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AVALIANDO GENETICA 9 1. Durante uma das etapas da PCR o DNA de dupla fita fica em uma temperatura baixa e os iniciadores (primers) se unem nos sítios de ligação específicos nas fitas simples de DNA para iniciarem a sua cópia. Esta etapa denomina-se: Quest.: 1 Desnaturação Iniciação Extensão Anelamento Separação 2. (ENADE-2007) Em exames clínicos a técnica de amplificação de DNA pela reação da polimerase em cadeia (PCR, Polymerase Chain Reaction) é muito utilizada. No diagnóstico de infecção de um paciente por um determinado vírus, por exemplo, a técnica permite a amplificação específica de material genético do vírus. A especificidade da reação é garantida Quest.: 2 pela coloração final da reação, que indicará a presença do DNA viral. pela DNA polimerase do próprio vírus, que amplifica a seqüência do DNA viral. pelas temperaturas usadas na reação, que permitem a amplificação apenas do DNA viral. pelos oligonucleotídeos iniciadores, complementares à seqüência do DNA viral. pelos sais e nucleotídeos fosforilados do tampão empregado, que reconhecem o DNA viral. 3. As enzimas de restrição foram descobertas no início dos anos 70 do século XX, que, juntamente com a exploração da sua atividade e comercialização, permitiram o rápido desenvolvimento da Engenharia Genética. Hoje em dia conhecem-se centenas de enzimas de restrição isoladas de numerosas bactérias. Podemos dizer que as enzimas de restrição: Quest.: 3 Atuam especificamente sobre sequências de bases com repetições em coesivas. Reconhecem sítios palindrômicos (pode ser lida nas duas direções) e retiram bases das duas fitas do DNA. Clivam as duas fitas de DNA dentro de sítios palindrômicos. Quebram ligações fosfodiester somente em posições opostas na fita dupla de DNA. Ligam-se a sítios com espaçamento regular ao longo do DNA. 4. As endonucleases de restrição ou enzimas de restrição cortam em fragmentos a longa cadeia de DNA. Em seguida, os fragmentos gerados através da digestão pelas enzimas de restrição podem ser analisados através da técnica de: Quest.: 4 Eletroforese de DNA em gel de agarose Sequenciamento de DNA Isolamento de genes RFLP PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) 5. (ENADE 2007) Em exames clínicos a técnica de amplificação de DNA pela reação da polimerase em cadeia (PCR, Polymerase Chain Reaction) é muito utilizada. No diagnóstico de infecção de um paciente por um determinado vírus, por exemplo, a técnica permite a amplificação específica de material genético do vírus. A especificidade da reação é garantida: Quest.: 5 pelas temperaturas usadas na reação, que permitem a amplificação apenas do DNA viral. pelos oligonucleotídeos iniciadores, complementares à sequência do DNA viral. pelos sais e nucleotídeos fosforilados do tampão empregado, que reconhecem o DNA viral. pela DNA polimerase do próprio vírus, que amplifica a sequência do DNA viral. pela coloração final da reação, que indicará a presença do DNA viral. 6. Na elaboração e posterior expressão de um DNA recombinante existem passos a serem seguidos e eles devem ser sequenciais. Indique abaixo qual a sequencia correta: Quest.: 6 Cortar o plasmídeo com a enzima de restrição; multiplicar a bactéria para expressão do gene; retirar o gene a ser expresso do cromossomo com a enzima de restrição; inserir o DNA recombinante dentro de uma bactéria; ligar do gene a ser expresso ao plasmídeo com a DNA ligase. Cortar o plasmídeo com a enzima de restrição; retirar o gene a ser expresso do cromossomo com a enzima de restrição; inserir o DNA recombinante dentro de uma bactéria; multiplicar a bactéria para expressão do gene; ligar do gene a ser expresso ao plasmídeo com a DNA ligase. Multiplicar a bactéria para expressão do gene, inserir o DNA recombinante dentro de uma bactéria; cortar o plasmídeo com a enzima de restrição; retirar o gene a ser expresso do cromossomo com a enzima de restrição; ligar do gene a ser expresso ao plasmídeo com a DNA ligase. Cortar o plasmídeo com a enzima de restrição; retirar o gene a ser expresso do cromossomo com a enzima de restrição; ligar do gene a ser expresso ao plasmídeo com a DNA ligase; inserir o DNA recombinante dentro de uma bactéria; multiplicar a bactéria para expressão do gene. Cortar o plasmídeo com a enzima de restrição; inserir o DNA recombinante dentro de uma bactéria; retirar o gene a ser expresso do cromossomo com a enzima de restrição; ligar do gene a ser expresso ao plasmídeo com a DNA ligase; multiplicar a bactéria para expressão do gene.
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