VIROLOGIA - CONCEITOS BÁSICOS

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Viviam Milanez Massolini
Conceitos Básicos 
em Virologia
Características Gerais
Estrutura Básica
Estrutura Básica
Estrutura Básica
Estrutura Básica
Ciclo Replicativo - Etapas
1-Adsorção
Tropismo Viral
Suscetibilidade do Hospedeiro
Fase alvo para antivirais
Estruturas alvo para anticorpos neutralizantes
Ciclo Replicativo - Etapas
2-Penetração e Descapsidação
Endocitose
Fusão de Membranas
Ciclo Replicativo - Etapas
3-Replicação e Liberação
Vírus de DNA
Ciclo Replicativo - Etapas
3-Replicação e 
Liberação
Vírus de RNA
Ciclo Replicativo
Lítico
Tipos de Ciclo Replicativo
Ciclo Replicativo
Lisogênico
Replicação
(de acordo com o 
genoma)
Isolamento e Identificação do Vírus
Modelo de 
Cultura de Células
Técnicas Sorológicas
Inovações Tecnológicas
Melhor sensibilidade
1981 – RECONHECIDA NOS EUA
1983 – HIV - LUC MONTAGNER
ROBERT GALO
1986 – IDENTIFICADO – HIV-2
Genes Estruturais
Genes Regulatórios
Detecção Sorológica – Anti - HIV
Tipos de testes:
• Primeira geração: Antígeno Lisado Viral- pouco
empregados- muitas reações cruzadas.
• Segunda Geração: são obtidos a partir de técnicas de
biologia molecular.
• Terceira Geração: Antígenos sintetizados
quimicamente; ou testes que detectem
simultaneamente o HIV-1 e HIV-2.
• Quarta geração: Detecção de anticorpos análogo ao
de terceira geração e antígeno p24 simultaneamente
no mesmo teste.
IMUNOFLUORESCÊNCIA  muito utilizada
 sensibilidade e especificidade altas
 padronizada
 subjetividade na leitura
•Leitura: Microscópio de Imunofluorescência
TESTES CONFIRMATÓRIOS
Ensaio de Imuno-eletrotransferência ou Western-blot (WB).
- Descrição.
- Interpretação=Inúmeros critérios
Portaria 59/MS:
Negativo: ausência de bandas
Positivo: pelo menos 2 bandas entre as
gp160/120, gp41 e p24.
Inconclusivo: qualquer outro padrão.
Western-blotting
Hepatotropismo
HBV HCV
 Família: Hepadnaviridae
 Gênero: Hepadnavirus
gene P
Pré S1 Pré S2 gene S
gene C Pré C
HBeAgHBcAg
AgHBs
DNA Polimerase
GENOMA DO HBV
O ciclo replicativo
Envelopes do 
HBsAg
RNA mccc-DNA
núcleo
DNA parcialmente 
duplicado
VHB
(-) DNA
VHB
DNA-pol
TR
RNA m pré-genômico 
encapsulado
DNA
HEPATÓCITO
citoplasma
Hepatite B: progressão da doença 
Infecção 
aguda
Infecção 
crônica Cirrose Morte
5%-10% 
Falência 
hepática
>30% 
• >90% - RNs e 
lactentes => 
doença crônica 
• <5% - adultos 
imunocompetente
s => doença 
crônica 
23% dos 
pacientes 
decompensam 
em 5 anos após 
desenvolverem 
cirrose
Cancer 
hepático
(HCC)
Transplante 
hepático
1.Fattovich G et al. Hepatology 1995 
2. Ikeda K et al. J Hepatol 1998.
Detecção Sorológica
Anti-HBs
Detecção Sorológica
Detecção Sorológica
Detecção Sorológica
AgHBs e AgHBe
Detecção Sorológica
Detecção Sorológica – AntiHBc IgM
Detecção Sorológica
Anti-HBc e Anti-HBe
Marcadores sorológicos e eventos clínicos
em um caso de HVB aguda ictérica
HBeAg
Fase aguda (ictérica)
pródromos
1 a 2 sem
icterícia
2 a 12 sem
HBsAg
Sintomas
Tempo
P.I.
4-26
sem
Fase pós-ictérica
2 a 18 sem
IgM anti-HBc
anti-Hbc
Marcadores sorológicos e eventos clínicos 
em um caso de HVB em evolução para cura
Tempo
Fase pós-ictérica
2 a 18 sem
IgM anti-HBc
anti-Hbc
Marcadores sorológicos e eventos clínicos 
em um caso de HVB curada
anti-HBe
anti-Hbc
Tempo
Fase de convalescença
anos
anti-HBs
Marcadores sorológicos em paciente 
vacinada contra a HVB
Tempo
anos
anti-HBs
Marcadores sorológicos e HVB crônica
HBeAg
Fase aguda (ictérica)
pródromos
1 a 2 sem
icterícia
2 a 12 sem
HBsAg
Sintomas
Tempo
P.I.
