ROTEIRO DE ESTUDO PARASITOLOGIA

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ROTEIRO DE ESTUDO PARASITOLOGIA
NP1
Estercolina: derivada de Bilirrubina = Dá cor às fezes.
Sangue oculto
Analisa sangramento no sistema digestivo;
Sangue oculto é preto;
Pesquisa-se hemoglobina.
Reação de benzidina (reage com hemoglobina)
Feito em placa de petri;
Processo: Espalhar pequena quantidade diluída em H2O destilada > adicionar gotas de H2O2 > Adicionar solução de Benzidina > Positivo: Coloração azul/esverdeada.
Reação de Meyer-Johanesen 
Feito em tubo de ensaio;
Transferir aproximadamente 5 ml em tubo > Adicionar reativo M.J > Gotas de H2O2 > Positivo: Coloração vermelha.
Imunocromatografia
Positivo: Reação rosa.
Gordura nas fezes
Indica gordura em excesso e má absorção de nutrientes;
Exame: Sudam II.
Coprologia
Visa o estudo das funções digestivas (fezes);
Exame químico: sangue oculto, provas;
Exames complementares: PPF, Coprocultura, Raio X, Bioquímica do sangue, Tubagem.
Exame coprológico
Etapas macroscópicas: 
Quantidade e consistência= sólida;
Odor= normal;
Forma= moldada;
Presença de sangue;
Presença de muco;
Residual alimentar;
Aspecto= fino;
PH= 6,8 - 7,2;
Viscosidade= pouco viscoso;
Peso= 150 - 200 gr.
Elementos anormais
Muco, sangue, parasitas, leucócitos (pus).
Resíduos alimentares
Processo: diluir 50% H2O em placa de petri e 1 gota de lugol;
Observar: fibras musculares, gorduras neutras, detritos vegetais.
Fibras musculares
Aparecem 3 formas geralmente coradas pela bile de amarelo/alaranjada
Fibras mal digeridas:
Cilindros alongados;
Arestas agudas;
Estrias.
Fibras pouco digeridas: 
Corpos retangulares;
Arestas arredondadas;
Diminuição de estria.
Fibras bem digeridas:
Forma oval;
Sem estria.
Amido (coloração rosada)
Melhor observado com lugol;
Amido intracelular: interior de células vegetais;
Amido amorfo: faixa isolada / mais ou menos regulares / as vezes com bactérias idófilas;
Amido cru: originais.
Flora idófila
Flora bacteriana especial
Encontrada no intestino;
Constituído de bactérias;
Cora de violeta > iodo > lugol;
Alta acentuação de flora é indicativa de fermentação intestinal.
Cristais
Várias formas e tamanhos;
Exames: Fita adesiva.
Trichomonas vaginalis
Protozoários: flagelos > corta paredes/uretra sangra;
Diagnóstico: urina; microscopia: movimento.
Controle de qualidade parasitologia
Utilizadas amostras conservadas ou não, lâminas positivas, figuras, casos clínicos, livros e literatura referenciada e estabelecemos vários tipos de ferramentas para nosso controle de qualidade interno, que deve ser finalizado antes da liberação de laudos, com tempo hábil para correções, se necessárias.
Pesquisa de hematozoários
Gota espessa;
NP2
Pesquisa de hematozoários
Gota espessa;
Leishmaniose
A Leishmaniose visceral ou Calazar é uma doença causada pelo protozoário da família Trypanosomatidae e pertencente ao gênero Leishmania. A transmissão da doença é através da picada de insetos hematófagos do gênero Lutzomya e Phlebotomus.
Ciclo 
No mosquito:
O mosquito, ao sugar sangue de animal ou homem infectado, ingere as formas amastigotas;
Formas amastigotas sofrem divisão binária simples;
Se transformam em promastigotas que também se multiplicam;
Transformação em formas promastigotas;
Estas se transformam novamente em promastigotas infectantes.
No homem:
Mosquito pica o homem inoculando as formas promastigotas;
Estas formas são fagocitadas pelos macrófagos;
Dentro dos macrófagos se transformam em amastigotas;
Macrófagos rompem liberando as formas amastigotas que invadem novos macrófagos.
Diagnóstico
Reação de fixação de complemento (Elisa)
Imunofluorescência indireta
Teste de Montenegro
Chagas
Ciclo 
Um barbeiro infectado transmite em suas fezes a forma tripomastigota (infectante flagelada) que entra no hospedeiro pelo local da picada do inseto hematófago – nesse local forma-se o Chagoma de inoculação caracterizado por vermelhidão e prurido. Na corrente sanguínea do hospedeiro, o parasita invade células musculares ou é fagocitado, no ambiente intracelular assume a forma Amastigota (que evade dos fagolisossomos e consegue se multiplicar). Quando a célula rompe, são liberados Tripomastigotas (forma flagelada) que vai então infectar novas células ou ser sugada pelo inseto hematófago (triatomíneo), fechando o ciclo de transmissão.
