Prática 4 Antibiograma

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DETERMINAÇÃO DA SUSCEPTIBILIDADE DAS BACTÉRIAS AOS 
ANTIMICROBIANOS
I - Antibiograma ou Teste de Disco-Difusão
II - Determinação da Concentração Mínima Inibitória – MIC ou CMI
III - Determinação da Concentração Mínima Bactericida – MBC ou CMB
CONCENTRAÇÃO MÍNIMA INIBITÓRIA – MIC OU CMI
- É a menor concentração da droga capaz de inibir o crescimento bacteriano 
visível a olho nu – pode ser bactericida ou bacteriostático 
CONCENTRAÇÃO MÍNIMA BACTERICIDA – MBC ou CMB
- É a menor concentração da droga capaz de matar as bactérias. 
O QUE É CADA UM DESTES TESTES?
ANTIBIOGRAMA 
- É um teste que irá determinar a quais antibióticos uma bactéria é sensível 
ou resistente em doses terapêuticas.
TODOS ESSES TESTES SÃO TOTALMENTE PADRONIZADOS 
PARA REPRODUÇÃO EM QUALQUER LABORATÓRIO.
Padronização do Método pelo
“Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)”
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MÉTODO DE DISCO DIFUSÃO - Difusão do antimicrobiano no 
meio de cultura, a partir de discos de papel de filtro 
impregnados.
PRADRONIZAÇÃO DO MÉTODO
1) Concentração do antibiótico no disco
2) Tamanho do disco
3) Meio de cultura - Meio de Mueller Hinton (existem variações quanto às 
exigências nutricionais do microrganismo)
I - ANTIBIOGRAMA
} 4 mm
Meio Mueller Hinton
4) Quantidade de meio de cultura a ser adicionado na placa: na 
dependência do diâmetro da placa de Petri utilizada, mas de maneira 
que se obtenha uma camada de 4mm de meio de cultura..
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5) Preparação do inóculo: 
� Utilizar crescimento bacteriano recente com 18 a 24h de incubação.
� Concentração do inóculo bacteriano - 0,5 da escala McFarland
Escala de McFarland - Gradiente de Sulfato de Bário : [ ] de UFC/ml
Densidade 
bacteriana 
(UFC/ml): 1,5 x 10
8 3 x 108 6 x 108 9 x 108 1,2 x 109 1,5 x 109
N0 da escala: 0,5 1 2 3 4 5 
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Preparo do inóculo e 
semeadura
Comparação com a 
escala 0,5 de McFarlandAlça
Crescimento bacteriano –em 
tubo ou em placa
Suspensão 
bacteriana 
em salina
Escala 0,5
Swab
Semear no mínimo em 3 direções para se obter crescimento 
semi confluente
7) SEMEADURA
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8) Disposição dos discos: Não muito próximos da borda da placa e nem 
próximos entre si.
9) Incubação: 35°C por 18-24h 
10) Leitura: medida do diâmetro dos halos de inibição (em mm) 
OBS: Verificar a existência de colônias dentro do halo de inibição
11) Interpretação: consulta tabelas de referência
A B
C
D
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ESCOLHA DOS ANTIBIÓTICOS
A escolha dos antibióticos a serem testados depende;
- de seu mecanismo de ação, 
- das taxas de susceptibilidade das bactérias na região onde se localiza o 
laboratório
- da espécie bacteriana que está sendo analisada.
SELEÇÃO DOS ANTIBIÓTICOS POR GRUPO BACTERIANO
� Enterobacteriaceae
Ampicilina, Cefazolina, Cefalotina, Gentamicina e Tobramicina
� Pseudomonas aeruginosa
Ceftazidima, Gentamicina, Trobamicina e Piperacilina
� Staphylococcus spp
Azitromicina ou Claritromicina ou Eritromicina, Clindamicina, Oxacilina 
(cefoxitina), Penicilina, Sulfametoxazol Trimetopim
� Enterococcus spp
Ampicilina, Penicilina
ANTIBIÓTICOS TESTADOS APENAS EM AMOSTRAS ISOLADAS DE URINA
� Enterobacteriaceae
Lomefloxacino ou ofloxacino, Norfloxacino, Nitrofurantoina, Sulfisoxazole, 
Trimetoprim.
