Nado Forçado

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
BIOTECNOLOGIA
BIOENSAIOS
 
 
 
 
 
 
Teste do Nado Forçado
 
 
 
 
 
 
 
MANAUS
2017
UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
BIOTECNOLOGIA
Thaynara Luna
 
 
 
 
 
 Teste do Nado Forçado
Bioensaios 
 
 
 
O relatório a seguir é requisito de aprovação na disciplina de Bioensaios na Universidade Federal do Amazonas (
UFAM
), pelo Instituto de Ciências Biológicas (
ICB
), no curso de graduação em Biotecnologia. 
 
 
MANAUS
2017
INTRODUÇÃO
	A depressão tem sido avaliada como um transtorno com alta prevalência, possibilidade de recorrência e cronicidade (Fleck & cols., 2003; Hexsel, 2004), que pode afligir parcela considerável da população, independente de sexo, idade ou etnia (Souza, Fontana & Pinto, 2005). Essa doença vem sendo apontada como um grave problema de saúde pública, relacionado a elevados custos sociais e risco de suicídio (Hexsel, 2004; Machado, 2003). Segundo dados do relatório da World Health Organization (2001), as perturbações depressivas unipolares, dentre todas as doenças, ocupariam o quarto lugar, em se considerando a geração de encargos, respondendo por 4,4% do total de AVAI (Ano de Vida Ajustado por Incapacidade) e sendo a principal causa de AVI (Anos Vividos com Incapacidade). 
	A depressão é considerada uma doença potencialmente ameaçadora à vida, com um índice de suicídio chegando 15% entre os deprimidos. Os fármacos antidepressivos proporcionam uma completa remissão para apenas cerca de 50% dos indivíduos, além de causarem vários efeitos colaterais.
A maior parte dos modelos animais ou testes comportamentais existentes até o momento possui boa validade preditiva, porém baixa analogia ou homologia. Dentre os testes com boa validade preditiva está o teste do nado forçado (TNF) baseado no modelo ou paradigma de “desespero comportamental” (PORSOLT et al., 1977). O Teste Nado Forçado é um teste comportamental empregado na avaliação de fármacos com potencial atividade antidepressiva (PORSOLT et al., 1977, 1978, BORSINI et al., 1989; DETKE et al., 1997; DAL-ZOTTO et al., 2000; KITAMURA et al., 2004; LINO-DE-OLIVEIRA et al., 2005). Nesse tipo de teste, ratos ou camundongos são expostos a uma situação supostamente aversiva chamada de nado forçado: nadar em um tanque cilíndrico com uma quantidade de água que impeça o apoio das patas no fundo do cilindro e que impeça a fuga pela borda superior. No início do teste os animais nadam e fazem movimentos de “escalar” as paredes internas do cilindro e com o passar do tempo adotam uma postura de imobilidade. Uma possível explicação deste padrão comportamental é que após o período inicial de “luta” os animais “percebem” que não tem rota de fuga do cilindro e “desistem” de tentar escapar (daí o termo “desespero comportamental” utilizado por Porsolt e colaboradores em 1977). O TNF e o TSC têm sido muito usados para avaliar a atividade antidepressiva na fase pré-clínica, devido a sua fácil utilização, grande reprodutibilidade entre os laboratórios e a sua grande habilidade de detectar um grande espectro de agentes antidepressivos (BORSINI; MELI, 1988; CRYAN; MARKOU; LUCKI, 2002; NESTLER et al., 2002).
	O teste do campo aberto é realizado em uma arena circular ou quadrada cercada por paredes de forma que o animal não possa fugir. O assoalho é marcado com pequenos quadrados, o que permite a quantificação da atividade locomotora do animal. Esse teste foi desenvolvido por Hall,4 sugerindo que a defecação é a atividade motora do animal no campo aberto como indicadora de seu estado emocional. Alta defecação e baixa atividade locomotora indicariam a ansiedade do animal. Pode-se também utilizar a atividade locomotora do animal no centro do campo aberto como medida da mais seletiva de ansiedade, enquanto a atividade locomotora na periferia do aparato como um indicador da atividade locomotora do animal. O efeito de drogas ansiolíticas tem sido amplamente demonstrado nesse modelo.
OBJETIVO
Demonstrar o efeito de drogas de ação central no comportamento animal.
Demonstrar o efeito de atividade depressora ou estimulatória de drogas de ação central.
Compreender o efeito de diferentes drogas psicoestimulantes e ansiolíticas no comportamento de roedores.
MATERIAIS E MÉTODOS
	MATERIAL:
Seringas de 1 ml
Drogas: Clonazepam, Fenobarbital e Cafeína
Soro Fisiológico
METODOLOGIA
Os animais foram pesados e identificados. Após a identificação, os animais foram tratados da seguinte forma:
1 animal recebeu Solução Salina 0,9% (soro fisiológico) via oral;
1 animal recebeu sol. Clonazepam 0,5 mg/kg via intraperitoneal;
1 animal recebeu sol. Fenobarbitaç 10 mg/kg via intraperitoneal;
1 animal recebeu sol. Cafeína 500 mg/kg via oral;
Após o tratamento, os animais foram colocados em gaiolas individuais e observados por 90 minutos, de acordo com os parâmetros relacionados, nos tempos de 5, 10, 15, 30, 60 e 90 minutos após a administração das drogas.
PARÂMETROS:
Estimulação do SNC: aumento da atividade motora espontânea, piloereção, exoftamia, convulsões clônicas ou tônicas.
Depressão do SNC: redução da atividade motora espontânea, sedação, ptose, catalepsia.
Efeitos autônomos: piloereção, micção, defecação e salivação.
Campo Aberto
