AULA 5 CRESCIMENTO BACTERIANO

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AULA 5AULA 5
CRESCIMENTO BACTERIANOCRESCIMENTO BACTERIANOCRESCIMENTO BACTERIANOCRESCIMENTO BACTERIANO
PROFESSORA: MARIA CRISTINA PAMPLONA DA SILVAPROFESSORA: MARIA CRISTINA PAMPLONA DA SILVA
mariacristinapamplona@gmail.commariacristinapamplona@gmail.com
�Em microbiologia, o
crescimento microbiano é o
aumento do número de células.
�Na maioria dos procariotos
ocorre a fissão ou divisão
CRESCIMENTO MICROBIANOCRESCIMENTO MICROBIANO
ocorre a fissão ou divisão
binária.
Varia de minutos até Varia de minutos até dias.dias.
Depende muito das condições Depende muito das condições 
ambientais.ambientais.
Divisão BináriaDivisão Binária
�Fase elongação:
– Podem atingir o dobro do comprimento
�Formação do septo:
– Crescimento da membrana plasmática 
– Parede celular no interior da célula
MinD e MinE são
proteínas que inibem a
formação do anel Ftsz
nos polos da célula.
�Divisão:
– Formam partição que divide a célula 
em duas
Crescimento Exponencial Crescimento Exponencial 
�21, 22, 23, 24, 25, 26, 27........
�Ex.: 25 = 2 x 2 x 2 x 2 x 2 = 32
�Uma bactéria leva 30 minutos�Uma bactéria leva 30 minutos
para realizar fissão binária
(divisão binária, bipartição,
cissiparidade), após 4 horas em
cultura, qual o número total de
bactérias que será encontrado?
Fatores necessários para o 
crescimento microbiano
QUÍMICOS
Água
Macronutrientes
Micronutrientes
Fatores de crescimento
Físicos - químicos 
(ambientais)
Temperatura
pH
Pressão osmótica
Oxigênio
O ciclo de crescimentoO ciclo de crescimento
�A fase exponencial
reflete apenas uma 
parte do ciclo de 
crescimento de uma crescimento de uma 
população microbiana.
�O crescimento de 
micro-organismos 
apresenta um ciclo 
típico com todas as 
fases de crescimento.
1) Fase Lag: Período de adaptação da cultura
� Mudança de meio, preparação do complexo enzimático
� Reparação das células com danos.
2) Fase exponencial: Fase mais saudável das células onde
todas estão se dividindo.
� A maioria dos micro-organismos unicelulares apresentam
essa fase, mas as velocidades de crescimento são bastante
variáveis:
� Procarióticos – crescem mais rapidamente do que os
eucarióticos.
� Eucarióticos menores - crescem mais rapidamente do
que os maiores.
3) Fase estacionária:
Num sistema fechado (tubo, frasco ou biorreator) o
crescimento exponencial não pode ocorrer indefinidamente.
� Ocorre a limitação por depleção de nutrientes e acúmulo de
metabólitos.
Divisão = morte→ crescimento líquido nulo
Ainda pode ocorrer catabolismo e produção de
metabólitos secundários
4) Fase de morte (declínio):
� A manutenção de uma cultura no estado estacionário por
longo tempo conduz as células ao processo de morte.
Amorte celular é acompanhada da lise celular
�Podem ser realizadas pelos seguintes
métodos:
1) Peso seco total das próprias células (indireto)
filtração, secagem e pesagem
Métodos de avaliação do crescimentoMétodos de avaliação do crescimento
2) Peso de algum componente celular (indireto)
extração, secagem e pesagem
3) Variação no número de células (direto)
a) contagem de células totais
b) contagem de células viáveis
�Utilizam-se câmaras especiais de contagem (lâmina
com grade quadriculada). Ex.: Câmara de Neubauer
Contagem microscópica diretaContagem microscópica direta
�Vantagens: método rápido e fácil.
�Desvantagens:
� Não distingue as células vivas das mortas;
� Pode-se omitir células pequenas;
� Células móveis precisam ser imobilizadas;
� Precisa de 24 horas de incubação.
Nº de células= 
média do número contado nos quadrados 
X 
diluição das células 
X 
fator de conversão
O método de contagem em placas O método de contagem em placas 
É a técnica mais utilizada na determinação do tamanho de
uma população bacteriana.
O método de contagem em placa, considera a sua aplicação
três princípios:
» Cada colônia é originada do crescimento e da multiplicação de
uma bactéria.
» O inóculo original é sempre homogêneo.
» E não existe agregação das células.
Existem duas metodologias para se realizar a contagem de 
bactérias em placas:
» Método de espalhamento em placas;
» Método Pour-Plate.
Contagem das colônias formadas em 
meio de cultura em placas.
Contagem de células viáveis diretaContagem de células viáveis direta
Contagem de células viáveis diretaContagem de células viáveis direta
Semeadura em profundidade – colônias na superfície e
subsuperfície. Pode usar maior quantidade de células.
São 
empregadas 
várias diluições 
decimais porque 
Diluição das suspensões celulares. Amostras Diluição das suspensões celulares. Amostras 
concentradas precisam ser diluídasconcentradas precisam ser diluídas
Contagem é feita 
“unidade 
formadora de 
colônia - UFC”
decimais porque 
é difícil prever o 
número de 
viáveis.
É contada a 
placa com 30 a 
300 colônias.
Método do Número Mais Provável (NMP)Método do Número Mais Provável (NMP)
É uma técnica estatística com base no seguinte princípio:
�Quanto maior o número de bactérias em uma amostra, maior será o número
de diluições necessárias para eliminar totalmente o crescimento em tubos
contendo meio de cultura.
�O método do NMP fornece somente uma estimativa de 95% de probabilidade
da população bacteriana conter um número de bactérias e que o NMP da tabelada população bacteriana conter um número de bactérias e que o NMP da tabela
é estatisticamente o número mais provável.
Uma vantagem do 
NMP é a possibilidade 
de inocular 
quantidades maiores 
da amostra, 
aumentando-se 
proporcionalmente o 
volume de meio de 
cultura.
Turbidimetria
As células dispersam a luz e quanto mais células mais
turvo é o meio.
Pode ser medida com um espectrofotômetro.
MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO 
método indiretométodo indireto
• O uso da turbidimetria exige a construção de uma curva padrão:
Turbidez X quantidade de células
CONTADOR DE COLÔNIASCONTADOR DE COLÔNIAS
O Contador de Colônias é um aparelho capaz de contar
colônias de bactérias ou fungos, tornando o processo de
contagem mais rápido em placas de Petri de até 120mm.
Contagem eletrônicaContagem eletrônica
Quantifica rapidamente o número
de células numa suspensão,
através da passagem do fluido por
um orifício minúsculo contendo um
fluxo de elétrons. Como as células
não são condutoras, elasnão são condutoras, elas
aumentam a resistência elétrica do
fluido condutor e a resistência é
registrada eletronicamente,
quantificando o número de células
que passam através do orifício.
Esse método tem o inconveniente
de detectar células mortas e
também quantifica materiais
inertes porventura presentes na
amostra.