RELATORIO DE BROMATOLOGIA - Determinação de proteínas

Prévia do material em texto

Universidade de Marília
Nutrição
3º Termo
Turma 2º horário 
Relatório de aula prática
Determinação de Proteína
(Método Kjeldahl)
Disciplina: Bromatologia
Docente: Prof.ª Dr.ª Bruna Lima da Silva
Discentes: 
Ana Beatriz Yonezawa
Ana Laura Ferreira de Paula Souza
Francielly A. F. de Moura
Giovanna Giandomênico Kalaf
Isabella Martins Decanini
Larissa Oliveira S. Silva
Thauany Ribeiro
Lívia Baroni
Joice Domiciniano
Daniele Letícia
Março/2018
INTRODUÇÃO
O método Kjeldahl é o principal método para se fazer a determinação de proteínas onde irá determinar o nitrogênio orgânico total da amostra, pode ser feito com todos os tipos de alimentos. Sempre que for feita a determinação de proteína, uma amostra branca deve ser feita junto, nele conterá praticamente todos os elementos que contem na outra menos a amostra ‘’original’’, ela é feita para que possa se ter um controle.
Existem três etapas no processo de determinação de proteínas, começando com a digestão onde será feito procedimentos até se obter um liquido claro (levemente esverdeado), pois significa que toda a matéria orgânica foi destruída e nele devera ter a ausência de pontos pretos.
Continua-se com a destilação, onde após a digestão o tubo junto com um Erlenmeyer serão levados para o destilador onde será obtido aproximadamente 50 ml de destilado Borato de amônio (em uma coloração azul), terminando assim pela titulação onde o destilado será titulado até a coloração azul mudar para uma coloração mais alaranjada.
O método de Kjeldhal é muito demorado e trabalhoso tendo que ser feito por um analista experiente, é um método um tanto barato mas deve-se ter um certo cuidado durante a análise devido a formação de gases, o aumento da temperatura das vidrarias e a utilização de ácidos por isso deve sempre se utilizar os EPIs durante o método.
OBJETIVOS
A aula prática sobre determinação de proteínas teve como principal objetivo demonstrar aos alunos o método de Kjeldahl, que é o método oficial de determinação de proteínas; assim como ensinar as suas etapas de “digestão, destilação e titulação”.
Também foi visado instruir aos discentes como manipular corretamente as vidrarias e equipamentos utilizados em cada fase do método de Kjeldahl, além de mostrar as substâncias e transformações químicas durante os processos.
A aula teve como meta a preparação de amostras; entre elas a amostra
branca, que é utilizada como grupo controle para o experimento; e a obtenção de resultados de cada experimento feito pelos grupos compostos por dez indivíduos cada.
Ao final da aula os alunos deveriam compreender cada passo do método
de Kjeldahl e saber identificar o estado das amostras submetidas a diferentes
fases da determinação de proteínas.
MATERIAIS E MÉTODOS
 
 3.1 Materiais
Reagentes:
Catalisador;
Ácido sulfúrico concentrado p.a.;
Hidróxido de sódio 40% (m/v);
Ácido bórico 2% (m/v);
Ácido clorídrico 0,02 N (padronizado).
Vidrarias:
Pipeta graduada;
Pipeta volumétrica;
Bureta;
Tubo para digestão;
Erlenmeyer/Balão de fundo chato.
Equipamentos e Utensílios:
Processador de alimentos;
Balança analítica;
Bloco Digestor de Kjeldahl;
Destilador micro-kjeldahl;
Estante para tubos;
Suporte para bureta;
Espátula em aço inox;
Papel manteiga;
Haste com base e pinças duplas para a bureta;
Pipetador de borracha;
Pisseta plástica com água destilada à temperatura ambiente.
 
