Controle de qualidade microbiologico introducao

Prévia do material em texto

Conceitos básicos em microbiologia
	
Bactérias Gram-positivas
Bactérias Gram-negativas
Parede celular
3. Coloração de Gram
Introdução à Microbiologia
 MEIOS DE CULTURA
Quando se pretende cultivar microrganismos em condições artificiais em laboratório é necessário fornecer as fontes de nutrientes e condições favoráveis e indispensáveis ao seu crescimento (pH, oxigênio, temperatura, etc.).
Os meios de cultivo devem conter as substâncias exigidas pelas bactérias para o seu crescimento e multiplicação. 
Para que possam fazer a síntese de sua própria matéria nutritiva devem dispor de algumas fontes: de carbono (proteínas, açúcares), fontes de nitrogênio (peptonas) ou fontes de energia (luz). São também necessários alguns sais inorgânicos, vitaminas e outras substâncias favorecedoras do seu crescimento.
Introdução à Microbiologia
 Classificação dos meios de cultivo:
 Quanto à consistência:
Meios líquidos: são aqueles em que os nutrientes estão dissolvidos em uma solução aquosa. O crescimento bacteriano nesse meio muda seu aspecto, ou seja, o meio sofre uma turvação.
Meios semi-sólidos: são aqueles que possuem na sua composição, além dos nutrientes, uma pequena porcentagem de um polissacarídeo proveniente de algas marinhas, chamado ágar, um agente solidificador.
Introdução à Microbiologia
Meios sólidos: são aqueles que possuem uma porcentagem maior de ágar,  além dos nutrientes. Podem ser dispostos em tubos ou em Placas de Petri, dependendo da finalidade.
Através do meio sólido em placas de Petri é possível conseguir o isolamento de colônias bacterianas e, portanto, é o meio ideal para que seja feito o estudo da morfologia colonial. Já a cultura em ágar inclinado fornece somente o crescimento bacteriano com a obtenção de uma biomassa de microrganismos .
Introdução à Microbiologia
Quanto à função:
Meios quimicamente definidos: quantidades determinadas de reagentes químicos puros são misturadas para a preparação do meio de cultura. Outros componentes indispensáveis ao crescimento bacteriano são necessários em tão pequenas quantidades que as pequenas contaminações dos reagentes químicos usados na preparação do meio são suficientes.
Meios Mínimos: São meios quimicamente definidos que contém apenas os sais inorgânicos indispensáveis ao crescimento bacteriano. Exemplo: um meio salino mínimo 
Introdução à Microbiologia
Meios Enriquecidos: Quando são adicionadas algumas substâncias importantes para o crescimento como vitaminas, extrato de leveduras, componentes do sangue, soro, etc. São meios necessários para fazer crescer microrganismos mais exigentes. Ex: Ágar sangue.
Meios Seletivos: Permite a seleção de um determinado microrganismo em particular em detrimento de outros. Muitas vezes a seletividade do meio depende da adição de algum composto inibidor dos indesejáveis. Ex.: Corantes básicos inibem o crescimento de bactérias gram-positivas. 
Introdução à Microbiologia
Meios Diferenciais: Conferem certas características especiais às colônias, que em condições normais, seriam idênticas. Como o nome indica, este tipo de meio permite a separação de microrganismos de diferentes características, como a coloração das colônias ou da região envolvente do meio de cultura. Visa identificar o microrganismo. 
Ex.: M.O. que fermentam a lactose, semeados em meio contendo lactose e um indicador, darão colônias de cor diferente das não fermentadoras.
Introdução à Microbiologia
 Quanto à natureza:
Meios Animados: são constituídos de células vivas, como animais de laboratório, tecidos vivos ou ovo embrionado.
Meios Inanimados: não possuem células vivas. Podem ser naturais ou sintéticos. Naturais são aqueles que possuem substâncias provenientes da natureza, e o sintético contém substâncias obtidas em laboratório. 
Introdução à Microbiologia
A escolha da técnica para o cultivo de microrganismos varia de acordo com o tipo de meio de cultura e a finalidade do cultivo, porém algumas regras devem ser seguidas nas inoculações: 
A agulha e alça de níquel-cromo (também chamada de agulha e alça de platina) devem ser esterilizadas por flambagem antes e após qualquer cultivo. Tomar cuidado de esfriá-las antes da coleta.
Os recipientes devem sempre ser abertos próximos à chama do bico de Bunsen.
Introdução à Microbiologia
