Aula 04 Métodos de isolamento e cultivo de crescimento bacteriano

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Métodos de isolamento e 
cultivo de crescimento 
bacteriano
• Fissão binária (normalmente)
• Representação logarítmica das populações bacterianas
Material nutriente preparado para o crescimento de 
microrganismos em um laboratório
Inóculo: microrganismos introduzidos em um meio de 
cultura para o crescimento
Cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam 
dentro ou sobre um meio de cultura
Conter nutrientes adequados ao microrganismo específico
Quantidade de água suficiente
pH apropriado
Deve ser ESTÉRIL
Incubação em temperatura apropriada
• Necessidades nutricionais do microrganismo
• Depende da espécie que se pretende cultivar
• Conhecimento do habitat natural
• Sintéticos ou quimicamente definidos: meios de cultura cuja 
composição química é perfeitamente conhecida
• Complexos: meios de cultura cuja coposição exata é 
desconhecida. 
• Podem conter diversos ingredientes como componentes. Ex.: 
Peptonas, extrato de levedura
• Caldo nutriente: meios complexos na forma líquida
• Ágar nutriente: caldo nutriente + ágar
• Meios redutores: para o crescimento anaeróbico (que não crescem na 
presença de O2)
• Tioglicolato de sódio
• Tubos de ensaio firmemente tampados
• São aquecidos rapidamente para eliminar o O2 absorvido
• Líquidos
• Aumentar inóculos de bactérias e fungos
• Agitação ou não
• Analisar taxas de crescimento e propriedades 
fisiológicos
• Sólidos
• Adição de Ágar (1,5 a 1,8%)
• Menos de 1%: semisólido
• Isolar fungos e bactérias para identificação
• Preservação de culturas
• Polissacarídeo complexo derivado de 
uma alga marinha
• Solidificação de meios líquidos
• Utilizado para deixar alimentos como geleias e sorvetes 
mais espessos
• Poucos micro-organismos podem degradar o ágar, então 
ele permanece sólido
• Placas de Petri ou Tubos de ensaio inclinados
• Ágar sangue: observação dos 
três tipos de hemólise
• Ágar chocolate: observa-se 
hemólise alfa e crescimento de 
Streptococcus
• Ágar chocolate Thayer Martin:
crescimento de Neisserias
• Ágar Teague (EMB), Mac Conkey, 
Hectoen Enteric e SS: São seletivos 
(crescem Gram negativas) e indicadores 
(separam as bactérias em lactose 
positiva e lactose negativa)
• Ágar DNAse: classificação dos 
Staphylococcus
• BHI (Brain Heart Infusion): enriquecimento de cultura de 
bactérias piogênica sem secreções ou em frascos para 
hemocultura
• Tioglicolato: crescimento de bactérias anaeróbias
• Água peptonada alcalina: crescimento do bacilo da cólera
• Uréia: Produção de urease
• Seleção e crescimento
• Identificação de uma espécie em particular
• Seletivos: suprimem o crescimento de determinados micro-
organismos em benefício de outros
Salmonella
• Manitol Ágar sal: tem 7,5% de NaCl (favorece o S. Aureus)
• Diferenciais: distinção entre diferentes grupos de micro-
organismos
Ágar Mac Conkey
• Ágar sangue
• Hemólise Alfa: lise parcial das hemácias ao redor da colônia
• Hemólise Beta: lise total das hemácias ao redor da colônia no ágar sangue
• Hemólise Gama: ausência de lise
Ágar sangue
• Teague EMB (Eosin Methylene Blue)
• Enterobactérias
• Indicam características bioquímicas/ fisiológicas dos micro-
organismos
Mac ConkeyTeague
E. coli
• Enriquecimento
• Utilizado para enriquecer uma cultura, fornecendo nutrientes e condições 
ambientais favoráveis
• TSI (Triple Sugar Iron)
• Fermentadores e não-fermentadores de 
glicose, lactose e sacarose, produção de 
gás e de H2S
• Fermentadores: acidificação = amarelo
• Sais de ferro e tiossulfato: H2S + tiosulfato: 
precipitado negro
• Ágar Bile-Esculina
• Isolamento e identificação de Streptococcus
do grupo D, incluindo os Enterococcus
• Deposição dos sais de ferro: enegrecimento 
do meio, indicando a hidrólise da esculina
• Ágar Müeller-Hinton
• Meio transparente
• Susceptibilidade de organismos a 
antibióticos
• Amido no meio: proteção contra 
substâncias tóxicas e fonte de energia
• Isolamento: separação de espécies microbianas específicas a 
partir de populações mistas 
• Ex.: amostras ambientais, amostras clínicas
Visualização das células em meio sólido: crescimentos 
em massas celulares homogêneas e isoladas chamadas 
colônias
Colônia: cultura pura de um microrganismo
A cultura pura de um dado microrganismo é uma cultura 
de células genética e morfologicamente idênticas
• Técnica: Semeio por esgotamento
• Semeadura por esgotamento
• Semeio com alça de Drigalski
• Quantificação
• Semeio uniforme
• Uso de suspensão bacteriana
• Semeio cobrindo toda a superfície do meio
• Semeio com SWAB
• Técnica de antibiograma
• Umedecimento do “swab” na suspensão
• Retirada do excesso
• Semeio cobrindo toda a superfície do meio
• Semeio em tapete
• Utilizado nas provas bioquímicas 
• Meios sólidos em tubos inclinados
• Semeio com agulha de platina em profundidade