estudo dirigido pratica bioquimica (1)

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ESTUDO DIRIGIDO
A) O que é pH ótimo de uma enzima? Como ele pode ser determinado?
Quando ela tem sua maior atividade enzimática. Pode ser determinado pelo valor da absorbância e pelo gráfico (quanto ta lá em cima).
B) De acordo com os dados da tabela, calcule a porcentagem de atividade da sacarase para cada pH:
	Ph
	Absorbância
	3
	0,04
	3,5
	0,06 =18,75
	4
	0,27 =84,375
	4,5
	0,32
	5
	0,26 =81,25
	5,5
	0,20 =62,5
	6
	0,18 =56,25
	6,5
	0,05 =15,625
	7
	0,03 =9,375
 C) identifique o pH ótimo da sacarase de fermento: PH 4,5 PORQUE TEM A MAIOR ABSORBÂNCIA.
A) Escreva a reação de hidrólise da sacarose, catalisada pela sacarase.
Sacarose sendo quebrada pela sacarase formando glicose e frutose.
B) Escreva a reação que ocorre entre os açúcares redutores formados a partir da hidrólise da sacarose e o reagente de DNS (ácido 3,5 dinitrosalicílico). Porque esta reação é importante na determinação da atividade enzimática?
 É importante porque o DNS reage com açúcares redutores permitindo quantificá-los.
 REAÇÃO: açúcar redutor + 	DNS oxi (amarelo) forma acido aldonico + DNS redutor (castanho).
C) Além de reagir com açúcares redutores, qual a função do regente de DNS, no ensaio enzimático? Parar a reação e corar.
A) De acordo com os dados apresentados abaixo, calcule a atividade da sacarase de fermento.
	Tubos
	Temperatura
oC 
	Tempo
Min
	Absorbância
	1
	17
	5
	0,07
	2
	17
	10
	0,25
	3
	17
	15
	0,34
	4
	17
	20
	0,55
Data:
 Dados: Curva Padrão de glicose: A= 0,73.C onde A é a absorbância 
 C é a concentração em micromol
 Considere o valor do intercepto da reta (Abs x tempo) igual a zero
0,07 / 5 = 0,014
0,25 / 10= 0,025
0,34/15= 0,022
0,55/20= 0,0275
Fazendo a media = 0,01525
SUBSTITUINDO NA EQUAÇÃO A= 0,73. C = 0,020
 B) Qual a influência da temperatura na atividade enzimática?
 Quanto maior a temperatura maior a atividade (velocidade) enzimática. Em temperaturas muito elevadas pode desnaturar a enzima.
A) Defina Vm e Km de uma enzima: Vm velocidade máxima, Km é a concentração de substrato na metade dessa velocidade.
 B) A partir da atividade enzimática da sacarase, obtida em várias concentrações de substrato, determine graficamente o valor de Km e Vm.
	[Substrato] (mol/L)
	Velocidade (U/mL)
	0,02
	90
	0,03
	125
	0,04
	143
	0,05
	168
	0,06
	190
	0,08
	200
	0,1
	220
 x
 220
 200
 190
 168
 143
 125
 90
 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1 y
 
QUESTÕES DA PROVA QUE ELE PASSOU
A)O que é eletroforese? Movimento de uma molécula carregada em um campo elétrico.
B)Quais os componentes básicos necessários para realizar a eletroforese?
Campo elétrico,suporte, molécula carregada.
C) 
	Tubos
	substrato 
	abs
		Abs/t (10mim)	v
	1
	0,02
	0,125
	0,125/ 10 =0,0125	0,037
	2
	0,03
	0,200
	
	3
	0,04
	0,302
	
	4
	0.05
	0,397
	
	
	
	
	
	
	
	
	
Continuando a tabela 1/V = 1/0,037 = 27,02
 1/ S = 1 / 0,02= 50
Para achar o volume use a equação: A= k . V (k ele da)
0,0125 = 0,33x V = 0,037
Faz gráfico baseado no 1/V é no eixo x e 1/S é no eixo y
Depois pega o valor de Velocidade máxima faz 1/V (exemplo vm passa em 2,5 faz 1/2,5 =0,4)
E depois o valor de Km (onde passa o Km exemplo 12,5 e faz 1/12,5 = 0,08)e faz 1/ Km
D) Pratica do PH ! pegamos a enzima e o substrato, quais foram respectivamente:
SACAROSE E SACARASE
Produtos: glicose e frutose
E) A absorbância foi maior em um qual foi ?
Onde a enzima teve mais condição para formar produto, onde tem PH e temperatura ótimas.
F) Máxima velocidade: para catalisar o substrato a enzima tem que estar no PH ótimo.
G) O que é temperatura ótima? A temperatura favorece a enzima trabalhar e desenvolver melhor os resultados.
 
