AULA 6 Crescimento e cultivo de Bactérias

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Profa Helvia W. Casullo de Araújo 
Crescimento Microbiano
Em microbiologia crescimento microbiano corresponde ao aumento do
número de células e não em termos de tamanho celular.
A maioria dos seres procarióticos ocorre a divisão binária, ou seja a
célula duplica seus componentes e se dividem em duas outras células.
Nas bactérias, as células- filhas tornam-se independente quando um
septo (divisão) cresce entre elas, fazendo que se separem.
Crescimento Microbiano – fissão binária
Varia de minutos até dias
Depende muito das condições ambientais
• A fase exponencial reflete apenas uma parte do ciclo de crescimento de uma 
população microbiana
• O crescimento de microrganismos apresenta um ciclo típico com todas as fases de 
crescimento.
Fases do crescimento Microbiano
1) Fase Lag
Período de adaptação da cultura
• Mudança de meio, preparação do complexo enzimático
• Reparação das células com danos.
2) Fase exponencial
Fase mais saudável das células onde todas estão se dividindo.
• A maioria dos microrganismos unicelulares apresentam essa fase, mas as velocidades 
de crescimento são bastante variáveis:
- Procarióticos – crescem mais rapidamente que os eucarióticos
- Eucarióticos menores crescem mais rapidamente que os maiores
3) Fase estacionária: 
Num sistema fechado (tubo, frasco ou biorreator) o crescimento exponencial não pode 
ocorrer indefinidamente.
• Ocorre a limitação por depleção de nutrientes e acúmulo de metabólitos.
Divisão = morte → crescimento líquido nulo
Ainda pode ocorrer catabolismo e produção de metabólitos secundários
4) Fase de morte (declínio):
• A manutenção de uma cultura no estado estacionário por longo tempo conduz as células ao 
processo de morte.
A morte celular é acompanhada da lise celular
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Nutricionais - Nitrogênio
Todos os organismos, inclusive os microorganismos, necessitam de
nitrogênio para sintetizar ácidos nucléicos, enzimas e outras proteínas.
O nitrogênio é o elemento mais abundante depois do Carbono, cerca de
12%.
Moléculas Orgânicas: Proteínas, ácidos nucléicos etc;
Moléculas Inorgânicas: NH3, NO3
-, N2;
Uma vez sintetizados ou obtidos do meio os aminoácidos são usados na
síntese das proteínas. Como as purinas, pirimidinas utilizadas na
produção de DNA e RNA.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Nutricionais - Nitrogênio
As bactérias são particularmente versáteis na utilização de nitrogênio,
pois algumas bactérias podem utilizar nitrogênio gasoso ou
atmosférico para a síntese celular por meio de um processo chamado
fixação de nitrogênio. Outras utilizam compostos inorgânicos
enquanto algumas utilizam compostos de nitrogênio orgânicos tais
como aminoácidos.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Principal elemento dos compostos orgânicos e de diversos inorgânicos
(água, sais e gases)
Função do H:
Manutenção do pH
Formação de ligações de H entre moléculas
Serve como uma fonte de energia nas reações de oxi-redução
da respiração
Fatores Nutricionais - Hidrogênio
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Nutricionais – Micronutrientes ou elementos traços
Co, Cu, Ni, Mo, Mn, Se, Zn, Cr
São necessários em concentrações muito baixa (µg/L);
Cofatores de enzimas – ativação das enzimas;
Nem sempre é necessário sua adição.
Exemplo:
Mo+6 é requerido para nitrogenase, a enzima que converte o gás atmosférico (N2)
para a amônia (NH3) para fixação de nitrogênio.
O Cobalto é necessário para os organismos que podem sintetizar vitamina B12
Classificação Nutricional dos 
Microorganismos
Quimioautotróficos – são organismos que utilizam
substâncias químicas (inorgânicas) como fontes de energia
e dióxido de carbono como principal fonte de carbono.
Quimioheterotróficos – São organismos que utilizam
substâncias químicas (orgânicas) como fontes de energia e
os compostos orgânicos como fonte principal de carbono.
Fotoautotróficos – São organismos que utilizam a luz
como fonte de energia e o dióxido de carbono como
fonte principal de carbono.
