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Profª Ísis Lacrose Roteiro para aulas práticas da disciplina Histologia e Embriologia Aracaju – SE 2018 Apresentação Os laboratórios de morfologia destinam-se a complementação das aulas teóricas e para sua utilização é necessário conhecer as normas de segurança e regulamentos para uso dos equipamentos. O objetivo é fornecer as condições necessárias para os estudos práticos; criar competências, habilidades e responsabilidade na utilização dos equipamentos do laboratório, conteúdo necessários para formação do profissional. Regras para uso dos laboratórios 1. A entrada nos laboratórios só é permitida com o uso de jaleco branco, calça comprida e sapato fechado. 2. As bolsas e mochilas devem ficar guardadas na estante, nunca sobre as bancadas com o Microscópio Óptico (MO). No máximo caderno e lápis. 3. Não comer, beber, fumar ou aplicar cosméticos no laboratório. 4. Não se distraia durante o trabalho no laboratório com conversas, jogos ou ouvindo música alta, principalmente com fones de ouvido. 5. Acondicione em recipientes separados o lixo comum e os vidros quebrados e outros materiais perfuro-cortantes. 6. Lavar as mãos com água corrente e sabão, especialmente antes e após o trabalho laboratorial. 7. Jamais deixar as lâminas na bancada. Guardá-las após o uso. 8. É proibida a saída de qualquer tipo de material pertencente ao laboratório. 9. É proibida a entrada de alunos não matriculados na disciplina. 10. É proibida a utilização do laboratório fora do horário de aula, a não ser acompanhado de um professor responsável ou monitor. 11. Não é permitida a alteração da configuração dos microscópios, bem como remover esse equipamento do local de utilização. 12. Manusear de forma inadequada os equipamentos, sob risco de penalidades, desde que comprovada sua responsabilidade. Microscópio Óptico O estudo dos tecidos e de como se organizam é possível graças a preparação de cortes histológicos que podem ser estudados nos microscópios. No microscópio de luz ou óptico a imagem pode ser examinada graças a um feixe de luz que atravessa o corte. O Microscópio Óptico (MO) é constituído de uma parte mecânica e uma parte óptica. O componente óptico consiste em três sistemas de lentes: condensadora, objetiva e ocular. O condensador concentra a luz e projeta um feixe luminoso sobre a amostra de tecido. A objetiva projeta uma imagem aumentada do objeto em direção à ocular, que novamente amplia a imagem e a projeta na retina do observador ou em uma tela. Para as imagens projetadas na retina, a ampliação total dada pelo microscópio é igual ao aumento da objetiva multiplicado pelo aumento da ocular. O fator mais crítico para o microscópio fornecer uma imagem detalhada é seu poder de resolução, que é definido como a menor distância entre duas partículas ou duas linhas que permite que elas sejam vistas como dois objetos separados. Para o microscópio óptico o limite de resolução é de 0,2µm, isso permite visualização de boas imagens aumentadas até 1000x. Como exemplo, a membrana plasmática da célula não pode ser distinguida no MO, pois tem menos de 0,2µm. Desta forma, a ampliação só tem interesse prático se for acompanhada de aumento do poder de resolução. E estes dependem exclusivamente das objetivas, que ao fornecerem aumentos maiores também tem poder de resolução mais elevado. As lentes oculares são sistemas de lentes que permitem ampliar a imagem real fornecida pela objetiva formando uma imagem virtual situada a aproximadamente 25 cm dos olhos do observador. As lentes objetivas permitem ampliar a imagem do objeto 4x, 10x, 40x e 100x. As objetivas de 4x, 10x e 40x são chamadas de secas, pois entre a preparação e a objetiva só tem ar. De modo geral, as objetivas secas são parafocais, ou seja, se o objeto está focalizado com uma, estará muito perto de sê-lo com as outras. A objetiva de 100x é denominada de imersão, pois para utilizá-la é necessário colocar uma gota de óleo de imersão entre ela e o material. Essa objetiva tem o índice de refração semelhante ao vidro, o óleo evita o desvio do feixe luminoso para fora da objetiva. A parte mecânica do microscópio é constituída por: • Pé ou base – serve de apoio para os componentes do microscópio. • Parafuso macrométrico – a sua rotação é responsável por movimentos verticais da platina, rápidos e de grande amplitude. • Parafuso micrométrico – a sua rotação é responsável por movimentos verticais da platina, lentos e de pequena amplitude, permitem aperfeiçoar