Malária
Plasmodium falciparum mais comum.
Mosquito Anopheles.
Ciclo
Quando um Anopheles fêmea pica um ser humano e suga seu sangue, os plasmódios existentes em suas glândulas salivares, os chamados esporozoítos, caem na corrente sanguínea. Chegando no fígado, alojam-se nas unidades funcionais deste – as células chamadas Hepatócitos – e reproduzem-se assexuadamente por alguns dias, formando os Merozoítos. Nessa fase a doença é assintomática, mas quando os parasitas abandonam as células hepáticas caem na corrente sanguínea e infectam as Hemácias.
Nos glóbulos vermelhos, os merozoítos se reproduzem novamente assexuadamente – e por isso o Homem é seu hospedeiro Intermediário – rompem as hemácias e cem no sangue novamente infectando outras células, num ciclo regular. A ruptura das hemácias e a consequente liberação de toxinas no plasma produzem intenso mal estar e febre alta.
Assim, os Sintomas da Malária são febre e calafrios, na chamada “tremedeira”. Em casos graves ocorrem icterícia, insuficiência renal, alterações na coagulação e coma.
Toxoplasmose
Toxoplasma gondii
Ciclo
Oocistos ingeridos e liberam o parasita no intestino de felídeos - reprodução assexuada gerando taquizoítos - após 5 dias de infecção inicia-se reprodução sexuada formando oocistos - divisão meiótica formando esporocistos.
Método Kato-Katz
Definição: É um método semi quantitativo e qualitativo, utilizado principalmente na pesquisa de ovos de S. mansoni e outros helmintos. 
Técnica: 
Colocar a amostra fecal sobre o papel absorvente;
Comprimir a tela metálica ou de náilon sobre as fezes, fazendo com que parte passe através das malhas; 
Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela e transferi-las para um cartão retangular, enchendo seu orifício central;
Depois de encher orifício central, remover com cuidado o cartão, deixando as fezes;
Cobrir as fezes com a lamínula de celofane;
Inverter a preparação sobre o papel absorvente, realizando pressão com o polegar sobre a lâmina até obter uma uniformidade do material;
Deixar a preparação em repouso durante 30 minutos a 34-40º C ou á temperatura ambiente por 1 ou 2 horas;
Examinar a preparação no microscópio e contar todos os ovos encontrados e multiplicar o total por 24, resultando em ovos/gramas de fezes. 
Método de Faust
Definição: é muito usado para pesquisas de cistos e alguns oocistos de protozoários, permitindo, também, o encontro de ovos leves de helmintos em fezes formadas. 
Técnica:
Diluir aproximadamente 10 g de fezes formadas em 20 mL de água destilada;
Homogeneizar bem;
Filtrar a diluição através de gaze dobrada em quatro, num copo de plástico ou cálice;
Transferir a diluição filtrada para um tubo de centrifugação e centrifugar por 1 minuto a 2500 rpm; 
Desprezar o líquido sobrenadante e ressuspender o sedimento no vórtex;
Centrifugar por mais duas ou três vezes, adicionando água destilada após cada agitação no vórtex, até que o líquido sobrenadante fique claro;
Desprezar o sobrenadante, ressuspender o sedimento no vórtex e adicionar Sulfato de Zinco;
Centrifugar novamente por 1 minuto a 2500 rpm;
Os cistos e oocistos de protozoários e os ovos leves, presentes na amostra fecal, estarão na película superficial;
Recolher a película com a alça de platina dobrada, colocar numa lâmina e examinar no microscópio com as objetivas de 10% e 40%. 
Método teste rápido de malária
Definição: é o primeiro passo para a detecção rápida, qualitativa e diferencial dessa doença. Indicado para a detecção de malária em amostra de plasma, soro, e sangue total, indicando o diagnóstico diferencial entre Plasmodium falciparum e outros Plasmodium.Técnica: 
Retirar o dispositivo de teste do sache de alumínio;
Com uma pipeta capilar, pipetar amostra de plasma, soro ou sangue total no poço redondo;
Adicionar 4 gotas de solução tampão no poço quadrado;
Esperar no mínimo 15 minutos e ler os resultados. 
Observações e resultados:
Negativo: A presença de apenas uma linha colorida dentro da banda C( linha controle) indica resultado negativo. 
Positivo: A presença de duas bandas coloridas ou três faixas de cores na janela de resultados, não importa qual a banda aparece em primeiro lugar, indica que é positivo o teste de malária. 
Método Hematoxilina 
Definição: Utilizada para fixação e coloração de protozoários nas formas císticas e trofozoitas.
Técnica:
Fazer o esfregaço bem fino em lâmina misturando fezes com uma pequena gota de soro;
Fixador de Bouin - 1 a 2 minutos;
Lavar em álcool;
Lavar em água corrente - 2 minutos;
Mordente (alúmen férrico a 2%) - 5 minutos;
Hematoxilina - ± 5 minutos;
Controlar a coloração, observando o esfregaço até atingir a cor azul cinzenta;
Água corrente - 1 minuto;
Diferenciador (alúmen férrico a 2%) se necessário;
Água corrente;
Montar em Bálsamo do Canadá.