Fotoheterotróficos – São organismos que utilizam a luz
como fonte de energia e compostos orgânicos como fonte
principal de carbono.
Classificação Nutricional dos 
Microrganismos
Classificação Nutricional dos Microorganismos
Grupo Nutricional Fonte Carbono Fonte de energia Microorganismos -
Ex
Quimioautotróficos Dióxido de 
Carbono
Compostos 
Inorgânicos
Bactérias 
Nitrificantes, do ferro 
e enxofre
Quimioheterotróficos Compostos 
Orgânicos
Compostos 
orgânicos
Muitas bactérias, 
fungos, protozoários 
e animais
Fotoautotróficos Dióxido de 
Carbono
Luz Bactérias de enxofre 
verde, algas, plantas 
e cianobactérias
Fotoheterotróficos Compostos 
Orgânicos
Luz Bactérias Púrpuras e 
verdes não-
enxofradas
Fatores que Afetam o Crescimento Microbiano 
- Fatores Físicos 
As espécies de organismos encontradas em um dados ambiente e as
velocidades nas quais elas crescem podem ser influenciadas pelos os fatores
físicos.
Os Fatores físicos Incluem:
•pH
•Temperatura;
•Concentração de oxigênio;
•Umidade;
•Pressão Hidrostática;
•A pressão osmótica;
•Radiação
Fatores Físicos - Temperatura
•A maioria das espécies bacteriana pode se desenvolver em
uma faixa de temperatura superior a 300C, mas as
temperaturas máxima e mínima variam consideravelmente entre
as diferentes espécies.
•Aumento de temperatura acelera as reações no interior da
célula e aumenta o crescimento.
•A faixa de temperatura na qual um organismo se desenvolve é
amplamente determinada pelas temperaturas nas quais suas
enzimas atuam.
Fatores Físicos - Temperatura
Dentro desta faixa, podem ser identificadas três temperaturas
críticas:
1. A temperatura mínima de crescimento, que é a menor
temperatura em que as células se dividem;
2. A temperatura máxima de crescimento, que é a temperatura
mais alta em que as células se dividem;
3. A temperatura ótima de crescimento, que é a temperatura em
que as células se dividem mais rapidamente, isto é, possuem o
tempo de geração mais curto.
Fatores que Afetam o Crescimento Microbiano
Fatores Físicos - Temperatura
Os microrganismos podem ser divididos em três grupos, de
acordo com a variação de temperatura :
•Psicrófilos, ou microrganismos que crescem em baixas
temperaturas;
•Mesófilos, ou microrganismos que crescem em temperaturas
moderadas;
•Termófilos, ou microrganismos que crescem em altas
temperaturas.
Fatores que Afetam o Crescimento Microbiano
Microorganismo Faixa de 
temperatura
Tipo Características 
Psicrófilos 150C – 200C Bactérias, fungos, 
algas e protozoários
Podem estar presentes em 
temperatura de refrigeração 40C, 
são responsáveis pela 
deterioração dos alimentos 
refrigerados e congelados. 
Vivem principalmente em águas 
e solos frios. 
Mesófilos 250C – 400C Maioria das 
bactérias, 
patógenos 
humanos, as algas, 
fungos e 
protozoários.
O aquecimento inadequado 
durante o processo de 
enlatamento e pausterização 
pode manter vivos tais 
organismos.
Termófilos 400C – 850C
+ 50 a 600C
A maioria são 
procarióticos, não 
existem eucarióticos 
nesta faixa de 
temperatura
Podem ser encontrados em 
áreas Vulcânicas . Muitas das 
bactérias termófilas são 
encontradas em pilhas de 
adubos. Algumas toleram 
temperaturas de 1100C em 
fontes termais ferventes.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos - Temperatura
Fatores Físicos - Temperatura 
Analisando o gráfico anterior, conclui-se que:
• O crescimento aumenta gradualmente da temperatura mínima
para a temperatura ótima;• o crescimento cai rapidamente da temperatura ótima para
máxima;
•Estas propriedades de crescimento deve-se as mudanças nas
atividades enzimáticas;
•A atividade enzimática geralmente se duplica a cada aumento
de 100C na temperatura, até que a alta temperatura comece a
desnaturar todas as proteínas , inclusive as enzimas;
• O rápido declínio na atividade enzimática, a uma
temperatura apenas ligeiramente superior à temperatura
ótima, ocorre quando as moléculas se tornam tão alteradas
pela desnaturação que não conseguem mais catalisar.