a focagem. • Braço ou haste – fixo a base serve de suporte para outros elementos. • Mesa ou platina – onde se fixa a preparação a observar; tem uma janela por onde passam os raios luminosos. • Charriot e pinça – as platinas fixas geralmente compensam a sua imobilidade por meio de peças deslizantes chamadas “charriot”, que coloca a lâmina no campo desejado. • Revólver das objetivas – peça giratória portadora de objetivas de diferentes ampliações. • Tubo ou canhão – suporta a ocular na extremidade superior. Microscópio óptico - Partes 1. Pé ou base 2. Fonte de luz 3. Parafusos macrométrico e micrométrico 4. Braço ou haste 5. Condensador 6. Mesa ou platina 7. Charriot 8. Lentes objetivas 9. Revólver das objetivas 10. Tubo ou canhão 11. Lente ocular O microscópio é um aparelho de precisão, feito de um material valioso. Havendo cuidado por parte de quem o usa, ele durará muito tempo, mas um pouco de negligência poderá danificá-lo permanentemente. Informações relativas à microscopia 1. Calcula-se o aumento da imagem obtida com o MO multiplicando-se o valor do aumento da ocular pelo valor do aumento da objetiva. Objetivas Oculares Aumento 4x 10x Menor aumento – 40x 10x 10x Médio aumento – 100x 40x 10x Maior aumento – 400x 100x 10x Lente de imersão – 1000x 2. Campo microscópio é a área que está se observando ao MO. Quanto maior o aumento da imagem, menor é a abrangência do campo. 3. Sempre se inicia a observação ao MO com o menor aumento, a fim de se obter uma visão panorâmica da região que se quer observar com maior aumento. 4. A maior parte dos nossos microscópios possuem lentes parafocais. Logo, uma vez obtido o foco com uma objetiva de menor aumento, basta girar o revólver, colocar a objetiva de médio aumento em posição e acertar o foco apenas com o parafuso micrométrico. 5. Age-se da mesma forma ao focalizar a objetiva de maior aumento, desde que a imagem esteja em foco com a objetiva de médio aumento. 6. A objetiva de 100X é chamada “de imersão”, pois é necessária a utilização de óleo de imersão para focalização. Operacionalização 1. Retirar a capa protetora do aparelho. 2. Verificar se a tensão da rede elétrica coincide com a do equipamento. 3. Conectar o aparelho à rede elétrica. 4. Ligar o aparelho. 5. Verificar se a objetiva de menor aumento está encaixada. Caso necessário, utilize o revólver para encaixá-la. 6. Verificar se a mesa está abaixada. Case necessário, utilize o macrométrico para abaixar. 7. Verificar se o condensador está na posição mais elevada. 8. Colocar a lâmina sobre a mesa com a lamínula voltada para cima. 9. Centralizar o material da lâmina no foco de luz, utilizando os parafusos da mesa e do charriot. 10. Ajustar a distância interocular deacordo com o observador. 11. Olhando por fora das oculares, levantar a mesa com o macrométrico. Já olhando nas oculares utilizar o micrométrico, ajustando até a melhor visualização da imagem. 12. Caso necessário observar numa objetiva com aumento maior, utilize o revólver para mudá-la. Não é preciso abaixar a mesa, porém ao mudar a objetiva é necessário utilizar o micrométrico para ajustar o foco. 13. Verificar se a intensidade da luz está adequada. 14. Realizar uma varredura na amostra mediante o deslocamento da lâmina com o comando do charriot. Cuidados com microscópio • Não deixar o microscópio com a objetiva de maior aumento encaixada e a mesa levantada. • Não movimentar o macrométrico com as objetivas de 10X, 40X e 100X. • Não é preciso abaixar a mesa para mudar a objetiva, basta fazer o ajuste do foco com o micrométrico. • Não deixar o microscópio ligado quando não estiver usando ou quando for se ausentar por muito tempo. • Não mudar as objetivas pegando nelas, sempre pelo revólver. • Nunca desloque o aparelho com a lâmpada acesa. • Nunca soprar as lentes para retirar a poeira, pois micropartículas de saliva podem se depositar nas lentes. • Não tocar nas lentes com as mãos. • A limpeza das lentes será feita por técnicos autorizados. • Ter cuidado especial com as objetivas de maior aumento, uma vez que a distância de trabalho é realmente pequena e se pode, acidentalmente, tocar a amostra com a objetiva durante o procedimento para focar a imagem, podendo danificar a amostra ou o equipamento. • Não manusear o aparelho com as mãos sujas ou molhadas. Ao final da aula o aluno deve deixar o MO da seguinte forma: 1. Encaixar a menor objetiva 2. Abaixar a mesa 3. Desligar o MO (na tomada também) 4. Cobrir o MO.
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