VALIDAÇÃO DE METODOLOGIA ANALÍTICA PARA DOSEAMENTO DE SOLUÇÕES DE LAPACHOL POR CLAE

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VALIDAÇÃO DE METODOLOGIA ANALÍTICA PARA DOSEAMENTO DE 
SOLUÇÕES DE LAPACHOL POR CLAE 
Esta substância é um composto orgânico que possui características 
anticancerígenas e é um metabólito que não é fundamental a vida, mas ajuda na 
sobrevivência e na adaptação das espécies. Extraída da madeira do Ipê, utilizada na 
fabricação de fármacos que tem o intuito de combate ao câncer, sendo utilizado no 
Brasil desde a década de sessenta. Os resultados obtidos neste artigo mostram que 
o lapachol possui um limite baixo de quantificação, que a metodologia analítica é 
precisa, linear e robusta sobre o intervalo de concentração de meio a cem 
microgramas por mililitro de lapachol. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
VALIDAÇÃO DE METODOLOGIA ANALÍTICA PARA DOSEAMENTO DE 
SOLUÇÕES DE LAPACHOL POR CLAE 
 
A substância estudada neste artigo é conhecida por sua ação anticancerígena, 
antimicrobiana e anti-inflamatória. 
A cromatografia é um processo de separação muito utilizado. Nele, sempre existe 
um material capaz de fixar em sua superfície, a substância que está sendo 
separada. 
A validação metodológica deste estudo foi definida de acordo com a norma descrita 
no ICH tópico Q-2b, de 1996. 
Na primeira fase, na qual um solvente fluído arrasta o material a ser isolado, (fase 
móvel), se deu pela mistura de solventes formada por metanol e ácido acético em 
solução aquosa, analisando a cromatologia e a resposta entre o ponto mais elevado 
do lapachol e da β-lapachona, com fluxo de um mililitro por minuto. 
O solvente fluido (podendo ser líquido ou gasoso) auxilia na separação de 
substâncias de interesse quando são deslocadas. Neste, foi realizado a análise 
cromatográfica com diferentes concentrações utilizando o parâmetro Ruído, o que 
resultou em diferentes resultados, dando assim para construção de nove curvas de 
calibração com seus coeficientes referentes lineares e angulares, e então, foram 
relacionados e comparados. 
Os valores da reprodutibilidade (Previsão do método sob as mesmas condições de 
análise), e da linearidade (capacidade que o método fornece resultados 
proporcionais à concentração do analito), foram analisados e constatados a 
continuidade da resposta linear da análise. Foi realizado o cálculo de desvio padrão 
da curva de calibração e sua inclinação, para verificação da dispersão dos dados 
dentro de uma amostra em comparação à média. 
Em relação a trabalhos anteriores, onde foi utilizado a acetonitrila na fase móvel que 
tem o custo elevado, foi estudada para substituição uma mistura composta de 
metanol, que por sua vez é mais barato, sem que comprometesse o resultado da 
análise. A análise teve uma resolução satisfatória de 4,53 entre o Lapachol e a β-
lapachona. 
Constatou-se que o método é suscetível a alterações na fase móvel preparados em 
vidrarias, (como proveta ou balão volumétrico), ou até mesmo durante a análise 
quando a mistura ocorre pelo próprio equipamento. Somente os resultados obtidos 
na fase móvel preparada em balão volumétrico e os resultados com a mistura 
diretamente pelo CLAE não são consideravelmente distintos ao nível de confiança 
de 95%, os outros resultados foram considerados diferentes, por este motivo, optou-
se pela utilização do balão volumétrico para a realização das outras análises. 
Por meio do cálculo de limite de detecção (LD = 3,33 x desvio padrão dividido pelo 
coeficiente angular da reta) e de quantificação (LQ = 10 x desvio padrão dividido 
pelo coeficiente angular da reta), foi obtido LD = 0,318 μg/mL e LQ = 0,953 μg/mL. 
Esses resultados demonstram que o método apresentado é satisfatoriamente 
perspicaz para identificar e estimar uma amostra na qual cada 20 μL obtenha 6,4 ng 
e 19,0 ng de lapachol e β-lapachona. 
 
Aplicação à área farmacêutica 
 
Como todo início de pesquisas e estudos, é necessária a elaboração para uma 
melhor validação analítica para quantificar o elemento que irá trabalhar, assim 
podendo designar possíveis compostos derivados. O intuito da validação é 
assegurar que a metodologia analítica tenha flexibilidade, estabilidade, precisão e 
exatidão em uma determinada faixa de uma substância em análise e, então garantir 
que as análises de rotina estejam de acordo com os valores condizentes ao valor de 
Referência. 
A cromatografia é um processo muito utilizado na área farmacológica que visa a 
análise de substâncias orgânicas encontradas nos vegetais, por exemplo. Com base 
no material, o método CLAE se encaixa perfeitamente, pois, é a melhor técnica para 
identificar e quantificar amostra na área farmacêutica.