Fatores Físicos - Temperatura 
Fatores Físicos - pH 
Os Microrganismos possuem um pH ótimo – o pH no qual eles
crescem melhor, o pH ótimo para os microrganismos está próximo
da neutralidade (pH=7,0);
Para manter o pH interno, a célula expulsa ou absorve íons
hidrogênio;
Para a maioria das bactérias, o valor mínimo de pH está em torno
de 4, com pH igual a 9 como máximo para crescimento;
Muitas bactérias, produzem quantidades suficientes de ácidos como
subprodutos metabólicos que interferi no crescimento da célula.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos - pH
De acordo com sua tolerância à acidez ou à alcalinidade, as bactérias 
são classificadas em:
•Acidófilas- organismos que têm afinidade por meio ácidos – Ex: 
Lactobacillus
•Neutrófilas – organismos que vivem entre valores de pH de 5,4 a 
8,5. Ex: a maioria das bactérias que causam doenças aos seres 
humanos;
•Alcalófilas - Organismos que se adaptam em ambientes alcalinos. 
Ex: Vibrio Cholerae.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos - pH
Os bolores e as leveduras possuem pH ótimo de crescimento
na faixa de 5 a 6.
O pH ótimo para o crescimento dos protozoários está
geralmente entre 6,7 a 7,7.
As algas têm uma variação de pH mais extensa de 4,5 a
8,5, para o crescimento ótimo.
As mudanças de pH podem levar à desnaturação de enzimas e de outras
proteínas e interferir no bombeamento dos íons na membrana celular.
Durante o crescimento bacteriano a formação de metabólicos que diminuem o
pH por isso ser necessário a utilização de tampões para evitar a mudança de
pH, entre eles têm-se peptona, aminoácido e sais de fosfofato.
Fatores Físicos - pH
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos – Oxigênio – Atmosfera Gasosa
•De acordo com a resposta ao oxigênio gasoso, os microrganismos são
divididos em quatro grupos fisiológicos:
• Microrganismos aeróbios;
•Microrganismos facultativos;
•Microrganismos anaeróbios;
•Microaerófilos.
Fatores Físicos – Oxigênio – Atmosfera Gasosa 
Microrganismos Aeróbios – Os microrganismos que normalmente
requerem oxigênio para o crescimento e pode crescer em uma
atmosfera padrão de 21% de oxigênio são classificados como
aeróbios.
Alguns aeróbios podem crescer mais lentamente quando o oxigênio é
limitado, assim quando os mesmos estão em culturas liquidas, uma vez
que o oxigênio é pouco solúvel em água, é preciso utilizar métodos
para manter a alta concentração de oxigênio dissolvido no meio. Um
desses métodos é utilizar agitação ou aeração.
As bactérias aeróbicas são bastante utilizadas no tratamento de esgoto
doméstico e nos processos de compostagem.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos – Oxigênio – Atmosfera Gasosa
Microrganismos Anaeróbios : os microrganismos anaeróbios são
aqueles que não podem crescer em presença do ar e não utilizam
oxigênio para as reações de produção de energia.
Alguns anaeróbios podem tolerar baixas concentrações de oxigênio,
mas os anaeróbios estritos são mortos por uma breve exposição ao
gás.
Os anaeróbios estritos ou obrigatórios são mortos não pelo o oxigênio
em forma de gás, mas por uma forma de oxigênio altamente tóxica e
reativa, chamada superóxido (O2
-). Os radicais superóxido podem
causar danos às células, mas também dão origem ao peróxido de
hidrogênio( H2O2) que pode destruir os componentes vitais da célula.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
O2 + e
- O2
-1 radical superóxido
O superóxido é convertido em oxigênio molecular e peróxido de
oxigênio por uma enzima chamada de superóxido dismutase .