Método de Hoffman
Técnica:
Colocar aproximadamente 2 g de fezes num copo descartável;
Acrescentar aproximadamente 20 ml de água aos poucos;
Homogeneizar as fezes totalmente com o auxílio de um palito;
Transferir para um cálice afunilado coando em filtro para fezes;
Acrescentar água até encher o cálice;
Deixar em repouso até a sedimentação (2 a 24 horas);
Com o auxílio de uma pipeta Pasteur recolher o sedimento;
Gotejar sobre uma lâmina;
Adicionar uma gota de lugol;
Homogeneizar o preparado com uma lamínula e cobrir com a própria lamínula;
Examinar ao microscópio.
Teste intradérmico - Reação de Montenegro
Definição: O teste pode ser altamente específico e sensível para o diagnóstico da leishmaniose cutânea e mucosa.
Observações e resultados:
Positivo: Significa que os indivíduos já foram sensibilizados, mas não necessariamente que seja portador da doença. 
Método Gota espessa
Técnica:
Colocar em Lâmina de microscopia três a quatro gotas de sangue fresco, colhidas por punção venosa ou da polpa digital. 
Com a ponta de outra lâmina e com movimentos circulares, contínuos, reunir as gotas, criando uma área de aproximadamente 2 cm de diâmetro. Continuar com movimentos circulares, do centro para a periferia, durante 30 segundos para evitar a formação de fibrina, a qual poderá obscurecer as preparações coradas. 
Terminar os movimentos circulares no centro do círculo de sangue; por meio desse procedimento o esfregaço apresenta a borda fina e o centro espesso. 5. Deixar secar à temperatura ambiente e, após, mergulhar a preparação em água corrente ou em solução salina a 0,85%, para que se produza a hemólise. Secar à temperatura ambiente. 6. Examinar ao microscópio.
Exame direto a fresco de suspensão de fezes.
Técnica: 
Suspender por meio de um palito, 60 a 70 mg de fezes em gota salina previamente colocada sobre uma lâmina. 
Cobrir as fezes com lamínula e celofane (embebida em solução aquosa de verde de malaquita a 3%), após a remoção do excesso do corante; 
Comprimir a lamínula, com uma folha de borracha macia, e espalhar o material com uniformidade até as margens da cobertura de celofane; 4 Examinar ao microscópio.
 
Coprotest
Definição: É um processo simplificado e seguro de sedimentação por centrifugação.
Técnica:
O paciente adquire na farmácia o Coprotest que já vem com o conservador
(formol a 10%);
Coloca as fezes no coletor;
Fecha o frasco e agita por 2 minutos para homogeneizar e as envia para o laboratório;
A amostra de fezes homogeneizada é recolhida em um tubo de centrífuga;
Acrescenta-se 3 ml de acetato de etila ou éter, agita-se;
A mistura é centrifugada por 3 minutos. Desprezando-se os detritos e o líquido sobrenadante e acrescenta-se uma gota de Lugol ao sedimento.
Duas ou três gotas do sedimento são recolhidas numa lâmina, cobertas com lamínula e examinadas ao microscópio.
Reação Machado guerreiro
Definição: A reação de fixação do complemento permite verificar, se o paciente tem Anticorpos para algumas doenças, mais comumente utilizado para o diagnostico de Chagas. O principio deste método, é a ativação do complemento pelos Anticorpos gerados pelo paciente
Técnica:
Colher 5 ml de sangue do paciente, por punção venosa, sem anticoagulante;
Deixar coagular e preparar o soro;
Mistura-se o soro do paciente com o antigeno e complemento;
Em seguida adiciona-se hemácias de carneiro com anticorpos;
Caso o soro do paciente tenha ativado o complemento, as hemacias do carneiro nao sofrerão hemólise.
Valores normais: Fixação do complemento: negativa. 
Hemaglutinação
Definição: A hemaglutinação indireta baseia-se na propriedade que tem os anticorpos de produzir aglutinação específica na presença de glóbulo vermelhos sensibilizados com antígenos citoplasmáticos e de membrana do Tripanossoma cruzi
Técnica:
Em uma serie de tubos adiciona-se 1,2ml de solução salina no primeiro e 0,4 nos demais;
No primeiro tubo adiciona-se 0,06 ml do soro em exame; mistura-se bem e transfere-se 0,4 ml para o segundo tubo da reação e assim por diante, desprezando-se 0,4 ml ao chegar a ultima diluição;
Os tubos controle receberão 0,4 ml de cada diluição do soro a pesquisar;
Em cada um dos tubos de ração coloca-se uma gota de hemácias sensibilizadas;
Em cada um dos tubos controle coloca-se uma gota das hemácias tanizadas.
 
Obs: O exame deve ser feito sobre um pano ou papel úmido para inibir forças eletrostáticas.