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Classificação dos Meios de Cultura Artificiais Meios de cultura artificiais • INTRODUÇÃO • Os meios de cultura artificiais são preparados especiais com finalidade de fazer cultivo e isolamento de microrganismos. • Algumas bactérias podem crescer bem em qualquer meio de cultura; outras requerem meios especiais (bactérias exigentes), e outras podem nem crescer. • Microrganismos que são introduzidos (inoculados) em um meio de cultura para iniciar o crescimento são chamados de inóculo. • Microrganismos que crescem e se multiplicam dentro ou sobre um meio de cultura são denominados cultura. • Colônia é um conjunto de bactérias visíveis a olho nu. Meios de cultura artificiais • Critérios para o crescimento de microrganismos em meios de cultura: • Componentes nutricionais corretos, em quantidades e proporções • Macronutrientes: Carboidratos, proteínas, lipídios • Micronutrientes: Sais minerais • Condições adequadas de incubação • Temperatura – 36,5ºC a 37ºC • Aerobiose ou anaerobiose • pH – 6,5 a 7,5 • Esterilidade • Salinidade • Concentração ideal de NaCl Estufa bacteriológica Meios de cultura artificiais • Não existe um meio de cultura universal para o crescimento de todos os microrganismos: • Ex: Treponema pallidum e Micobacterium leprae Obs: Estes microrganismos só podem ser cultivados em animais de laboratório Meios de cultura artificiais • Classificação dos meios de cultura: Classificação de acordo com o objetivo funcional Meios de Cultura Estado físico Estado sólido Estado semi- sólido líquido Procedências dos constituintes Naturais Artificiais Composição química Simples Especiais Naturais Artificiais Meios de transporte e conservação Meio de crescimento ou isolamento Meios de enriquecimento Meios diferenciais Meios seletivos Meios para provas de identificação Meios para testes de sensibilidade antimicrobiana Meios de cultura artificiais • Classificação de acordo com o estado físico: • Meios líquidos ou caldos: • Não tem agente solidificante: nutrientes dissolvidos em solução aquosa. • Não há formação de colônias • Usado para aumentar o numero de microrganismos e para provas bioquímicas. Meios de cultura artificiais • Classificação de acordo com o estado físico: • Meios Sólidos • Adição de uma substância solidificante (ágar-ágar) em determinada quantidade (1 a 2%) • Superfície endurecida – permite formação de colônias • Para distinção da morfologia, isolamento de colônias, conservação de cepas Ágar-ágas (polímero de galactose) extraído de algas marinhas vermelhas, que é acrescentado aos meios para torná-los sólidos ou semi-sólidos, não tem valor nutritivo e não é utilizado pelas bactérias Meios de cultura artificiais • Classificação de acordo com o estado físico: • Meios semi-sólidos • Adição de agente solidificante (ágar-ágar) em menor quantidade (0,5 a 0,8%) • Usados para estudar motilidade bacteriana e testes bioquímicos Meios de cultura artificiais • Classificação dos meios de cultura: Classificação de acordo com o objetivo funcional Meios de Cultura Estado físico Estado sólido Estado semi- sólido líquido Procedências dos constituintes Naturais Artificiais Composição química Simples Especiais Naturais Artificiais Meios de transporte e conservação Meio de crescimento ou isolamento Meios de enriquecimento Meios diferenciais Meios seletivos Meios para provas de identificação Meios para testes de sensibilidade antimicrobiana Meios de cultura artificiais • Classificação de acordo com a procedência dos constituintes: • Naturais (Complexos): • Meios de cultura sem uma composição química definida, contêm geralmente hidrolisados de proteínas, extrato de carne ou de leveduras, sangue, açúcar, aminoácidos ou vitaminas e etc. • Usados para microrganismos menos exigentes Meios de cultura artificiais • Classificação de acordo com a procedência dos constituintes: • Artificiais (ou quimicamente definidos): • Meio com composição química definida usados para cultivar microrganismos mais específicos ou exigentes Meios de cultura artificiais • Classificação dos meios de cultura: Classificação de acordo com o objetivo funcional Meios de Cultura Estado físico Estado sólido Estado semi- sólido líquido Procedências dos constituintes Naturais Artificiais Composição química Simples Especiais Naturais Artificiais Meios de transporte e conservação Meio de crescimento ou