Métodos de Quantificação Microbiana

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Métodos de Quantificação Microbiana 
Aline dos S. Garcia Gomes 
 
1. Qual é a importancia de quantificar os microrganismos? 
 
Determinar qual o melhor meio para um cultivo 
Elaborar estratégias para inibir o crescimento microbiano 
Conhecer os padrões de crescimento de diferentes espécies 
Controlar reações químicas (tempo x atividade metabólica x número de células) 
 
 
 
 
 
 
 
2. Quantificação microbiana 
 
O crescimento de uma população microbiana pode ser medido estimando-
se o número de células dessa população ou até mesmo quantificando-se 
algum componente celular. 
 
 2.1 Quantificação Direta 
 - Contagem direta ao microscópio 
- Contagem em Placas 
- Filtração 
` 2.1.1 Contagem direta ao microscópio 
 
 
 
Número de células total/número de quadrados x diluição x fator da câmara 
 
Método rápido para se conhecer o número total de células em solução 
 
 
Limitações 
Não destingue vivo de morto 
Células muito pequenas são difíceis de ser visualizadas (coco bacilos) 
Agregados celulares 
Não é adequado para suspensões com baixa densidade populacional 
Lembrar de imobilizar células móveis 
Depende diretamente do olho do manipulador 
` 
2.1.2 Contagem em Placas 
 
 
 Contando células vivas (capazes de se reproduzir) 
 Contagem em meio sólido �quantas células são capazes de formar 
colonias? 
Altamente sensível podemos contar amostras que possuem pouca 
densidade populacional 
 
 
 
 
 
Limitações 
Alta densidade populacional requer que o inóculo seja diluído � fusão de 
colônias 
Contagem de 30-300 colônias � significância estatística (replicatas) 
Conhecer o requerimento nutricional e condições de incubação ideais � 
utilização de padões para alcançar o maior número de colônias 
 Células depositadas sobre o meio nem sempre se desenvolvem na mesma 
velocidade 
 Colonias muito pequenas podem não ser percebidas pelo avaliador 
Unidade Formadora de colonia=UFC 
UFC – pode ou não corresponder a uma célula inicial ... 
 
Amostras de água e solo 
 “Anomalia da contagem em placa” 
 Menor numero na contagem em placa do que na contagem por 
microscopia 
Diferentes microrganismos � diferentes requerimento nutricionais 
subestimação da população total dessas amostras 
 
 
2.1.3 Filtração 
Baixo número de células � concentrar fazendo um líquido passar por um 
sistema de filtragem. 
 
 
Transferência do filtro para uma placa de petri contendo meio nutritivo � 
formação de colônias. 
 
Limitações 
Apenas para amostras com baixa densidade populacional 
Conhecer o requerimento nutricional e condições de incubação ideais � 
utilização de padões 
Fusão de colônias 
 
2.2 Quantificaçãos Indireta 
 - Peso seco 
- Turbidimetria 
 - Análises químicas 
 
` 2.2.1 Peso seco 
 Muito usado para fungos filamentosos 
Lavagem das células com água destilada seguida de secagem a 100
○
C ou 
liofilizada � pesagens sucessivas até o momento onde não se observa mais variação 
no peso 
 
 
 2.2.2 Turbidimetria 
 2.2.2.1 Espetrofotometria e Colorimetria 
 Crescimento microbiano = turbidez do meio de cultura 
 
Quantificação em espectrofotometros ou colorímetros 
 660 nm � a cor do meio não inerfere com a leitura 
 
 
 
A quantidade de luz que atravessa o detector é inversamente proporcional ao nº de 
bactérias. 
Quanto > o nº. de bactérias < a quantidade de luz que é transmitida 
 
 
 Limitações 
Menos sensível 
Não permite a identificação de células viáveis 
 Necessidade de confecção de uma curva padrão 
 
 2.2.2.2 Escala de Macfarland 
 BaSO4 – sulfato de bário 
 
Diferentes concentrações do sal equivalem a turbidez distintas = 
número de células 
 
 2.2.3 Análises Químicas 
 Quantificação de proteínas (ou de nitrogênio) 
 Produtos metabólicos (etanol, CO2, acidos)