PROSPECÇÃO DE ENZIMAS (AMILASE, CELULASE E PROTEASE) DE MICROORGANISMOS (BACTÉRIAS) DE COMPOSTEIRA E SOLO

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UNIVERSIDADE TECNOLÓGICA FEDERAL DO PARANÁ
DEPARTAMENTO ACADÊMICO DE QUÍMICA E BIOLOGIA
CAMPUS CURITIBA
PROSPECÇÃO DE ENZIMAS (AMILASE, CELULASE E PROTEASE) DE MICROORGANISMOS (BACTÉRIAS) DE COMPOSTEIRA E SOLO
Relatório 01
Aluna: Priscilla Vicente Lopes
 
Disciplina: Microbiologia Ambiental (QB54E)
Prof: Gustavo Henrique Couto
CURITIBA
2015
Metodologia:
Foram preparados 03 meios de cultura (200mL) – 12 placas
Meio 1 (4 placas) LA (NaCl 10 gL-1, extrato de levedura 5 gL-1, peptona 10 gL-1, Agar bacteriológico 15 gL-1) + amido 1% (2 g) 
Meio 2 (4 placas) LA + CMC (carboximetilcelulose)
Meio 3 (4 placas) LA + leite em pó 10%
Duas amostras de solo foram coletadas: Uma amostra de composteira (Solo 1) e uma de solo de mata (Solo 2) - 10g de cada amostra são necessárias.
Cada amostra de solo (10g) foi diluída, separadamente, em 100 mL de água autoclavada.
Foi realizada diluição seriada e 0,1 mL de amostra diluída 1:100 e 1:1000 foram plaqueadas e incubadas (24 horas) conforme a ilustração a seguir
Preparou-se Lugol 1% para teste de oclusão do Iodo nas placas
Resultados:
Solo 1: Solo da compostagem após incubação (24 horas)
Solo 1: Solo da compostagem
Na imagem observa-se que algumas bactérias apresentaram atividade enzimática extracelular secretando amilase (Amilases são carboidrases e tem a função de hidrolisar as ligações glicosídicas dos monossacarídeos de carboidratos, sobre as ligações α-1,4 e α-1,6 que estão presentes no amido e no glicogênio) por isso observa-se o halo em volta das colônias.
A atividade enzimática extracelular foi avaliada mediante a relação entre o diâmetro médio do halo de degradação e o diâmetro médio da colônia e expressa como índice enzimático:
Celulases são enzimas que hidrolisam ligações glicosídicas β-1,4 entre unidades de glicose. As celulases podem romper as ligações glicosídicas da celulose, liberando oligossacarídeos e glucose, por isso observa-se o halo, mesmo que discreto, em volta das colônias.
A atividade enzimática extracelular foi avaliada mediante a relação entre o diâmetro médio do halo de degradação e o diâmetro médio da colônia e expressa como índice enzimático:
As placas que continham solo da composteira em LA + Leite apresentaram um crescimento exagerado, ocupando a totalidade o meio, não sendo possível realizar as análises e cálculos de índices enzimáticos.
Dados Solo 1: Solo de compostagem
	Meio
	Diluição
	Halo (mm)
	Colônia (mm)
	IE
	LA + amido
	1:1000
	0,6
0,9
	0,2
0,5
	3
1,8
	LA + CMC
	1: 100
	0,5
	0,2
	2,5
Solo 2: Solo de mata
As celulases podem romper as ligações glicosídicas da celulose, por isso observa-se o halo, mesmo que discreto, em volta das colônias.
A atividade enzimática extracelular foi avaliada mediante a relação entre o diâmetro médio do halo de degradação e o diâmetro médio da colônia e expressa como índice enzimático:
Na imagem acima, observa-se que algumas bactérias apresentaram atividade enzimática extracelular secretando amilase, a qual hidrolisa as ligações glicosídicas dos monossacarídeos de carboidratos, sobre as ligações α-1,4 e α-1,6 que estão presentes no amido e no glicogênio) por isso observa-se o halo em volta das colônias.
A atividade enzimática extracelular foi avaliada mediante a relação entre o diâmetro médio do halo de degradação e o diâmetro médio da colônia e expressa como índice enzimático:
As placas que continham solo da mata em LA + Leite apresentaram um crescimento exagerado, ocupando a totalidade o meio, não sendo possível realizar as análises e cálculos de índices enzimáticos.
Dados Solo 2: Solo da mata
	Meio
	Diluição
	Halo (mm)
	Colônia (mm)
	IE
	LA + Amido
	1:100
	Não medido
	Não medido
	-
	LA + Amido
	1:1000
	0,2
	0,5
	0,4
	LA + CMC
	1:100
	0,7
	0,2
	3,5
	LA + CMC
	1:1000
	1,6
	0,9
	1,78
Observa-se que o índice de atividade enzimática depende do grau de diluição, sendo que quanto maior a diluição menor o índice enzimático, como percebe-se nos dados indicados na tabela acima.
Referências: 
Isolamento de Microrganismos do Solo da Agroindústria Sucroalcooleira Produtores de Enzimas e Polímeros de Interesse Biotecnológico. Disponível em: http://www.abq.org.br/cbq/2012/trabalhos/11/1172-14203.html <Acesso em 25 de outubro de 2015>
Atividade enzimática extracelular de leveduras isoladas da fermentação do cacau. Disponível em: http://www2.uefs.br/ppgbiotec/portugues/arquivos/corpo%20discente/mestrado/2009/marcielle_dos_santos_silva-dissertacao.pdf. <Acesso em 24 de outubro de 2015>
Seleção de microrganismos do solo produtores de enzimas de interesse industrial. Disponível em: http://www.webartigos.com/artigos/selecao-de-microrganismos-do-solo-produtores-de-enzimas-de-interesse-industrial/17990/#ixzz3pcLPUMq6 <Acesso em 24 de outubro de 2015>
Pesquisa de polissacarídeos: Reação com o iodo. Disponível em: http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_ch/teste_amido.htm <Acesso em 25 de outubro de 2015>
Atividade enzimática de isolados de rizóbia nativos da Amazônia central crescendo em diferentes níveis de acidez. Disponível em: http://www.scielo.br/pdf/cta/v26n1/28871.pdf . <Acesso em 25 de outubro de 2015>