O peróxido de oxigênio é convertido em água e oxigênio
molecular pela enzima catalase.
Os microrganismos aeróbicos e os facultativos possuem ambas
enzimas.
Os microrganismos anaeróbicos, não possuem nem a
superóxido dismutase e nem a catalase e morrem devido aos
efeitos tóxicos do superóxido e do peróxido de hidrogênio
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos – Oxigênio – Atmosfera Gasosa
Microrganismos facultativos São aqueles que crescem na presença do ar
atmosférico e pode crescer também com ausência de oxigênio, ou seja, em
condições anaerobiose.
A Escherichia coli é facultativa.
Microrganismos Microaerófilos são aqueles que como os aeróbios também
utilizam oxigênio nas reações químicas para produção de energia. Porém, na
presença de pequenas quantidade de oxigênio livre, eles irão crescerem melhor em
níveis de oxigênio variando de 1% a 15%.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos – Oxigênio – Atmosfera Gasosa
a) Crescimento apenas de microrganismos
aeróbicos
b) Crescimento apenas de microrganismos
anaeróbicos.
c) Crescimento de microrganismos facultativos.
d) Crescimento apenas de microrganismos
Microaerófilos.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Fatores Físicos – Pressão Hidrostática
Pressão hidrostática: é aquela exercida nas células pelo peso da água que
permanece na superfície delas, a qual será proporcional a profundidade.
Os microrganismos barófilos são aqueles que necessitam para viver de pressões
altas.
Estes organismos não crescem em laboratório quando submetidos à pressão
atmosférica.
A alta pressão é necessária para manter suas moléculas de enzima na
configuração tridimensional característica. Sem ela, as enzimas perdem sua forma
e se desnaturam, causando a morte do organismo.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Umidade
•Todas as células ativamente metabolizantes geralmente requerem um
meio aquoso.
•A maioria das células vegetativas sobrevive apenas algumas horas sem
umidade.
•Apenas os esporos de organismos produtores de esporos podem
sobreviver em um estado inativo em um ambiente seco.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Radiação
•As energias radiantes, como por exemplo os raios gama e a luz ultravioleta,
podem causar mutações (mudança no DNA) e até mesmo matar os
organismos.
•Determinados microrganismos possuem pigmentos que filtram a radiação e
ajudam a prevenir danos ao DNA.
Fatores que Afetam o Crescimento 
Microbiano
Pressão osmótica
•Os microrganismos retiram da água a maioria dos nutrientes
solúveis(conteúdo celular 80 – 90 % de água);
Pressão Osmótica - força com que a água se move através da membrana
citoplasmática a partir de uma solução de baixa concentração de soluto para
uma contendo alta concentração de soluto.
Cultivo de Microorganismos
Como é feito o estudo de microrganismo em laboratório?
Necessita de uma cultura pura, ou seja, uma cultura que 
contenha apenas uma única espécie de organismo
Como são obtidas as culturas puras???
As culturas puras são obtidas através do isolamento dos
descendentes ( ou prole) de uma única espécie.
Cultivo de microorganismos
Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou desenvolvidos em
material nutriente denominado meio de cultura.
Para cultivar microrganismos em laboratório, é preciso conhecer as suas
necessidades nutricionais e ter a habilidade de forneceras substâncias
necessárias ao meio.
MEIO DE CULTURA: preparação contendo os nutrientes necessários para
cultivar e manter microrganismos viáveis em laboratório.
Meios para cultivo de bactérias
Estratégias:
• inibir do desenvolvimento de
determinados grupos bacterianos 
• evidenciar atividades metabólicas diferentes
diferenciar colônias
Cultivo de microrganismos
Tipos de meios 
Meio sintético: é um meio preparado em laboratório a partir de materiais de
composição precisa ou razoavelmente bem definida.
Meio sintético definido ou quimicamente definido: é aquele que contém
tipos e quantidades de substâncias químicas conhecidas e específicas
Meio complexo: é aquele que contém determinados materiais
razoavelmente conhecidos. Porém, a composição química exata não é
conhecida. Tais meios contêm sangue ou extrato de carne, soja, levedura e
outros organismos. Um ingrediente comum adicionado ao meio complexo é a
PEPTONA.
