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SDE0010 – GENÉTICA Aula 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Conteúdo desta aula HISTÓRICO E DEFINIÇÃO DE GENE 1 A REPLICAÇÃO (OU DUPLICAÇÃO ) DO DNA 3 PRÓXIMOS PASSOS PROJETO GENOMA HUMANO 2 MODELOS DE REPLICAÇÃO DO DNA 4 DIFERENÇAS ENTRE DNA E RNA 5 A TRANSCRIÇÃO E PROCESSAMENTO DO RNA 6 Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Histórico O Botânico dinamarquês Wilhelm Johannsen foi o primeiro a usar a palavra "gene", em 1909, para descrever as unidades fundamentais da hereditariedade. Em 1910, Thomas Hunt Morgan mostrou que os genes estavam presentes em cromossomos. No século XX, estudos focaram na estrutura física do DNA e nos processos de replicação e transcrição do RNA. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Definição de gene Frequentemente é um segmento do DNA que possui a informação para a produção de uma proteína. Proteínas são sintetizadas em duas etapas: a transcrição, onde o gene serve como molde para a síntese de RNA, e a tradução, onde a sequência de nucleotídeos do RNAm é traduzida em proteína. Um gene pode ser maior que a sequência de RNAm que será definitivamente traduzida. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Projeto Genoma Humano Foi fundado em 1990 pelo Instituto Nacional de Saúde estadunidense (NIH) e constituiu um esforço internacional para o mapeamento do genoma humano e as sequências de todos os nucleotídeos. O projeto finalizou em 2003, com o sequenciamento de 99% do genoma humano. No entanto, ainda é preciso saber o número de genes. Estima-se cerca de 25 mil. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Projeto Genoma Humano Considerando o paradigma central (um gene – uma proteína), 25 mil genes, seriam 25 mil proteínas correspondentes. Mas este número de proteínas parece ser insuficiente para toda as funções processadas dentro das células humanas. Uma resposta a esta questão é encontrada em duas particularidades dos genes de eucariotos: Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Projeto Genoma Humano Alguns genes são capazes de gerar várias proteínas, não sendo necessariamente um gene para cada proteína formada, e além disso, após a tradução, muitas modificações podem acontecer em uma proteína. É estimado que, a partir dos 25 mil genes, podem ser codificadas mais de um milhão de proteínas diferentes. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A Replicação (ou duplicação) do DNA Replicação: é a duplicação do DNA que ocorre no núcleo (eucariota), durante o período “S” da interfase. A replicação é semiconservativa, tendo em vista que, ao final, há duas duplas hélices que contêm, cada uma, uma fita da molécula parental e uma nova fita de DNA recentemente sintetizada. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A Replicação (ou duplicação) do DNA A replicação do DNA começa por meio da ação da enzima helicase que separa a dupla fita do DNA quebrando as pontes de hidrogênio, e cada uma das fitas vai servir de molde para a produção de uma nova fita. As novas cadeias são construídas pela enzima DNA Polimerase. A construção segue a ordem 5’ para 3’. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A Replicação (ou duplicação) do DNA Para um dos moldes ou fita líder, a construção da nova fita é contínua, já na outra fita ou filamento retardatário, formam-se vários fragmentos de DNA, sintetizados pela ação da DNA Polimerase, e que são chamados de fragmentos de Okazaki. Depois a enzima DNA ligase liga cada um desses fragmentos, levando à formação de mais uma nova fita. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A Replicação (ou duplicação) do DNA Há cerca de 20 tipos de DNA polimerases, e são agrupadas em quatro famílias: A, B, X e Y. Grande parte promove a replicação do DNA e há aquelas que também assumem ação reparadora, eliminando a incorporação errada de nucleotídeos na nova fita de DNA. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Modelos de replicação do DNA Havia três modelos de replicação do DNA: o conservativo, o dispersivo e o semi-conservativo. No modelo conservativo, o DNA parental é preservado, e as cópias de DNA contêm duas fitas novas. No modelo dispersivo, as duas fitas filhas continham segmentos misturados de DNA recém-sintetizado com o DNA parental. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Modelos de replicação do DNA No semiconservativo, uma das fitas parentais será parte da dupla hélice nova. Com a realização de experimentos utilizando cultura de bactérias, isótopos de nitrogênio e gradiente de densidade de Cloreto de Césio foi possível mostrar que o modelo semi-conservativo, é o que mais está de acordo com a realidade. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Diferenças entre DNA e RNA O DNA apresenta nucleotídeos constituídos por uma desoxirribose, uma base nitrogenada (adenina, timina, citosina ou guanina) e um grupo fosfato. O estado nativo do DNA é uma dupla hélice, sendo que suas cadeias polinucleotídicas correm em sentidos opostos (uma 3’→ 5’e a outra 5’→ 3’), mantendo-se juntas por pontes de hidrogênio entre os pares de bases A↔T e C↔G. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Diferenças entre DNA e RNA O RNA apresenta nucleotídeos constituídos por uma ribose, uma base nitrogenada que pode ser adenina, uracila, citosina ou guanina, e um grupo fosfato. Na maioria dos organismos, o RNA está presente como uma fita simples, diferente do DNA. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Diferenças entre DNA e RNA O DNA leva a informação química que permite a transmissão exata da informação genética de uma célula para as suas células filhas. O DNA dirige a síntese e a sequência de nucleotídeos do RNA. Ao mesmo tempo, a estrutura primária do DNA determina as sequências de aminoácidos que constituem as proteínas, através do RNA. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Diferenças entre DNA e RNA O RNA dirige a sequência de aminoácidos nas proteínas e sua síntese. Há três tipos de RNA com funções distintas: o RNAm (mensageiro) que determina a sequência de aminoácidos em uma nova proteína; RNAr (ribossômico), que constitui os ribossomos em conjunto com algumas proteínas, e o RNAt (de transferência) que transporta aminoácidos específicos até o RNAm. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A transcrição do DNA em um RNA A transcrição de um segmento do DNA em uma fita de RNA é feita pela RNA polimerase, que reconhece sequências específicas do DNA, conhecidas como promotoras (por serem sequências de nucleotídeos que promovem o início da transcrição). Em eucariotos, há três RNA polimerases (I, II e III) que participam da produção de RNAr, RNAt e RNAm. GenéticaAULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A transcrição do DNA em um RNA A maioria dos genes é transcrita pela RNA polimerase II, que nunca inicia a transcrição sozinha. Elas precisam de fatores regulatórios como, por exemplo, as sequências promotoras que são uma variedade de sequências encontradas próximas dos genes e fatores de transcrição que reconhecem os promotores e se ligam a eles, guiando e ativando a RNA polimerase. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A transcrição do DNA em um RNA A RNA polimerase II reconhece frequentemente os promotores denominados TATA box ou sua variante TATAAA. Para que um gene seja transcrito pela RNA polimerase II é necessária a ligação de vários fatores de transcrição, formando um complexo de pré-iniciação que inclui os fatores TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF e TFIIH. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas A transcrição do DNA em um RNA Uma única fita da dupla fita de DNA é usada como molde para a síntese de RNA. A dupla fita ligada à RNA polimerase se abre de modo que uma seja usada para produção do RNA. O transcrito de RNA é complementar à fita molde de DNA e com a mesma sequência de bases (apenas troca timina por uracila) da fita não molde. Esta fita é chamada de fita sense e, a fita molde, antisense. Genética AULA 5: REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO GÊNICAS Replicação e Transcrição Gênicas Processamento do RNA Nos eucariotos, o transcrito primário é clivado em determinadas posições na extremidade 3’; uma longa sequência de denosinas (cauda poli-A) região 3’ e um capping pela adição de guaninas na extremidade 5’. Depois os íntrons são retirados e os éxons são ligados um ao outro (splicing). O transcrito inicial resulta em uma fita não codificante de RNA (RNAr e RNAt) ou um RNAm. Assuntos da próxima aula: 1. Descoberta do código genético; 2. O código genético e tradução; 3. Controle da expressão gênica; 4. Mutação; 5. Mecanismos de reparo.
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