 3.2 Métodos 
Digestão (processo realizado previamente):
Pesar 1,5 g de catalisador misto e 0,2 g de amostra triturada, colocar em um tubo digestor e levar em capela de exaustão para acrescentar 3mL de ácido sulfúrico concentrado ;
Colocar em bloco digestor (capela de exaustão);
Digerir em temperatura moderada no início e, após escurecimento do material, elevar a temperatura até 380 - 400C ou até 470C (≈ 50 ºC a cada 15 minutos);
Após o material ficar claro (esverdeado - ausência de pontos pretos), manter o aquecimento por, aproximadamente, mais 30 minutos.;
Retirar do digestor e esperar resfriar até temperatura ambiente.
Destilação:
Adicionar vagarosamente 8 mL de água destilada pelas paredes do tubo, até dissolução do digerido, aquecendo se necessário;
Preparar um Erlenmeyer de 125 mL contendo 10 mL de ácido bórico 2% com indicador misto para recolher o destilado;
Encaixar na saída do destilador, o Erlenmeyer contendo a solução de ácido bórico 2 % (m/v) com indicador misto;
Conectar o tubo de digestão no aparelho de destilação e adicionar 15mL de hidróxido de sódio 40% (m/v);
Ligar o aquecimento e proceder a destilação por arraste de vapor até o recolhimento de, aproximadamente, 50 mL de destilado (60 mL no total).
Titulação:
Titular o destilado com uma solução de ácido clorídrico 0,02 mol/L até ponto final detectável pela mudança de coloração de azul para laranja;
Anotar os volumes gastos para as determinações na amostra e na prova em branco, respectivamente.
% NT = (A  B)xCixfcx1,4g
% NT: teor percentual (m/v) de nitrogênio total
A: volume gasto na titulação da amostra
B: volume gasto na titulação do branco
Ci: concentração da solução de ácido clorídrico
fc: fator de correção para a solução de ácido clorídrico
g: porção alíquota da amostra (~0,2 g)
DISCUSSÃO E RESULTADOS
A determinação da proteína em uma amostra é baseada na determinação de
nitrogênio. Geralmente é feita pelo processo de digestão Kjeldahl (autor do método: Johan Kjeldahl).
Este método determinada o teor de nitrogênio orgânico, ou seja, o nitrogênio proveniente de outras fontes além da proteína, tais como: ácidos nucléicos, alcalóides, lipídeos e carboidratos nitrogenados. Como estes outros componentes geralmente estão presentes em quantidades menores, o método Kjeldahl é um método químico útil na determinação de proteína.
O método é seguido de 3 etapas : Digestão da amostra, Destilação da amostra, Titulação da amostra.
1 mol HCl____ 36 g
X mol _____ 0.043 g
Que em 0,043 g de HCl, tem-se 0,0119 mols, que é igual a 0,0119 mols de N.
A massa atômica do nitrogênio é de aproximadamente 16.
Fazendo a conversão:
Massa de N= Volume de HCl . Massa de HCl . mol de N (CECCHI, 2003).
Massa de N = 0.043. 0.0119 . 14
Massa de N = 0.716
Proteína total = Nitrogênio total.
Fator Proteína total = 0.716. 6.25
Proteína total= 4.475 %
5. CONCLUSÃO 
O Método de Kjeldahl é um dos métodos mais conhecidos para determinação
de proteínas, e pode ser utilizado em qualquer alimento.
A conversão para verificar o teor de proteína é feito utilizando um fator de
conversão, e o que é analisado é o N (nitrogênio) orgânico total presente no
alimento. O método é dividido em etapas sendo elas: a Digestão, Destilação e
Titulação, o que ocorre é que, a matéria orgânica é deteriorada e o nitrogênio é
transformado em amônia.
Em todo caso, o método de Kjeldahl foi feito, conseguindo proporcionar o
resultado final com clareza, todos os passos foram seguidos à risca, executados com cuidado e com os Epi’s necessários, respeitando os procedimentos laboratoriais, os tempos determinados e respeitando também as
quantidades fundamentais da amostra.
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
BASÍLIO, M. C. Nutrição avançada e alimentação saudável. Sp. Editora Senac
São Paulo. 2014. 357 p.
VICENZI, Raul. Química Industrial de Alimentos – UNIJUI - Capítulo 8 – Proteínas, 2000.
https://www.scribd.com/.../arquivos-Prof- 394-APOSTILA- DE-ANALISE- DE-ALIMENTOS