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17/08/2015 1 Ácidos Nucléicos e o seu papel como material genético. Estruturas tridimensionais e composição de DNA e RNA Prof(a) Dra Janainna G Pacheco Faculdade de Talentos Humaos - FACTHUS Disciplina de Genética É uma estrutura central, portadora das informações hereditárias presente em todas as células. Nas células eucariontes o núcleo realmente chama-se núcleo ou núcleo eucarionte, enquanto que nas procariontes, nucleóide ou núcleo procarionte. O núcleo se diferencia do nucleóide pela presença da carioteca e pela complexidade. Núcleo Celular • Contém o material genético ou hereditário da célula, que são as moléculas de DNA e RNA da célula; •Coordena a vida da célula, ou seja, as funções metabólicas, como digestão, respiração, sensibilidade, etc; •Coordena todo o mecanismo de divisão (reprodução) da célula. Funções Nucleares Nucleotídeo Unidade básica formadora dos ácidos nucléicos Monômero: • Açúcar (pentose) • Grupo Fosfato • Base Nitrogenada 17/08/2015 2 Início da década de 1940 – Chargaff descobre a proporção 1x1 entre adenina e timina, e guanina e citosina, fundamental para o desvendamento da estrutura do DNA • Os ácidos nucléicos são moléculas muito mais simples que as proteínas . • Os ácidos nucléicos são formados de apenas 4 tipos de monômeros •Atualmente, a química dos ácidos nucléicos é fácil e muito bem padronizada • DNA = A, T, C e G • RNA = A, U, C e G • Derivados de nucleotídeos fora do núcleo: ATP, NAD e FAD • A união da base nitrogenada com o açúcar forma um composto chamado nucleosídeo; Ex:. Nucleosídeo adenosina (ATP) • Nucleotídeos unidos entre si formando os polinucleotídeos; • União sempre feita entre o fosfato de uma unidade e a pentose da unidade vizinha DNA: a informação genética • Prêmio Nobel em 1962 para Francis Crick, James Watson e Maurice Wilkins: determinaram a estrutura molecular do DNA e o seu significado na hereditariedade – o modelo da dupla hélice. • C se liga através de 3 ligações de hidrogênio à G; • A seqüência de bases de um filamento determina a seqüência de bases do outro. • Ex: AATCGATGT TTAGCTACA • Os dois filamentos que compõem a molécula não são iguais, mas sim complementares. 17/08/2015 3 •As fitas da molécula de DNA (dupla hélice) podem ser separadas. Esse processo é denominado desnaturação. •A renaturação ocorre quando se volta às condições físico químicas iniciais. Desnaturação e Renaturaçãodo DNA (1961 -Marmure Doty descobriu a Renaturação do DNA) • As duas fitas da dupla hélice podem ser reversivelmente separadas quando as PONTES DE HIDROGÊNIO são rompidas: Aumento de temperatura ou Extremos de pH(usamos pH alcalino para separar as fitas) As ligações fosfodiésteres ligam covalentemente os nucleotídeos e conferem uma polaridade química às fitas de DNA = extremidades 3’ e 5’ CADEIAS ANTIPARALELAS O DNA no núcleo •Um cromossomo : uma molécula de DNA •Genoma: o conjunto de cromossomos de uma dada espécie •Genoma Humano: 46 cromossomos •22 pares de CROMOSSOMOS AUTOSSÔMICOS •2 CROMOSSOMAS SEXUAIS •Total: 6 x 109 pares de nucleotídeos 17/08/2015 4 Composição química dos Cromossomos Eucarióticos Cromatina = DNA e Proteínas associadas (Histonas e não-Histonas). As histonas têm um papel estrutural importante (H1, H2a, H2b, H3 e H4) no empacotamento do DNA nos cromossomos. A DUPLICAÇÃO DO DNA •Enzimas que: • afastam os fios (helicase e primase) • união dos novos nucleotídeos (DNA polimerase) • correção de erros na duplicação • Desenrolam a dupla hélice (rompimento das ligações de H): nucleotídeos dissolvidos no nucleoplasma se encaixam = formação de outro fio complementar. A enzima DNA-polimerase sintetiza a nova fita de DNA na direção 5’ 3’ Forquilha de replicação é assimétrica Replicação é bidirecional 17/08/2015 5 À medida que as fitas de DNA se desenrolam, o DNA a frente da forquilha é forçado a se enroscar, podendo bloquear a replicação. Topoisomerases – catalisam a quebra e a religação das fitas de DNA. Fidelidade da Replicação Se a polimerase não pudesse corrigir erros haveria a inserção de 1 base errada a cada 104 nucleotídeos incorporados. A acurácia da replicação do DNA é crítica para a reprodução celular. Sistema de reparo reduz a taxa de erro para1 base errada a cada1010. Erros