� Pseudomonas aeruginosa
Lomefloxacino ou Ofloxacino, Norfloxacino
� Staphylococcus spp
Lomefloxacino, Norfloxacino, Nitrofurantoina, Sulfisoxazole, Trimetoprim.
� Enterococcus spp
Ciprofloxacino, Levofloxacino, Norfloxacino, Nitrofurantoina, Tetraciclina.
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Diâmetros (em mm) dos Halos de Inibição dos Antibióticos 
Recomendados na Infecção Urinária 
Microrganismo e diâmetros (em mm) dos halos de inibição ANTIBIÓTICO conc no disco 
Enterobacteriaceae 
 SENSÍVEL INTERMEDIÁRIO RESISTENTE 
Lomefloxacina 10 µg ≥ 22 19-21 ≤18 
Ofloxacina 5 µg ≥ 16 13-15 ≤12 
Norfloxacina 10 µg ≥ 17 13-16 ≤12 
Nitrofurantoina 300 µg ≥ 17 15-16 ≤14 
Sulfisoxazole 250 ou 300 µg ≥ 17 13-16 ≤12 
Trimetoprim 5 µg ≥ 16 11-15 ≤10 
Amoxil-Clavulanato 20/10 µg ≥18 14-17 ≤13 
Sulfametoxazol-
trimetoprim 
1,25/23,75 µg ≥16 11-15 ≤10 
 Pseudomonas aerugionosa 
 SENSÍVEL INTERMEDIÁRIO RESISTENTE 
Lomefloxacina 10 µg ≥ 22 19-21 ≤18 
Ofloxacina 5 µg ≥ 16 13-15 ≤12 
Norfloxacina 10 µg ≥ 17 13-16 ≤12 
 Staphylococcus spp 
 SENSÍVEL INTERMEDIÁRIO RESISTENTE 
Lomefloxacina 10 µg ≥ 22 19-21 ≤ 18 
Norfloxacina 10 µg ≥ 17 13-16 ≤ 12 
Nitrofurantoina 300 µg ≥ 17 15-16 ≤ 14 
Sulfisoxazole 250 / 300 µg ≥ 17 13-16 ≤ 12 
Trimetoprim 5 µg ≥ 16 11-15 ≤10 
 Enterococcus spp 
 SENSÍVEL INTERMEDIÁRIO RESISTENTE 
Ciprofloxacina 5 µg ≥ 21 16-20 ≤ 15 
Levofloxacina 5 µg ≥ 17 14-16 ≤13 
Norfloxacina 10 µg ≥ 17 13-16 ≤12 
Nitrofurantoina 300 µg ≥ 17 15-16 ≤14 
Tetraciclina 30 µg ≥ 19 15-18 ≤ 14 
Ampicilina 10 µg ≥ 17 - ≤ 16 
 
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DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO MÍNIMA INIBITÓRIA (MIC)
Pode ser realizada em meio líquido (caldo) ou sólido (ágar). 
16 8 4 2 1 0,5 0,25 µg/ml
16 8 4 2 1 0,5 0,25 µg/ml
8 4 2 1 0,5 0,25 µg/ml
DILUIÇÃO DO ANTIBIÓTICO (1,0mL) + INOCULAÇÃO DA SUSPENSÃO 
BACTERIANA (1,0mL - ~ 5X105 ufc/mL)
35ºC / 18-24h
35ºC / 18-24h MIC = 1 µµµµg/ml
MBC = 2 µµµµg/ml
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Determinação do CMI (MIC) em 
placas de microtitulação
Determinação do CMI (MIC)
em placas
Determinação do CMI (MIC)
através do Teste - E
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