determinacao da glicemia

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DETERMINAÇÃO DA GLICEMIA 
 
1. Objetivo: 
Determinar a concentração de glicose em amostra de plasma. 
 
A concentração de glicose em fluidos biológicos pode ser determinada através de métodos 
enzimáticos, por meio de reações catalisadas pela hexoquinase ou a glicose-oxidase. No 
procedimento que utiliza a glicose oxidase (GOD), a glicose é oxidada enzimaticamente, 
formando ácido glucônico e peróxido de hidrogênio. O peróxido em presença de peroxidase 
(POD) causa a ligação do fenol com a 4-aminoantipirina, formando um cromógeno vermelho, 
que é medido espectrofotometricamente. 
 
 GOD 
Glicose + O2 + H2O ácido glucônico + H2O2 
 
 POD 
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol antipirilquinonimina + 4H2O 
 
2. Material por bancada: 
Estante para tubos de ensaio 
4 tubos de ensaio 
Pipetas automáticas para 1,0 mL e 10 µL 
Ponteiras 
Reagente 1 (contém tampão fenol/fosfato pH 7,4, glicose oxidase, peroxidase e 4-aminoantipirina). 
Solução padrão de glicose na concentração de 100 mg dL
-1
 
Espectrofotometro 
 
3. Procedimento 
 
Identificar 3 tubos de ensaio como B (branco), P (padrão) e A (amostra) e pipetar: 
Tubos B P A 
Sol padrão de glicose -- 0,010 mL -- 
Amostra -- -- 0,010 mL 
Reagente 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 
Misturar vigorosamente, incubar em banho-maria a 37ºC durante 10 minutos. 
Determinar as absorbâncias em 505 nm, acertando o zero do aparelho com o branco. 
A cor é estável por 30 minutos. 
 
4. Cálculo 
 
 Glicose (mg dL
-1
) = Absorbância da amostra X concentração do padrão 
 Absorbância do padrão 
 
 
5. Valores de referência: 
 
Plasma jejum de 8 horas: 65 a 99 mg/dL 
Pós-prandial: > 140 mg/dL - hiperglicemia