isolamento Meios de enriquecimento Meios diferenciais Meios seletivos Meios para provas de identificação Meios para testes de sensibilidade antimicrobiana Meios de cultura artificiais • Meios de cultura de acordo com o objetivo funcional: • Meios de transporte e conservação: • Ágar Cary Blair – transporte de material fecal • Salina tamponada – transporte de material fecal • Meio Stuart – transporte de diversos materiais • Ágar Nutriente Meio salina tamponada Meio Ágar Cary Blair Meio Stuart Meios de cultura artificiais • Meios de cultura de acordo com o objetivo funcional: • Meios de crescimento, isolamento ou manutenção: • Dá viabilidade, mantendo as características (conservando) dos microrganismos no laboratório de microbiologia. • Ágar Nutriente • Ágar CLED • Ágar Sangue • Ágar MacConkey • Ágar Salmonela-Shigella • Ágar CHROMagar • Ágar BHI • Ágar Chocolate • Ágar Thayer Martin chocolate • Ágar tetrationato • Ágar tioglicolato c/s indicador • Ágar Lowenstein Jensen • Ágar batata Dextrose • Ágar Sabouraud Meios de Cultura • Meios de cultura de acordo com o objetivo funcional: • Meios para provas de identificação: • Ágar citrato Simmons • Ágar EPM • Ágar MILI • Ágar Bilis-esculina • Ágar Sangue – Teste de CAMP • Ágar DNAse • Ágar Esculina • Ágar Fenilalanina • Ágar CTA • Caldo Triptona • Ágar TSI Meios de Cultura • Meios de cultura de acordo com o objetivo funcional: • Meios para testes de sensibilidade aos antibióticos: • Ágar Mueller Hinton • Meio utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enteroco ccus sp. Meios de Cultura • Classificação de acordo com o objetivo funcional • Meios de enriquecimento: • Proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos números ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Esses meios tem a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que também pode inibir o crescimento de outros. Ex: Caldo BHI (Infusão de cérebro e coração Ex: Ágar Chocolate (contém sague de ovelha) Meios de Cultura • Classificação de acordo com o objetivo funcional • Meios diferenciais e Seletivos São meios que permitem a distinção entre dois ou mais tipos de bactérias pela simples observação das características apresentadas pelas colônias que nele se desenvolvem e permitem apenas o crescimento de um tipo de bactéria. • Meio MacConkey • Lactose – formam colônias vermelhas • Não Lactose – formam colônias brancas Ácidos biliares e cristal violeta – inibe bactérias G+. Cresce apenas BG- Diferencial Seletivo Meio diferencial e seletivo Ágar MacConkey Este meio contém vermelho-neutro como indicador de pH e, como resultado, as colônias que metabolizam lactose aparecem em vermelho a partir da produção de ácidos mistos. • As bactérias produtoras de ácidos fortes, como Escherichia coli, formam colônias vermelho- escuro. • As bactérias produtoras de ácidos fracos formam colônias rosa-pálido ou colônias que são claras na periferia e têm o centro rosado. As bactérias lactose negativas (Salmonella, Pseudomonas e Shigella) não consegue utilizar a lactose, e utilizam a peptona. • Isto forma amónia, que eleva o pH do ágar, levando à formação de colónias brancas/sem cor) Diferencial: difere bactérias fermentadoras de lactosedas não fermentadoras de lactose. Seletivo: Permite apenas o crescimento de bactérias Gram negativas. Inibe o crescimento das Gram positivas Meio diferencial e seletivo Ágar EMB (Eosin Methylene Blue) • O EMB contém corantes de eosina e azul de metileno que inibem as bactérias Gram-positivas e permite o crescimento de bactérias Gram Negativas. • Os corantes (eosina e azul de metileno) funcionam também como indicadores de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose por micro-organismos (Difere LAC+ de LAC - ). Colônias pretas (reflexo verde metalizado) Colônias azuladas Colônias incolores ou cor âmbar transparente Interpretação: LAC + : azul/preto; LAC - : sem cor ou roxo claro. Salmonella/Shigella Meio apenas diferencial Ágar Sangue • Meio Ágar Sangue – Diferencia bactérias que produzem: • Hemolisina • Não produtoras de hemolisina Hemolisina - são exotoxinas produzidas por bactérias que provocam lise dos eritrócitos in vitro. Visualização da hemólise em eritrócitos em placas de ágar facilita a categorização de algumas bactérias patogénicas como Streptococcus. Sangue de carneiro desfibrinado FIM
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