podem levar à mutação = evolução!? RNA: o controle da síntese de proteínas • Proteínas = morfologia e funcionamento do indivíduo • DNA = controla a fabricação de proteínas e as atividades da célula • A informação do DNA é interpretada e executada pelo RNA Os três tipos de RNA: • RNA-m = Leva o código do DNA para o citoplasma, onde determinará a sequência de aa da proteína; • RNA-t = Transporta aminoácidos; • RNA-r = Participa da estrutura dos ribossomos; • Trabalho dos três RNA é executado em duas grandes etapas: a transcrição e a tradução • DNA = RNA-m = Transcrição • RNA-m + RNA-t = Proteína = Tradução Transcrição do código genético: a síntese do RNA-m • Apenas um dos filamentos do DNA é usado para a síntese do RNA-m; • RNA polimerase = específica para ligar apenas riboses (diferente da DNA polimerase); • Síntese de RNA-m - Abertura da fita de DNA - encaixe dos nucleotídeos de RNA - AUGCCUGAU TACGGACTA 17/08/2015 6 Tradução do código genético: do RNA à proteína • Uma seqüência de bases no RNA passa para uma sequência de aa; • O código genético contido no DNA é materializado na forma de uma proteína; • Cada grupo de três bases consecutivas do RNA-m corresponde a um aa (códons); • UAG, UAA e UGA = fim; • AUG = metionina (começo). RNA-t • RNA-t = se liga aos aa dissolvidos no citoplasma e transportar essas unidades até o RNA-m. • RNA-t é um filamento de 70 nucleotídeos dobrado no espaço, com bases emparelhadas e livres; • Possui numa das extremidades as bases CCA. O anticódon varia de um transportador para outro, encaixando-se nos códons do RNA-m; • Para cada um dos vinte tipos de aa existe um transportador diferente, tornando o transportador específico (diferenças no anticódon); • Tradução realizada nos ribossomos; • RNA-t, com os respectivos aa, vão se encaixando nos códons correspondentes do RNA-m. •Anticódon CGA, RNA-t transporta alanina (códon GCU); • Códons do RNA-m determina a seqüência de aa = proteína = característica do organismo; • RNA-m desliza pelos polissomas = aa vão se unindo = liberação dos RNA-t; 17/08/2015 7 RNA-r: o catalisador do processo de tradução • Tradução envolve: ativação dos aa = pontos de começo e fim = remover aa metionina; • O RNA da subunidade menor catalisa a união RNA-m e RNA-t; • A subunidade maior confere as ligações peptídicas entre os a.a; • Tais subunidades se juntam no início e se separam no final; • A união de a.a em bactérias leva 1/20 s (400 aminoácidos em média 20s); • As proteínas são formadas por mais de uma cadeia polipeptídica (pontes bissulfeto, atrações elétricas e etc), sendo o gene responsável apenas pela fabricação de um polipeptídeo. As proteínas são formadas por um trabalho conjunto. Divisão celular Mitose 17/08/2015 8 Divisão celular • Desenvolvimento embrionário e posterior desenvolvimento dos organismos multicelulares; • Organismo adulto – reposição das células mortas – Homeostase dos tecidos – Regeneração dos tecidoslesados Ciclo celular e potencial proliferativo • Células em divisão contínua (lábeis) – Proliferam durante toda vida do indivíduo • Epitélios • Células Quiescentes (estáveis) – Baixo nível de replicação • Células renais • Células que não se dividem (permanentes) – Não se dividem na vida pós-natal (terminalmente diferenciadas) • Neurônios e células musculares cardíacas Ciclo celular Figura 17.3 – Alberts et al., 2004 - Biologia Molecular da Célula, 4ªed Fase G1 Interfase Fase G2 Fase S (replicação do DNA) Fase M Mitose (divisão nuclear) Citocinese (divisão celular) • Fases do ciclo celular – Intérfase • intensa atividade biossintética – Aumento da tamanho e do conteúdo celular – duplicação do DNA • Fase mais longa (90% a 95% do tempo total gasto por uma célula durante o seu ciclo) • G1, S e G2 – Fase M (mitose) • Segregação dos cromossomos e divisão nuclear e celular. • Origem de duas células-filhas Ciclo celular 17/08/2015 9 • Fase G1 – Reinício da síntese de RNA e proteínas e crescimento celular • Aumento do tamanho celular e da quantidade de organelas – Restabelecimento dos nucléolos – Influenciada por sinais extracelulares – Início da duplicação dos centríolos – Fase do ciclo mais variável em duração • Epitélio intestinal de rato – 9 horas • Células osteoprogenitoras – 25 horas • Fibroblatos em cultivo – 