colheita do sangue. O colesterol é estável por 7 dias entre 2-8ºC e por 5 anos a -20ºC. Misturar bem as amostras lipêmicas antes de iniciar a dosagem. Não utilizar amostras fortemente hemolisadas.
Anticoagulantes como citrato, oxalato ou EDTA produzem resultados falsamente diminuídos. Usar heparina caso faça opção pelo plasma.
Hemoglobina (> 180 mg/dL) e triglicérides (> 2600 mg/dL) causam interferências positivas. A interferência da hemoglobina pode ser corrigida com a utilização de brancos amostra. 
Níveis elevados de ascorbato (vitamina C) produzem interferências negativas. Esta interferência pode ser eliminada mantendo-se o soro na temperatura ambiente por um mínimo de 90 minutos antes da realização da dosagem.
Patologia Clínica:
Aumento: hiperlipidemias primárias e secundárias (hipotireoidismo, icterícia obstrutiva, síndrome nefrótica, insuficiência renal crônica).
Diminuição: lesões hepáticas severas, hipertireoidismo, desnutrição crônica, hipolipoproteinemias.