AULA PRÁTICA AMILASE SALIVAR

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AULA PRÁTICA VI: CARACTERIZAÇÃO DE UMA ENZIMA 
ESTUDO DA ATIVIDADE AMILÁSICA DA AMILASE SALIVAR 
Fundamento 
A saliva é incubada com o substrato (amido), em condições ótimas de temperatura, pH e concentração de cloretos. 
A atividade amilásica é medida pelo tempo mínimo necessário à digestão total do amido, o que se revela pela reação negativa com iodo (ponto acromático). 
Procedimento 
1. Preparar uma estante com 15 tubos contendo 0,5 mL de solução de iodo (Lugol). 
2. PRÉ-INCUBAÇÃO: 
Colocar em um tubo de ensaio grande: 
a) 5,0 mL de solução de amido a 1%; 
b) 2,0 mL de solução de cloreto de sódio a 1%; 
c) 2,0 mL de tampão de pH 7,0. 
3. Manter a mistura por 5 minutos em temperatura ambiente. 
4. INCUBAÇÃO 
Adicionar 1,0 mL de saliva diluída a 1:100, homogeneizar e marcar o tempo. 
5. De minuto em minuto (ou tempos mais adequados), pipetar uma amostra de 2 gotas do material em incubação 
e adicionar a estante preparada no item 1 contendo uma série de tubos com 0,5 mL de solução de iodo, até que 
não se observe coloração (PONTO ACROMÁTICO), exceto a própria cor da solução de iodo. 
Resultado: 
O resultado é expresso em unidades amilásicas. Uma unidade é a atividade manifestada pela digestão total do 
amido, em 10 minutos, nas condições da prova. A atividade enzimática se obtém por intermédio da seguinte 
fórmula: 
Unidades amilásicas em 1,0 mL de saliva = (10 x D) / t, 
Onde: D= grau de diluição da saliva e t = tempo em minutos requerido para atingir o ponto acromático. 
VALORES NORMAIS: 
Normalmente encontram-se valores entre 100 a 150 unidades amilásicas