Aula Det. ativ. Che sang. - Paula K

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE
Centro de Ciências da Saúde – Curso de Farmácia
Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas
Disciplina: Toxicologia (ACT 0049) - Profa. Paula da Silva Kujbida
AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE DE COLINESTERASES SANGUÍNEAS 
POR ESPECTROFOTOMETRIA
(Método de Ellman modificado por Harlin e Ross)
 Finalidade
 - Acompanhamento de trabalhadores expostos;
 - Apoio no diagnóstico nos casos de intoxicação aguda.
 Amostra
 - Sangue colhido com heparina.
 Método
 - Espectrofotométrico de Ellman (modificado).
Monitorização de trabalhadores expostos a praguicidas
 Acompanhamento médico
 - Exame pré-ocupacional;
 - Exame periódico;
 - Exame de retorno.
 Monitorização Biológica
 - Avaliação da atividade de colinesterases.
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Método de Ellman modificado por Harlin e Ross 
Fundamento do método:
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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE
Centro de Ciências da Saúde – Curso de Farmácia
Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas
Disciplina: Toxicologia (ACT 0049) - Profa. Paula da Silva Kujbida
Sangue Plasma
Tampão fosfato
pH= 7,4
9 mL
10 µL 40 µL
3 mL
Branco Teste
100 µL DTNB
ESPECTROFOTÔMETRO
Calibração
TesteBranco
50 µL 
acetiltiocolina
Leitura
1ª- 30 seg
2ª- 3 min e 30 seg
Fluxograma
Calcular atividade
By Farm. Bioq. Maria Aparecida do Nascimento (MSc)
Cálculos da Atividade enzimática
Ativ. ChE Sangue Total = (Absorb. 2ª leitura - Absorb. 1ª leitura) x 100
Correção de temperatura = Ativ. ChE Sangue Total x FC
FC: Fator de Correção de temperatura (28 °C)= 0,902
Ativ. ChE Plasma = (Absorb. 2ª leitura - Absorb. 1ª leitura) x 25
Correção de temperatura = Ativ. ChE Plasma x FC
FC: Fator de Correção de temperatura (28 °C)= 0,889
Atividade Eritrocitária
E=
Hto: hematócrito
ST: Ativ. Sangue Total
PL: Ativ. Plasmática
100
Hto
x ST – PL 1 –
100
Hto
Obs.: U "micromoles de substrato hidrolisado/min./mL de amostra
VALORES DE REFERÊNCIA
• Atividade do sangue total: 15,5 a 31,0 U
• Atividade plasmática: 1,3 a 7,8 U
• Atividade eritrocitária: 32 a 58 U
IBMP
• 30% de inibição da colinesterase eritrocitária
• 50% de inibição da colinesterase plasmática
• 25% de inibição da colinesterase total
 Indivíduo exposto (periódico/ NR7)
 - Percentual máximo (% de depressão da atividade inicial) tomando como referência o exame pré-
ocupacional.
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