Resumo de métodos de calibração

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Curva de Calibração 
O instrumento converte as propriedades físicas ou químicas do analito em um tipo de informação que pode ser interpretada e manipulada. 
O método mais comum de calibração de um equipamento é submeter porções conhecidas, como por exemplo, padrões de concentração conhecida e monitorar a resposta emitida pelo aparelho. 
Processo: 
O instrumento sempre irá fazer uma curva de calibração com 5 pontos, para isso temos uma amostra com concentração desconhecida e para descobrirmos essa concentração iremos utilizar a curva de calibração:
- Vamos fazer soluções padrões de diferentes concentrações conhecidas e inserir o equipamento. 
- O equipamento irá fazer uma curva de absorbância x a concentração dos padrões 
- Posteriormente, colocamos a solução de concentração desconhecida no espectrofotômetro e vamos achar um valor de absorbância, esse valor de absorbância vamos interceptar na curva e encontrar a concentração da amostra que antes era desconhecida. 
- Se extrapolarmos a curva acima ou abaixo do valor limite, devemos refazer a curva com padrões de concentração maiores ou diluir mais os padrões. 
Branco: 
No branco, utilizamos todos os componentes da amostra menos o analito e o equipamento vai descontar automaticamente o valor do branco. 
Calibração com padrão externo: 
- São selecionados vários padrões com concentrações conhecidas e são introduzidos no instrumento e feita a leitura.
- Posteriormente é introduzida a amostra de forma separada que também é lida pelo equipamento
- É utilizada uma solução em branco, sem o analito, mas com todas as outras substâncias que a amostra tem para corrigir os valores de leitura do padrão. 
- Os padrões analíticos dentro do equipamento, vai fazer com que o instrumento emita um sinal. 
- Para quantificar o analito nesse método, dados conhecidos da concentração de um padrão de calibração são combinados com dados de uma amostra de concentração desconhecida para gerar uma resposta. Assim, fazendo uma comparação da resposta instrumental da amostra com a resposta dos padrões. 
- Posteriormente, é criado uma curva com o sinal gerado pelo equipamento e a concentração de cada um dos padrões
Erros na Calibração com Padrão Externo: 
Mesmo com correções usando o branco, o efeito de matriz pode causar falhas no método de padrão externo. 
O efeito de matriz é a mudança do sinal emitido pelo equipamento devido a substâncias que não estão presentes na amostra, nos padrões e no branco.
Minimização de Erros: 
Diluição: Devemos diluir mais a amostra, pois assim o interferente não produz um efeito tão significativo se ele estiver em baixas concentrações.
Calibração com padrão interno: 
Padrão interno: apresente propriedade físicas e químicas do analito, além de fornecer um sinal similar ao do analito pelo equipamento. Porém, esse sinal é suficientemente diferente para que o instrumento consiga distinguir. 
É adicionado um padrão interno em uma quantidade fixa na amostra, no branco e nos padrões de calibração da análise. 
Então, o instrumento emite uma resposta da razão entre o sinal do analito e da espécie de referência e não do próprio analito. 
Motivo da Utilização do Padrão Interno
Se utiliza padrão interno porque muitas vezes o instrumento pode variar o sinal na análise de uma amostra e outra, tendo variações no instrumento geralmente causado por interferentes ou erros no equipamento 
Assim, o padrão interno escolhido deve compensar diversos tipos de erros, o padrão que eu escolhi deve me dar um sinal que é característico e não seja muito próximo do sinal do analito 
Coeficiente de correlação: 
Quanto mais linear a curva e mais próximo de 1 o coeficiente de correlação, melhor é a correlação entre a concentração dos padrões utilizados e o sinal emitido pelo instrumento
Limite de Detecção 
É a menor concentração do analito que pode ser detectada pelo aparelho, mas não conseguimos quantificar 
Está relacionado com a sensibilidade, quanto mais sensível o método, menor será o Limite de Detecção. 
Limite de Quantificação 
Menor concentração do analito que pode ser quantificada na amostra, com exatidão e precisão aceitáveis. 
Lquantificação = LD x 3,3 
Se um aparelho tem um Limite de quantificação alto, quer dizer que ele tem um alto poder detectar o analito em uma amostra de concentração baixa
Spike 
Quando há um analito abaixo do limite de quantificação que precisamos quantificar. É feito uma solução padrão de concentração conhecida 
Exemplo: 
- Limite de Quantificação: 0,79 mg/L 
- Concentração da amostra que precisamos quantificar: 0,5 mg/L 
 Para não haver problemas de contaminação do padrão, é feito uma solução estoque diluída, ou seja, pegamos uma alíquota do padrão e diluímos. Posteriormente, com essa solução estoque é feito uma curva de calibração.