Aula 4 - Meios de cultura

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27/03/2014 
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Microbiologia 
Aula 4 
 Meios de Cultura 
Prof. Dr. Agenor Messias Silvestre Jr 
agenor@uninove.br 
Meios de Cultura – Semeadura e 
Crescimento Bacteriano 
 Meios de Cultura (cultivo) são materiais nutritivos preparados em 
laboratório que permitem o crescimento (aumento em quantidade) 
de microrganismos. 
 
Quando microrganismos são colocados em um meio de cultura 
para iniciar seu crescimento, são chamados de INÓCULO. E, ao 
crescer, formam COLÔNIAS (agrupamentos bacterianos) visíveis. 
 
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 Até cerca de 1880 os microrganismos eram mantidos em 
laboratório em extratos (caldos nutritivos), até que Robert Koch e 
colaboradores introduziram os meios de cultura sólidos, os quais 
permitiram o estudo de espécies isoladas (culturas puras) de 
bactérias, separando-as de espécies contaminantes. 
 
 Quando se deseja o crescimento de bactérias em um meio 
sólido, um agente solidificante denominado AGAR (polissacarídeo 
extraído de algas marinhas) é adicionado ao meio que será 
posteriormente distribuído em tubos de ensaio ou placas de Petri. 
Meios Sólidos, Semi-Sólidos e Líquidos 
Agar- Agar 
desidratado 
algas marinhas 
: 
 
 SÓLIDOS, quando contêm agentes solidificantes como o 
AGAR, sendo utilizados para visualização de colônias; 
[ ] maior que15g/1000ml. 
 
SEMI-SÓLIDOS, quando a quantidade de AGAR é 
pequena, dando uma consistência intermediária de modo a 
permitir o crescimento de microrganismos em concentrações 
variadas de oxigênio ou para verificação da motilidade 
(presença de flagelos); [ ] menor que 15g/1000ml; 
 
 LÍQUIDOS (CALDOS), quando não possuem agente 
solidificantes, apresentando-se de forma líquida, utilizados 
para o enriquecimento das culturas, repiques de 
microrganismos, entre outros. 
Meios Sólidos, Semi-Sólidos e Líquidos 
Os meios de cultura são classificados então, quanto ao seu estado físico, em 
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 MEIO QUIMICAMENTE DEFINIDO 
 
Um meio quimicamente definido é aquele em que a procedência 
dos constituintes é conhecida e a composição química exata é 
conhecida. 
 
 MEIO DE CULTURA COMPLEXO. 
 
Muitas bactérias desenvolvem-se em meios complexos, cuja 
composição química não é definida, compostos de nutrientes 
como extratos de levedura, de carne, de vegetais, produtos de 
digestão protéica, sangue e outros. A composição química exata 
pode conter pequenas variações em diferentes culturas do 
produto. 
 
Composição dos meios de cultura 
 MEIO DE CULTIVO SELETIVO 
 
Os meios seletivos contêm substâncias que inibem o 
desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, 
permitindo o crescimento de outros. São elaborados com o 
objetivo de favorecer o crescimento da bactéria de interesse e 
impedir o crescimento das outras bactérias; 
 
 MEIO DE CULTIVO DIFERENCIAL 
 
Meio diferencial é aquele que contém substâncias que 
permitem estabelecer diferenças entre bactérias parecidas, 
sendo utilizado para a fácil identificação da colônia da bactéria 
de interesse quando existem outras bactérias crescendo 
na mesma placa de meio de cultura. 
Composição dos meios de cultura 
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Meios de cultura 
ÁGAR SANGUE 
 A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a 
formação de halos de hemólise nítidos, úteis para a 
diferenciação de Streptococcus spp. E Staphylococcus 
spp. 
 
PRINCÍPIO: 
 
 Usado para o isolamento de 
microrganismos não fastidiosos. 
Verificação de hemólise dos 
Streptococcus spp. e 
Staphylococcus spp. 
Cor original do meio: vermelho 
Meios de cultura 
ÁGAR SANGUE : Cor original do meio: vermelho. 
 
 Beta hemólise: presença de halo 
transparente ao redor das colônias 
semeadas (lise total dos eritrócitos). 
 
 Alfa hemólise: presença de halo 
esverdeado ao redor das colônias 
semeadas (lise parcial dos 
 eritrócitos). 
 
 Gama hemólise (sem hemólise): 
ausência de halo ao redor das colônias 
(eritrócitos permanecem 
 íntegros). 
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Meios de cultura 
ÁGAR MAC CONKEY 
 
PRINCÍPIO 
 
O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram 
positivos especialmente enterococos e estafilococos. 
 
 A concentração de sais de bile é relativamente baixa em 
comparação com outros meios, por isso não é tão seletivo 
para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS. 
 