4-26
sem
Fase pós-ictérica
IgM anti-HBc
anti-Hbc
Anti-
HBe
HBV mutante
gene P
Pré S1 Pré S2 gene S
gene C Pré C
HBeAgHBcAg
AgHBs
DNA Polimerase
GENOMA DO HBV
Título
anti-HBc 
HBsAg
Tempo
Padrão Sorológico Típico da Infecção Oculta pelo VHB
Título
anti-HBc 
Tempo
DNA-VHB positivo no soro ou tecido 
hepático
Padrão Sorológico Típico da Infecção Oculta pelo VHB
Mutantes do HBV 
 Região S e PréS
Alteração dos epitopos (HBsAg) -  afinidade ao anti-HBs
 Região do pré-core
Não sintetiza HBe e não afeta a produção de HBcAg 
 Região promotora do core 
Diminui a produção de HBe em 70% (HBeAg negativo)
 Região da Polimerase
Resistência à Lamivudina ( 17% /ano)
 Família: Flaviviridae
 Gênero: Hepacivirus
Envelope
Nucleocapsídeo
RNA
Penin et al., 2004
5’ UTR 3’ UTR
C E1 E2 NS2 NS3
NS4A
NS4B NS5A NS5B
C E1 E2 NS2 NS3 A NS4 NS5A NS5BB
P7
Core
Envelope
Protease
Serine 
protease
Protease 
Cofactor
RNA polimerase
Serine Protease
Sinal hospedeiro peptidase
Helicase
Genoma do HCV
Proteína estrutural 
região codificadora
Proteína não estrutural 
região codificadora
Diversidade Genética Viral
Árvore filogenética baseada na seqüência genoma completo do HCV
(Adaptado de Simmonds et al., 2005)
GENÓTIPOS
Distribuição dos genótipos de HCV no mundo 
63
1
21
46
8
25
91
8
76
744
49
316
5
165
7
75
Distribuição dos genótipos do vírus da hepatite C no Brasil (Adaptado de Campiotto et al., 2005)
Distribuição dos genótipos de HCV no Brasil 
GENÓTIPOS
Epidemiologia
Fatores de risco
para Hepatite C Drogas 
injetáveis
Múltiplos
parceiros sexuais
Tratamento c/ fatores
de coagulação
antes 1987
Hemodiálise
longo prazo
Transfusão sangue
ou tx órgãos
antes de 1992
nascimento
de mães
infectadas
Injeções de 
massa
e práticas
tradicionais
Aspectos Clínicos e Tratamento 
Coelho et al., 2001; Tong et al., 1995; Seef, 1997; Corrao et al., 1998; Fattovich et al., 1997; Poynard et al., 1998
1-4%
Infecção HCV
Hepatite Crônica
Cirrose
Hepatocarcinoma
70-80%
20%
RNA-HCV 
Indetectável 
(“clareamento”)
20-30%
Diagnóstico de infecção por HCV 
Anti-HCV
ELISA
– 1ª Geração – NS4
– 2ª Geração – Core+NS3+NS4
– 3ª Geração – Core+NS3+NS4+NS5
– 4ª Geração – Variantes virais da NS3 (+3ªG)
Detecção Sorológica – Anti - HCV
Kits ELISA anti-HCV
INNOTEST Murex anti-HCV Ortho HCV 3.0 Monolisa
HCV IV Ab 4.0 Enhanced SAVe anti-HCV plus
EIA EIA EIA EIA
4ª 4ª 3ª 3ª
Core NS3 Core
NS4 NS5 NS3+NS4
Core Core
NS4+NS5A NS4+NS5
Comparação entre vários Kits anti-HCV de 3ª e 4ª geração
Nome
do Teste
INNOGENETICS MUREX ORTHO SANOFI
Princípio
Geração
Ag
recombinantes
Ag
pept. Sintéticos
Ag específico
para subtipos
NS3 NS3
Não Não
1a, 1b, 2, 3a 1a, 1b 1a 1a
Immunoblot anti-HCV
Imunoblot – RIBA HCV 3.0
Positivo
Positivo
Indeterminado
Indeterminado
Negativo
Negativo
Interpretação Controle IgG
Nível II
Controle IgG
Nível I
c100(p)
5-1-1(p)
c33c c22 (p) NS5 hSOD
ELISA - 3.0
ANTI-VHC
NÃO-REAGENTE REPETIDAMENTE
REAGENTE
IMUNOBLOT
LIA ou RIBA
SOROTECA
NEGATIVO
PCR
CONFIRMAÇÃO
PCR
GENOTIPAGEM
INDETERMINADO POSITIVO
ALGORITMO PARA HCV 
Positivo
Negativo
PCR