Curso de Verão PCR

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Bsc. Maria Carolina Viana 
Divisão de Genética - Instituto Nacional de Câncer 
PCR – Polymerase Chain 
Reaction 
PCR – Polymerase Chain Reaction 
Ou Reação em Cadeia da Polimerase 
Processo semiconservativo de cópia (amplificação) exponencial de um 
segmento específico de DNA, a partir de uma pequena quantidade do 
DNA original (DNA molde). 
 
 
 
A reação "in vitro" utiliza elementos sintéticos básicos para o processo de 
replicação do DNA, onde as duas cadeias se separam e novas cadeias 
complementares são produzidas. 
A reação é realizada em aparelhos chamados TERMOCICLADORES e é 
composta de três etapas que se intercalam, com diferentes temperaturas, 
formando um ciclo. 
Reação em Cadeia da Polimerase 
Essas etapas são: 
 Desnaturação 
 
 Anelamento 
 
 Extensão 
 
Etapas da PCR 
 
* Ciclagem básica 
Elementos básicos sintéticos + H2O estéril + DNA molde 
Ambiente e material estéril 
DESNATURAÇÃO INICIAL / DESNATURAÇÃO 
A elevação da temperatura promove a separação das duas cadeias da 
dupla fita de DNA através da quebra das pontes de hidrogênio entre as 
bases complementares. 
5’ ‘3 
3’ ‘5 
5’ ‘3 
3’ ‘5 
ANELAMENTO 
Pareamento dos iniciadores com região pré-determinada do DNA molde. 
 
* Determinação dos iniciadores 
Ex.: Fragmento 4CD do éxon 4 do gene MECP2 
 
1. Busca de sequências em banco de dados online (GenBank) 
ANELAMENTO 
2. Alinhamento de sequências; 
 
 
 
 
 
3. Escolha de regiões conservadas; 
ANELAMENTO 
4. Teste dos primers – Ferramentas online 
- IN-SILICO PCR 
Escolha do banco de dados Primers desenhados baseados em regiões 
conservadas 
ANELAMENTO 
4. Teste dos primers – Ferramentas online 
- PRIMER 3 
Sequência nucleotídica do 
fragmento desejado 
Opção Primers desenhados baseados em regiões conservadas 
OU 
Primers sugeridos pela ferramenta 
ANELAMENTO 
Pareamento dos iniciadores Primer F 
Primer F 
Primer R 
Primer R 
TAQ 
DNA 
POL 
TAQ 
DNA 
POL 
5’ ‘3 
3’ ‘5 
5’ ‘3 
3’ ‘5 
5’ ‘3 
3’ ‘5 
EXTENSÃO / EXTENSÃO FINAL 
Primer F 
Primer R 
TAQ 
DNA 
POL 
TAQ 
DNA 
POL 
TAQ 
DNA 
POL 
TAQ 
DNA 
POL 
Primer F 
Primer R 
Amplificação exponencial 
5’ ‘3 
3’ ‘5 
5’ ‘3 
3’ ‘5 
Resultado da PCR 
O resultado da PCR é verificado por eletroforese em gel de agarose. 
O produto da PCR é submetido a um campo elétrico e os amplicons 
migram através do gel, deixando marcas (bandas) que são quantificadas 
em pares de base (pb) de acordo com o marcador molecular.