FUNÇÂO: Isolar bacilos Gram negativos 
Meios de cultura 
ÁGAR MAC CONKEY 
 
INTERPRETAÇÃO 
 
 Cor original do meio: rosa avermelhado. 
 Crescimento de bacilos Gram negativos. 
 Colônias cor de rosa: fermentadoras de lactose. 
 Colônias incolores: não fermentadoras de lactose. 
 Não há crescimento de cocos Gram positivos. 
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Meios de cultura 
ÁGAR MAC CONKEY 
 
Lac+ Lac- 
Meios de cultura 
ÁGAR CLED – 
CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT 
 
PRINCÍPIO 
 
Usado para isolamento e quantificação de microrganismos 
presentes em amostras urina. A deficiência de eletrólitos 
inibe o véu de cepas de Proteus. 
 
FUNÇÂO: 
 
Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram 
negativos e leveduras. 
 
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Meios de cultura 
ÁGAR CLED – CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE 
DEFICIENT 
INTERPRETAÇÃO: 
 
 Cor original do meio: azul claro. 
Colônias lactose positiva: cor amarela. 
Colônias lactose negativa: cor azul. 
Meios de cultura 
CALDO BHI – BRAIN HEART INFUSION 
 
PRINCÍPIO 
 
 É um meio derivado de nutrientes de cérebro e 
coração, peptona e dextrose. 
 A peptona e a infusão são fontes de nitrogênio, 
carbono, enxofre e vitaminas. 
A dextose é um carboidrato que os microrganismos 
utilizam para fermentação. 
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Meios de cultura 
CALDO BHI – BRAIN HEART INFUSION 
PRINCÍPIO 
 
Função: 
 
 Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, 
meningococos, enterobactérias, não fermentadores, 
leveduras e fungos. 
 
 Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de 
susceptibilidade aos antimicrobianos, para realização de teste 
de coagulase em tubo, para teste de crescimento bacteriano 
a 42 e 44°C e para teste de motilidade em lâmina. 
Meios de cultura 
CALDO BHI – BRAIN HEART INFUSION 
PRINCÍPIO 
INTERPRETAÇÃO 
 
 Cor original do meio: 
amarelo claro, límpido. 
 
 Positivo: presença de 
turvação = crescimento 
bacteriano. 
 
 Negativo: ausência de 
turvação. 
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Meios de cultura 
LÖWENSTEIN JENSEN 
 
PRINCÍPIO: 
 
 A base do meio é constituída por ovos integrais, o 
que permite amplo crescimento das micobactérias e 
o crescimento é satisfatório para o teste de niacina 
(que é positivo para Mycobacterium tuberculosis). 
 
Função: 
 
 Isolamento primário das micobactérias. 
Meios de cultura 
LÖWENSTEIN JENSEN 
 
INTERPRETAÇÃO: 
 
 
 Cor original do meio: verde claro 
 
Positivo: Crescimento de colônias 
amarelas 
 
 Negativo: ausência de crescimento. 
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Meios de cultura 
LÖWENSTEIN JENSEN 
Controle de Qualidade 
 Uma amostra do lote deve ser 
inoculada e observada para testar 
viabilidade dos nutrientes e certeza de 
resultados. 
 
Ex: Estreptococos grupo A em ágar 
sangue – observar bom crescimento e 
beta-hemólise. 
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Medidas Assépticas para a 
Inoculação do Meio de Cultura 
Alças flambadas antes e depois; 
 
 Deve-se esperar o resfriamento; 
 
Os recipientes contendo meios deverão ser abertos 
somente na zona de esterilidade gerada pelo Bico de 
Bunsen; 
 
 A boca dotubo de ensaio deve ser aquecida antes e 
depois de ser retirada a tampa, 
 
A rolha nunca deve ser apoiada na bancada; 
Inoculação 
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 As cabines de fluxo laminar são unidades 
projetadas para criar áreas de trabalho estéreis 
para a manipulação, com segurança, de materiais 
biológicos ou estéreis que não possam sofrer 
contaminação do meio ambiente. Utilizam um 
filtros de alta eficiência – filtro HEPA. 
 
 Nos fluxos da classe II que o manipulado não 
contamine o operador e o meio ambiente. 
Cabinas de fluxo laminar 
 Inoculação pour-plate 
• O objetivo é obter colônias isoladas (estudo 
qualitativo) para realizar a contagem de colônias 
(estudo quantitativo) 
Espécime 0,1 ml 
+ 9,9 ml 
 
= 1:100 
 
0,1 ml 
+ 9,9 ml 
 
= :10.000 
 
0,1 ml 
+ 9,9 ml 
 
= 1:1.000.000 
 
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Plaqueamento - pour-plate 
Espécime 0,1 ml 
+ 9,9 ml 
= 1:100 
 
0,1 ml 
+ 9,9 ml 
= :10.000 
 
0,1 ml 
+ 9,9 ml 
= 1:1.000.000 
 
 1 ml 1 ml 1 ml 
 ágar + incubação