Cultivo de microrganismos
Quando um meio solidificado é necessário para o crescimento ou estudo
dos microrganismos, um agente solidificador é adicionado ao meio líquido
Geralmente é adicionado ágar, um polissacarídeo complexo extraído de
uma alga marinha, é preparado a uma concentração d e 1,5%.
Existem centenas de meios diferentes disponíveis comercialmente, desde
aquele que permitem o crescimento de muitos microrganismos até aqueles
que permitem o crescimento de somente um tipo de microrganismo.
Quanto ao estado físico os meios podem ser:
a) líquidos: (caldos) nutrientes são dissolvidos em água e esterilizados.
b) sólidos: são preparados a partir da adição, ao meio líquido de um agente
solidificante, antes da esterilização do meio.
ágar-ágar: polissacarídeo obtido de algas marinhas . Usado como agente
solidificante dos meios. Funde a 100°C e solidifica quando a temperatura é
menor de 45°C. Concentração 1,5 - 2% . Não serve como nutriente!!!!
c) semi-sólidos: obtido através da adição de uma quantidade reduzida de
agente solidificante (0,3 a 0,5% de ágar).
Cultivo de microorganismos
Cultivo de microorganismo
Meios líquidos: Multiplicação celular,útil para identificação e utilizados em reatores 
industriais.
Meios sólidos: usados para imobilização de microrganismos em placas ou tubos 
aparecimento de massas celulares -colônias;
Colônia: consiste na multiplicação de microrganismos 
em meio sólido importante para caracterização 
de microrganismos e identificação.
Cultivo de microorganismo
Os microbiologistas podem preparar os meios a partir de matérias-primas ou pós
desidratados, ou podem comprar meios prontos produzidos por indústrias de
suprimentos para laboratório.
Os meios complexos são altamente nutritivos;
 Geralmente mais fáceis de preparar;
São os mais usados (composição exata não é necessária);
Mais adequados para os organismos fastidiosos
Alguns organismos são fastidiosos, isto é, possuem necessidade nutricionais
especiais que podem ser difíceis de se encontrar em laboratório.
Os organismos que causam a gonorréia, crescem bem no corpo humano, mas ainda
não se pode fazê-los crescer facilmente em meios nutritivos de laboratório.
QUANTIDADE FUNÇÃO
ÁGUA 1 LITRO Solventes
PEPTONA 5g Substâncias hidrossolúveis de tecido animal, 
carboidratos, compostos de nitrogênio 
orgânicos, vitaminas e sais
EXTRATO DE CARNE 3g Nitrogênio orgânico e algumas vitaminas
NaCl 8g Íons e requerimentos osmóticos.
Meio complexo adequado a muitos organismos 
heterotróficos
Se um meio solidificado é requerido, o ágar é adicionado em 15g.
Cultivo de microorganismo
Cultivo de microorganismos
Meio de cultura sintético definido para organismos heterotróficos
Ingredientes quantidade Função
Glicose 1g Fonte de energia e carbono
NH4H2PO4 5g Fonte de nitrogênio, tampão e íons essenciais
K2HPO4 1g Tampão e íons essenciais
NaCl 5g Íons essenciais
MgSO4.7H2O 0,2g Íons essenciais
Água 1000ml solvente
Cultivo de microorganismos
Meios com finalidades especiais
Meio seletivo: é aquele que favorece o crescimento de alguns organismos, mas 
suprime o crescimento de outros.
•ágar Sabouraud: pH 5,6 e alta concentração de glicose (seletivo para fungos);
•O ágar SPS( SULFITO POLIMIXINA E SULFADIACINA ), ele permite o crescimento do
Clostridium botulinum, ao passo que inibe o crescimento da maioria das outras
espécies Clostridium;
Alimentos enlatados
Cultivo de microorganismos
Meio diferencial: possui um constituinte que causa uma mudança observável
(uma mudança de cor ou de pH) no meio quando ocorre uma reação bioquímica
específica. Esta mudança permite aos microbiologistas um determinado tipo de
colônia de outros que crescem na mesma placa.