6 horas Estado G0 – inativação especializado • Interrupção do ciclo celular • Ponto de início, ponto de restrição ou ponto de não-retorno Após a passagem desde ponto, as células estão comprometidas a entrar na fase S e prosseguir até o final do ciclo de divisão Ciclo celular - Intérfase • Fase S – Replicação do DNA – Duplicação do centríolo – Síntese de RNA e proteínas – Crescimento celular • Fase G2 – Crescimento celular – Início da condensação da cromatina – Síntese de RNA e proteínas – Acúmulo de ATP – Término da replicação dos centríolos – Síntese e acúmulo de tubulina Ciclo celular - intérfase Ciclo celular - mitose • Mitose – Divisão nuclear e citocinese – Mais curta das fases – Baixa atividade sintética • Condensação da cromatina bloqueia a transcrição do DNA FASES DA MITOSE • A divisão celular é o período em que a célula reparte igualmente o seu conteúdo, já duplicado na intérfase, em duas células denominadas células-filhas; • Para facilitar o seu estudo, a mitose é subdividida em quatro etapas: PRÓFASE, METÁFASE, ANÁFASE E TELÓFASE. 17/08/2015 10 • PRÓFASE • Condensação gradual das fibras de cromatina ; • Este processo torna os cromossomos visivelmente individualizados e nitidamente compostos por seus dois elementos longitudinais idênticos – AS CROMÁTIDES; • As duas cromátides são unidas por um complexo de proteínas denominadas coesinas; • A condensação cromossômica é fundamental para evitar emaranhamento ou rompimento do material genético durante sua distribuição as células-filhas; • Centrossomos (1 par de centríolos) agem na formação do fuso como centros nucleadores da polimerização da tubulina em microtúbulos; • Com a ruptura do envoltório nuclear , os microtúbulos do fuso têm acesso aos cromossomos que apresentam cinetocoros maduros na altura dos centrômeros (PRÓ- METÁFASE); PRÓFASE • METÁFASE • Os cromossomos atingem o estado de condensação máxima; • O início desta fase é definido pela complementação do alinhamento dos cromossomos na região equatorial da célula formandoo a PLACA METAFÁSICA; • ANÁFASE • Ocorre a ruptura do equilíbrio metafásico com a separação e migração das cromátides que agora passam a ser chamados de cromossomos-filhos; • Ocorre o encurtamento dos cromossomos por perda de dímeros de tubulina nas extremidades polares; 17/08/2015 11 • A telófase tem início quando os cromossomos-filhos alcançam os respectivos pólos, o que se caracteriza pelo total desaparecimento dos microtúbulos cinetocóricos • Reconstituição dos núcleos e a divisão citoplasmática, levando a formação das células-filhas • Descondensação da cromatina e a retomada da capacidade de transcrição; • Reorganização dos nucléolos e reconstituição do envoltório nuclear; • Esses eventos ocorrem pela inativação do complexo ciclina-CdK, que é responsável por iniciar a mitose fosforilando proteínas celulares; TELÓFASE Intérfase Prófase Prometáfase Metáfase Anáfase Telófase Citocinese Ciclo celular - mitose Citocinese – divisão do citoplasma que ocorre devido a interações entre os filamentos de actina e miosina; MEIOSE • É o processo de divisão celular que ocorre nas células germinativas, localizadas nas gônadas de organismos animais e vegetais que se reproduzem sexualmente e que dão origem às células sexuais ou gametas; 17/08/2015 12 A meiose produz células com a metade do número de cromossomos da célula-mãe; Na intérfase ocorre a duplicação do material genético; Se o DNA foi duplicado, para reduzir o número de cromossomos a metade nas células-filhas é preciso que haja duas divisões celulares. A meiose produz quatro células filhas, todas haplóides. A sequência de eventos que levam a primeira divisão da meiose é chamada de meiose I ou reducional. A segunda sequência é dita meiose II ou equacional. FASES DA MEIOSE • Em um primeiro momento as células germinativas passam pelas intérfase onde ocorre a duplicação dos cromossomos; • Após a duplicação dos cromossomos tem início a primeira fase na meiose I; PRÓFASE PRÓFASE I • É um período exageradamente demorado, em comparação com a prófase da mitose. Exemplo: Formação dos gametas na espécie humana (ovogênese – mulher e espermatogênese – homem); Sexo feminino: A meiose tem inicio nas células da linhagem germinativa dos ovários (ovogônias) durante a fase