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ENTEROBACTÉRIAS Profa. Andréa Mendonça Gusmão Cunha Introdução Família: Enterobacteriacea Gêneros: Proteus, Shiguella, Salmonella, Escherichia… Espécies Morfologia: – Bastonetes Gram -, não esporulam, flagelo e cápsula variável. Isolamento de enterobactérias Generalidades – Bacilos Gram negativos – Móveis ou imóveis – Capsulados ou não – Não esporulados – Aeróbio ou anaeróbio facultativo – Fermentam carboidratos com ou sem produção de gás – Reduzem nitratos a nitritos – Oxidase negativa Características das Enterobactérias Fermentam glicose São oxidase negativas Reduzem Nitratos a Nitritos Isolamento de enterobactérias Cultivo – Não exigentes – 37ºC / 24h – Sensíveis ao calor (60ºC/20min) – Sensíveis aos desinfetantes comuns – Meios diferencias e seletivos Fermentação de carboidratos Resistentes a sais biliares, cloreto de sódio, corantes… Patogenia Extra-intestinais Infecções Intestinais Sistêmicas Localizadas Diagnóstico Bacteriológico Amostras clínicas: Isolamento e Identificação Isolamento primário: – Meios seletivos e ou diferenciais: Ágar Eosina Azul de Metileno (EMB) Mac Conkey Ágar Salmonella Shiguella (SS) Ágar Verde Brilhante (VB) Ágar de Hektoen (HE) Ágar xilose-Lisina-Desoxicolato (XLX) Como semear nos meios para isolamento primário: EMB, Mac Conkey, SS e VB. São meios sólidos em placa: ESGOTAMENTO. Semeadura por Esgotamento Esgotamento ou Estrias Faz-se o inóculo num ponto da superfície do meio espalhando-se o mesmo por estrias em toda a placa, de modo a gradativamente esgotar o material contido no inóculo. De preferência dividi-se a placa em 4 quadrantes. A estria do último quadrante ocupa a maior parte da placa. Alternativamente pode-se fazer 3 estrias, a primeira ocupando metade da placa e as outras duas um quarto da placa cada. Neste modo as estrias não se tocam. Este tipo de semeadura é empregado para o isolamento de colônias bacterianas e obtenção culturas puras. Meio EMB de Levine Composição: Peptona, Lactose, Fosfato de potássio, Eosina, Azul de metileno, ágar e água. EMB de Holt-Harris (+ sacarose) Meio seletivo e diferencial Resultado: – E. coli: colônias pretas c/ brilho verde metálico – Fermentadores de Lactose: colônias púrpuras (rosas a marrom) – Não fermentadores de Lactose: colônias transparentes Ágar EMB EMB Mac Conkey Composição: Peptona, polipeptona, Lactose, sais biliares, cristal violeta, vermelho neutro, cloreto de sódio, ágar, água. Meio seletivo e diferencial Resulatado: – Fermentam Lactose: colônias vermelhas/ rosas (vários tons). – Não fermentam Lactose: colônias incolores, amareladas. Mac Conkey Ágar Mac Conkey Ágar SS Composição: peptona, extrato de carne, lactose, sais biliares, citrato de sódio, vermelho neutro, tiossulfato de sódio, citarto ferrico, ágar e água. Meio seletivo e diferencial Resultado: – Lactose +: colônias vermelhas – Salmonella: colônias incolores com centros negros (Lactose -) – Shiguella: colônias incolores (Lactose -) Ágar Verde Brilhante Composição: extrato de leveduras, lactose, sacarose, vermelho de fenol, verde brilhante, ágar, água. Meio seletivo e diferencial Resultado: – Salmonella sp.: colônias branca a vermelha (rosadas) com halo vermelho. – Klesbsiella: colônias amareladas ou não crescem – Não crescem: Enterobacter, Proteus, Shiguella, Gram+.
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