O ágar SPS = SULFITO POLIMIXINA E SULFADIACINA ),
também serve como meio diferencial.
As colônias de Clotrisdium botulinum
formadas neste meio são escuras.
A maioria dos organismos que são normalmente encontrados nos intestinos de animais 
de sangue quente fermentam a lactose , bastante útil para detecção de organismos de 
origem fecal é utilizar meios que contenham lactose.
O ágar MacConkey contém o açúcar lactose e um indicador de pH que torna as
colônias fermentadoras de lactose vermelhas e deixa as colônias não - fermentadoras
sem cor ou translúcidas. Este meio é útil para indicação de patogênicos de origem fecal,
do grupo das bactérias coliformes
Cultivo de microorganismos
Cultivo de microorganismos
Meio de enriquecimento: Contém nutrientes especiais que permitem o
crescimento de um organismo específico que não deve estar presente em um
número suficiente para permitir ser isolado e identificado.
Os organismos da Salmonella Typhi por não serem suficientemente numerosos
para permitir uma identificação em uma amostra fecal, eles são cultivados em um
meio contendo selênio, que favorece seu crescimento. Após a incubação no meio
de enriquecimento, o aumento no número de organismos possibilita uma melhor
identificação.
Cultivo de microrganismos
Cultivo de microrganismos anaeróbicos
Para cultivar os anaeróbios obrigatórios, todo o oxigênio molecular deve ser removido
e mantido fora do meio. A adição ao meio de agentes que se ligam ao oxigênio, tais
como o tioglicolato, o aminoácido cisteína ou o sulfeto de sódio, impede que o
oxigênio cause efeitos tóxicos aos anaeróbios.
Quando for necessário estudar culturas em placas, utilizam-se jarras especiais que
possam conter tantos placas quanto tubos. As placas de ágar são incubadas em
jarras seladas contendo substâncias químicas que removem o oxigênio do ar.
•O envelope de Gaspak gera através de adição de água H2 e CO2;
•Jarra é fechada e O2 presente é removido por reação com o H2 catalisada 
pelo paládio formando água
MEDIDAS DO CRESCIMENTO
• Podem ser realizadas pelos seguintes métodos:
1) Peso seco total das próprias células
filtração, secagem e pesagem
2) Peso de algum componente celular
extração, secagem e pesagem
3) Variação no número de células
a) contagem de células totais (direta)
b) contagem de células viáveis (indireta)
Contagem microscópica direta
• Vantagens: método rápido e fácil
• Desvantagens:
Não distingue as células vivas das mortas
Pode-se omitir células pequenas
Células móveis precisam ser imobilizadas
Utilizam-se câmaras especiais de contagem (lâmina com grade quadriculada)
Ex.: Câmara de Neubauer
Contagem de células viáveis (indireta)
Contagem das colônias formadas em meio de cultura em placas.
São empregadas várias diluições decimais 
porque é difícil prever o número de viáveis.
É contada a placa com 30 a 300 colônias
• Diluição das suspensões celulares
Amostras concentradas precisam serdiluídas
MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO - Outros métodos
Turbidimetria
As células dispersam a luz e quanto mais células mais turvo é o meio
Pode ser medida com um espectrofotômetro
• O uso da turbidimetria exige a construção de uma curva padrão
Turbidez X quantidade de células
Contagem eletrônica
Diluição série
Para se fazer uma diluição em série, começa-se com organismos em meio
líquido. Acrescentando 1 ml deste meio a 9ml de água de diluição estéril,
cria-se uma diluição de 1:10; acrescentando 1 ml da diluição 1:10 a 9ml de
água de diluição estéril, cria-se uma diluição de 1:100, e assim por diante. O
número de bactérias por mililitro de fluido é reduzido em 9/10 a cada
diluição.
Contagem Bacteriano
1ml
1:10
1ml1ml
1ml 1ml 1ml 1ml
1:100 1:103 1:104 1:105 1:106 1:107
Métodos de obtenção contagem de 
microrganismos
O método Pour Plate
1. Uma metodologia de obter culturas puras é o método Pour Plate, que
utiliza diluições em série. São feitas diluições e coloca-se 1 ml do meio
líquido da diluição final em 9ml ágar fundido (45oC) e o meio é
rapidamente vertido em uma placa de Petri estéril. A placa resultante
conterá um pequeno número de bactérias .