Deve-se evitar que as tampas dos tubos e placas fiquem sob a bancada durante o cultivo.
Para garantir uma semeadura correta, deve-se evitar ao máximo perfurar ou rasgar o ágar, pois poderá ocorrer acúmulo de bactérias neste setor do meio além de alterar as condições de crescimento bacteriano.
Os meios de cultivo são preparados e armazenados seguindo um rigoroso controle de qualidade, pois devem ser mantidas todas as suas propriedades nutricionais e garantida a esterilidade até o momento de sua utilização.
Introdução à Microbiologia
 TÉCNICAS DE SEMEADURA
As técnicas de semeadura permitem que o cultivo dos microrganismos em meios de cultura seja eficiente e que as seguintes finalidades sejam atingidas:
- crescimento bacteriano;
 -  isolamento bacteriano;
 -  estudo da morfologia colonial;
 -  pesquisa de patogenicidade;
 -  pesquisa das características bioquímicas.
 Introdução à Microbiologia
 A) Semeadura para a obtenção de colônias isoladas ou semeadura em estrias
Essa técnica é usada quando o inóculo contém diferentes M.O e deseja-se obter colônias bem separadas. Meio sólido (Placa de Petri – técnica do esgotamento)
1- Divida a Placa de Petri em três partes, fazendo linhas com a caneta retroprogetor na parte de baixo da placa.
2- Mergulhe a Alça de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe é apresentada.
3- Faça estrias em cada divisão, respeitando as linhas e utilizando da melhor forma possível toda a superfície da placa.
Introdução à Microbiologia
 B) Semeadura em profundidade e superfície
 Esse método é utilizado quando se deseja o crescimento de m.o. simultaneamente em condições de semi-anaerobiose e em aerobiose.
Meio sólido (ágar inclinado)
 1- Mergulhe a Alça de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe é apresentada.
2- Encoste levemente a alça na parte mais baixa do plano inclinado e suba fazendo estrias na superfície do ágar.
Introdução à Microbiologia
 C) Semeadura com espalhamento em superfície
 Consiste no espalhamento de um inóculo contido sobre a superfície de um meio de cultura sólido em placa.
Espalhamento sobre a superfície: alça de Drigalski
Introdução à Microbiologia
 D) Semeadura em profundidade
 1. Transferir uma alíquota da sua amostra para placa de Petri estéril
 2. O meio de cultura fundido e resfriado (20 mL a 45-48°C) é vertido sobre a placa esterilizada até cobrir todo o fundo.
 3. Homogeneizar em movimentos circulares em S ou 8
 4. Aguardar a solidificação
 5. A placa é incubada por tempo e temperatura adequados (2 a 5 dias a 30-35°C para bactérias e de 5 a 7 dias a 20-25°C para fungos)
Introdução à Microbiologia
 Transferência de Cultura Líquida para Líquida
Procedimento:
Flambar a agulha de platina
Retirar o algodão e mergulhe a alça de platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe é apresentada.
Mergulhe a alça carregada de bactérias no tubo com o meio de cultivo e agite a alça.
Flambar a boca do tubo antes e depois da transferência.
Introdução à Microbiologia
 OBSERVAÇÃO MACROSCÓPICA DAS COLONIAS BACTERIANAS
Já sabemos que, quando uma célula da bactéria se multiplica em um meio sólido, as gerações de células resultantes usualmente, permanecem juntas, formando uma massa celular que recebe o nome de colônia. 
A forma, estrutura e textura da colônia é um critério usado para distinguir uma bactéria de outra. Embora a morfologia da colônia seja uma característica suficientemente estável para ser usada na classificação bacteriana, muitas vezes podem aparecer variações espontâneas.
 
 
Introdução à Microbiologia
 CONSERVAÇÃO DOS M.O.
Técnicas:
 a)Conservação em geladeira
 b) Recobrir a cultura com óleo mineral estéril para o suprimento de oxigênio e conseqüentemente  o seu metabolismo
 c) Liofilização: 
 
Os M.O. são colocados em meio adequado em uma ampola
congelamento
sublimação da água
pode ser conservado à temperatura ambiente
d) Conservar em baixas temperaturas em nitrogênio líquido (-179°C)
Contaminação Microbiana
 
 INTRODUÇÃO
Bioburden : carga microbiana antes do processo esterilizante
 FONTES DE CONTAMINAÇÃO MICROBIANA
Matérias-primas, Água (P.aeruginosa, E.coli, Salmonella spp)
Ambientes produtivos (bactérias Gram (+), fungos)
Operadores (S. aureus, E. coli, Salmonella spp)
Materiais de acondicionamento
BOAS PRÁTICAS DE FABRICAÇÃO (BPF)
Princípios de zoneamento
Vestimenta
Limpeza e desinfecção
Treinamento
Procedimentos