embrionária; No quinto mês da vida intra-uterina todos os ovócitos estão na prófase I; Estes células pré-gaméticas permanecem na prófase I até por vários anos até a maturidade sexual (puberdade); PRÓFASE I Por ser uma fase muito longa e com muitos detalhes a prófase I está dividida em 5 subfases: • Leptóteno – a cromatina começa a se condensar gradualmente em cromossomos; Iniciam o processo de aproximação e pareamento entre homólogos – SINAPSE; 17/08/2015 13 PRÓFASE I • Zigóteno – A sinapse ocorre ordenadamente, aproximando os homólogos, que se alinham lateralmente, mas não se fundem; Paquíteno – Cromossomos permanecem emparelhados. O conjunto cromossômico é denominado de bivalente ou tétrade; PRÓFASE I Paquíteno - Nesta fase ocorre a troca de segmentos de DNA entre cromossomos homólogos; PERMUTA, CROSSING OVER OU RECOMBINAÇÃO GENÉTICA PRÓFASE I Diplóteno Início da separação dos cromossômos homólogos; Formação dos quiasmas; Fase longa onde ocorre aumento do volume celular; PRÓFASE I Diacinese Os cromossomos homólogos se afastam um pouco; Ocorre a terminalização dos quiasmas; Nesta fase o envoltório nuclear é desfeito; Sem o envoltório nuclear os cromossomos se ligam no fuso acromático que foi montando durante a prófase I; 17/08/2015 14 METÁFASE I • O fuso como na mitose dispões os cromossomo na região equatorial da célula; • Diferança – os homólogos ficam lado a lado; ANÁFASE I Os cromossomos são puxados para os pólos da células;Diferente da mitose – não ocorre a quebra do centrômero e portanto não ocorre a separação das cromátides e sim a separação dos cromossomos homólogos (disjunção ou segregação); TELÓFASE I Os cromossomos homólogos já separado se descondensam parcialmente; O envoltório nuclear se refaz dos dois lados e ocorre citocinese a divisão do citoplasma; BALANÇO DA MEIOSE I • Ao final da meiose I formam-se duas células com metade do número de cromossomos; • Cada cromossomo das células-filhas são duplos, pois não houve separação das cromátides na anáfase; • As células formadas são haplóides pois elas não possuem pares de cromossomos homólogos; 17/08/2015 15 Entre a meiose I e meiose II ocorre um pequeno intervalo denominado de intercinese; Neste intervalo não ocorre a duplicação do DNA; MEIOSE II OU EQUACIONAL Nesta fase acontecerá eventos com as células-filhas formadas na meiose I que culminarão para a formação de quatro células-filhas; As células-filhas terão o mesmo número de cromossomos das células que lhe deram origem, por isso equacional; Ao invés dos cromossomos serem duplicados eles serão simples; PRÓFASE II • Os cromossomos voltam a se condensar; • Os centríolos migras para os pólos opostos e formas as fibras do fuso; • Membrana nuclear se desfaz; METÁFASE II Os cromossomos ligados as fuso são transportados para região equatorial da célula; O fuso consegue se ligar dos dois lados do cromossomo; 17/08/2015 16 ANÁFASE II Devido a tração do fuso em sentidos diferentes ocorre a quebra do centrômero e a separação das cromátides irmãs como na mitose; TELÓFASE II • O envoltório nuclear se refaz e a citoplasma se divide formando 4 células-filhas; BALANÇO DA MEIOSE II • Formam-se 4 células haplóides; • Seus cromossomos são simples devido a separação das cromátides na anáfase II; MEIOSE 17/08/2015 17 MITOSE X MEIOSE Gametas Gametogenese É o processo pelo qual os gametas são produzidos nos organismos dotados de reprodução sexuada. GAMETOGÊNESE ESPERMATOGÊNESE OVOGÊNESE 17/08/2015 18 Fases da Gametogênese 1. A espermatogênese é um processo contínuo, enquanto a ovogênese está relacionada ao ciclo reprodutivo da mulher; 2. Na espermatogênese, cada espermatogônia produz 4 espermatozóides. Na ovogênese, cada ovogônia dá origem a apenas um ovócito e células inviáveis denominadas corpúsculos polares; 3. A produção de gametas masculinos é um processo que se continua até a velhice, enquanto que a produção de gametas femininos cessa com a menopausa; 4.O espermatozóide é uma célula pequena e móvel, enquanto que o ovócito é uma célula grande e sem mobilidade; 5.Quanto à constituição cromossômica, existem dois tipo de espermatozóides: 23,X ou 23,Y. A mulher só produz um tipo de gameta quanto à constituição cromossômica: 23,X. Diferenças
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