2.Após o meio de ágar esfriar, solidificar-se e ser incubado, as colônias irão se
desenvolver tanto dentro do meio quanto em sua superfície. As células
suspensas no ágar fundido durante a preparação podem estar danificadas
pelo calor e, assim, não formarão colônias. Aquelas que crescem dentro do
ágar formarão colônias menores do que aquelas que crescem na superfície.
Método Pour Plate Diluição em série
POUR PLATE (Diluição)
O método do espalhamento em placa elimina os problemas que ocorrem
na técnica Pour-Plate, pois toda as células permanecem na superfície do meio
sólido. A amostra diluída é inicialmente colocada no centro de um meio de ágar
sólido e esfriado. Depois é espalhada homogeneamente na superfície do meio
com o auxílio de uma alça de vidro estéril.
Método de espalhamento em placa
Contagem de microrganismos
O Método de Esgotamento
Métodos de obtenção de cultura Pura
Métodos de obtenção de cultura Pura
Outra maneira correta de preparar culturas puras é utilizar o método de
esgotamento em placas de ágar. As bactérias são recolhidas com uma
alça metálica estéril, e a alça é movida levemente na superfície do ágar,
depositando as bactérias nas estrias resultantes a alça de inoculação é
flambada e algumas bactérias são retiradas da região já depositada e
estriadas em uma nova região. À medida que o esgotamento continua, cada
vez menos bactérias são depositadas, sendo a alça flambada após cada
estriamento. Os organismos individuais são depositadas na última região
estriada. Depois da placa ser incubada a uma temperatura de crescimento
adequada ao organismo, aparecem pequenas colônias, cada uma derivada
de uma única célula bacteriana.
Método de esgotamento
O método de esgotamento
Contador de colônias
Cada bactéria representa uma unidade formadora de colônias - UFC
Se as diluições forem feitas de maneira correta, o resultado serão placas
com um número contável de colônias de 30 a 300 por placa;
Para se contar o número real de colônias presentes, deve-se colocar
placa sob a lente de aumento de um contador de colônias , e as colônias
existentes na placa inteira serão contadas.
Contador de colônias
Contagem de células
Qual o número de colônias de 81colônias que foram produzidas plaqueando-se
uma diluição de 1/1000000 ?
Fator de diluição = 100.0000,
UFC/ml= 81x100000 = 8.100.000 UFC/ml
Para se determinar o número de unidades formadoras de colônias na cultura 
original, deve-se multiplicar o número de colônias encontradas na placa pelo 
o fator de diluição; se esta for uma fração deve-se usar o denominador. Um 
fator de diluição de 1000 seria expresso por 1:1000.
Contagem de células
Número mais Provável - NMP
Quando as amostras contêm poucos organismos para propiciar contagem
confiáveis do tamanho da população através de método de contagem
padrão, como no caso de estudo de água e alimentos, ou quando o
organismo não crescem em ágar, utilizam-se o método do número mais
provável (NMP).
Com este método, o técnico observa a amostra, calcula o número de
células e realiza uma série de diluições progressivamente maiores. Á
medida que o fator de diluição aumenta, será alcançado um ponto no qual
alguns tubos irão conter um único organismo, e, outros nenhum;
Um teste NMP típico é realizado em três baterias de cinco tubos, cada bateria
correspondendo a um volume ( 10ml, 1 e 0,1) de uma diluição. Aqueles que
contêm organismos mostrarão crescimento pela produção de bolha de gás
e/ou tornando-se turvos quando incubados.
Contagem de células
Número mais Provável – NMP Tabela Mc Crady
Outros Métodos de contagem de 
microorganismos
Quando a população de microrganismo é pequena pode utilizar o método
filtração.
Consiste na passagem de um volume conhecido de ar ou água em um papel
de filtro especial, o qual é colocado em um meio sólido. Após a
incubação percebe-se o crescimento de colônias e realizando assim a
contagem.
Filtração