O trabalho constituiu de observações do comportamento exploratório em campo aberto, cada animal foi observado por 5 minutos. O primeiro minuto foi para adaptações e os minutos restantes foram para análise do real comportamento. 
Os parâmetros analisados foram:
Locomoção periférica: refere-se quando o animal passa para o outro quadrante com as quatro patas. No campo aberto esse movimento está relacionado à ansiedade e medo. 
Locomoção central: tem os mesmos parâmetros para locomoção periférica, mas acontece na região central. Esse movimento mostra o grau de ansiedade. 
Levantar: é quando o animal eleva os membros superiores e a cabeça, ficando apoiado somente pelos membros inferiores. Este parâmetro relaciona-se a calma. 
Tempo de imobilidade: mensurado em segundos, significa o tempo que o animal ficou imóvel, indicando a tranquilidade do animal. 
Tempo de limpeza: foi o tempo dispensado para limpeza feita quando o animal passa os membros superiores sobre a cabeça. Está relacionado à tranqüilidade. 
Defecação: foi o número de vezes que o animal defecou. Este parâmetro indica que o animal apresenta medo ao ambiente novo.
Teste Nado Forçado 
Para detectar o efeito antidepressivo foi utilizado o teste do nado forçado. Este teste foi desenvolvido por Porsolt; Bertin e Jalfre (1977) para a pesquisa com drogas antidepressivas.
O teste consistiu em colocar o animal em um tanque cilíndrico (béquer de plástico de 1L, 13 cm de diâmetro) contendo água limpa a 25°C e uma profundidade de 11,5 cm. 
O tempo de imobilidade foi cronometrado durante 6 minutos. Cada animal permaneceu por 6 minutos no cilindro com água, sendo o primeiro minuto para adaptação e os minutos restantes para análise real. Durante o teste foram anotados os comportamentos apresentados pelo animal e o tempo de imobilidade é medido, sendo este comportamento interpretado como desespero comportamental (BARROS; FERIGOLO, 1998; PORSOLT et al., 1978; PORSOLT; BETIN; JALFRE, 1978; PORSOLT; LEPICHON; JALFRE, 1977). Após o término do teste, cada animal foi seco com uma toalha e colocado de volta em sua gaiola.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
No teste do nado forçado, o tratamento com Clonazepam aumentou o tempo imobilidade do camundongo. Após 47 segundos, o camundongo I foi retirado do cílindro, pois não apresentou movimentos mínimos necessários para manter a cabeça acima da água ou permanecer boiando, o que caracteriza um efeito depressor do fármaco sobre o Sistema Nervoso Central (SNC). O tratamento com Cafeína diminui a imobilidade do camundongo e aumentou o tempo total de mobilidade, o camundongo II apresentou nado utilizando as 4 patas e a cauda vigorosamente, fazendo movimentoshorizontais e trajetória circular no cílindro. O tempo de nado no tratamento com Cafeína foi de 3 minutos e 59 segundos. Após 90 minutos do tratamento com Cafeína o camundongo foi colocado no cílindro, dessa vez o tempo de nado diminuiu para 2 minutos e 14 segundos. Em ambos os testes foram observados efeitos autônomos como micção e defecação.
	O teste em Campo Aberto (CA) é utilizado para avaliar o comportamento geral locomotor e exploratório dos roedores e é bastante utilizado em conjunto com o teste de nado forçado. O camundongo que recebeu o tratamento com cafeina, na observação por 5 minutos foi que em locomoção periferica ele passou por 38 quadrantes, não parou nenhuma vez no quandrante central, apenas passou pelo mesmo, tempo de imobilidade foi de 1 minuto e 30 segundos. Após 1 hora, foi feita uma nova observação por 5 minutos, dessa vez ele passou apenas por 9 quadrantes e ficou imóvel por 2 minutos e 30 segundos. Já o camundongo tratado com Clonazepam ficou imóvel os 5 minutos no local que foi colocado.
CONCLUSÃO
	Ao longo dos anos, o Teste de Nado Forçado e Campo Aberto tem sido vastamente por vários grupos de pesquisa não só para avaliar o potencial antidepressivo dos fármacos, mas também tem sido utilizados para averiguar o mecanismo de ação desse fármacos. Modelos animais ainda são indispensáveis na pesquisa experimental para avaliação da ação dos fármacos no comportamento animal. Com esses modelos é possível determinar que tipo de resposta o fármaco é capaz de provocar, tipo de ações a substância é capaz de promover, o tempo de resposta, potência da resposta e o mecanismo de ação da droga.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
	Joca, Sâmia Regiane L., Cláudia Maria Padovan, and Francisco Silveira Guimarães. "Stress, depression and the hippocampus." Revista brasileira de psiquiatria 25 (2003): 46-51.
	Fernandes, Eduardo Vignoto, et al. "Efeitos comportamentais e imunológicos da fluoxetina em ratos submetidos ao nado forçado." Psicologia: Teoria e Pesquisa 28.4 (2012): 409-415.
	Cruz, A. P. M., e Landeira-Fernandez, J. Modelos animais de ansiedade e o estudo experimental de drogas serotonérgicas.
	VASQUES-ARAÚJO, T., and A. C. G. PRIANTI–JUNIOR. "ESTUDO DO COMPORTAMENTO DE CAMUNDONGOS WISTER DECORRENTE DA INFLUÊNCIA DO ESTRESSE SONORO E LUMINOSO.’
	Costa, Ana Paula Ramos. "Estudos da estrutura comportamental de camundongos nos testes de nado forçado e da suspensão pela cauda." (2012).
Oliveira, Danillo Ramos de. "Avaliação da atividade tipo antidepressiva do óleo essencial das folhas de Spiranthera odoratissima A. St.-Hil. e de seu componente majoritário, β-cariofileno." (2016).