QUESTÕES DA PROVA 2
2)Em relação a eletroforese em gel marque a alternativa CORRETA.
As moléculas são separadas de acordo com seu tamanho, as de menor massa situam-se na porção inferior do gel e as de maior massa na porção superior.
3)Tres enzimas A,B e C foram avaliadas em diferentes phs quanto á sua % de atividade. A enzima A possui seu ph ótimo próximo ao ph neutro (7), a enzima B mais básico (maior que 7) e a enzima C mais acido. (menor que 7)
A) Pela figura a seguir, identifique A,B, C: 
 C A B
 1 7 14
B )o que ocorre com a enzima A em PH 2 e 12 ? a enzima desnatura
4)No quadro abaixo é apresentado o resumo das informações do ensaio de uma enzima em vários pH. a)Qual o ph ótimo ? Ph 6,0 
 b)o que se entende por PH ótimo da enzima ? ph onde a enzima apresenta a sua maior atividade catalítica.
 5) a) Qual temperatura ocorre a maior atividade enzimática ? 37º
b)Qual a influencia da temperatura na atividade enzimatica? A temperatura aumenta a atividade enzimática, onde é na temperatura ótima que ela apresenta a sua maior atividade catalítica.
c) Calcule a atividade (velocidade) da sacarose do fermento em absorbância por minuto nas duas temperaturas (18º e 37º)
	Tubos
	Temperatura
oC 
	Tempo
Min
	Absorbância
	1
	18
	5
	0,07
	2
	18
	10
	0,25
	3
	18
	15
	0,34
	4
	18
	20
	0,55
	5
	37
	5
	0,48
	6
	37
	10
	0,92
	7
	37
	15
	1,39
	8
	37
	20
	1,80
faz com todas
0,07/05 = 0,014 
0,25/10 = 0,025
 =0,023 faz media : 0,0225 e joga na formula = (18 º)
 =0,028
 =0,096
 =0,092 faz media 0,09275 e joga na formula = (37 º)
 =0,093
 =0,09
Questão 6 : quais as funções do acido 3,5 dinitrosalietilico (DNS) nos experimentos realizados com a enzima sacarase? Porque ele muda de cor na presença de glicose e frutose ?
O DNS para a reação (pois ele com o ph em torno de 12,0) desnatura a enzima sacarase que tem melhor atividade em ph em torno de 4,5.Server para quantificar o produto formado.
Questão 7 Marque V ou F
(F) a sacarase é uma enzima que atua sobre o dissacarídeo sacarose hidrolisando(quebrando)em apenas glicose
(F) ph otimo é o ph em que a enzima não apresenta atividade enzimatica.
(V) A velocidade de reação enzimática é definida como sendo quantidade de produto formando (micromol) durante um tempo de 1 min de reação.
(F) Raio x é equipamento utilizado para realizar as leituras nas aulas praticas
(F) O reagente DNS não atua paralisando a reação enzimática.
8)Defina colorimetria: método instrumental para determinação quantitativa de substancias por meio de absorção ou transmissão da luz por soluções coloridas.
9) Pra que serve o “branco” utilizado nas aulas praticas? Para zerar o espectrofotômetro 
10)Quatro enzimas diferentes foram testadas para avaliar suas atividades em determinado substrato. A enzima A apresentou Km= 6,8 x 10- 1 M, a enzima B km= 1,0 x 10-1 M, a enzima C km= 4x10-1 M e a enzima D km= 8x10-1 M. qual das enzimas possui maior afinidade pelo substrato? Explique: Quanto menor o km maior a afinidade B
11) Acerca da função enzimática, quais os tipos de problemas podem vir em conseqüência de uma febre muitoalta?
 As proteínas e as enzimas podem ser desnaturadas causando um desequilíbrio no organismo prejudicando suas funções.
É a maior absorbância !
0,32 --- 100
0,32----- x 
X= 100
Faz para todos usando
 0,32 --- 100
É a maior absorbância !
0,32 --- 100
0,04----x
X= 12,5