14 - PREPARAÇÃO DE LÂMINAS HISTOLÓGICAS

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Profa. Dra. MARIA ANTONIA NOVENTA 
UNIVERSIDADE DE FRANCA - UNIFRAN 
Histologia 
 
Histologia: estuda as células e o material extracelular 
que constituem os tecidos. 
 
TECIDOS – grupos de células de mesma morfologia 
e mesma função 
 
Visualização tecidos  
microscopia  
preparados histológicos 
permanentes  lâminas. 
Histologia 
 
Para ser observado ao 
microscópio óptico é 
necessário que o material 
seja translúcido - a 
imagem ampliada forma-
se depois de o feixe de luz 
atravessar o objeto e as 
lentes. 
 
Histologia 
 
 
Após passar por um ou mais 
processos de preparação, o material é 
colocado sobre uma lâmina de vidro, 
que serve de suporte, e recoberto por 
uma lamínula fina. 
 
Histologia 
 
 
 1 – ESFREGAÇO 
 
Usado para materiais biológicos cujas células são 
soltas, como no sangue 
 
 colocar sobre a lâmina uma gota do material, 
espalhando-o uniformemente, para que as células 
distribuam-se em uma fina camada 
 
Tipos de Preparações 
 1 – ESFREGAÇO 
 
Tipos de Preparações 
Colocar gota de sangue total na 
extremidade de uma lâmina de 
vidro (A). Posicionar a borda 
de uma segunda lâmina 
(mantida a um ângulo de 45 
graus) sobre a gota de sangue 
até que essa disperse (B). 
Posicionar a primeira lâmina 
em uma superfície plana e 
tracionar a segunda lâmina 
rápida e uniformemente para a 
outra extremidade da primeira 
(C). O esfregaço deve ter uma 
borda fina e irregular, como 
mostra a ilustração (D). 
Esfregaço de sangue. Hemácias Plaquetas 
Neutrófilo 
Neutrófilo 
Linfócito 
 1 - ESFREGAÇO 
 
* pode ser usada para materiais cujas células 
sejam pouco unidas entre si. Células da parte interna 
(mucosa) da boca, por exemplo, soltam-se facilmente 
quando raspadas de leve com um palito, podendo ser 
espalhadas sobre a lâmina e observadas sobre ao 
microscópio. 
 
 2 - ESMAGAMENTO 
Alguns materiais têm células relativamente bem 
unidas, mas que, por esmagamento, se separam entre 
a lâmina e a lamínula. Ex: Raízes 
Esmagamento de raiz 
de cebola para visualizar 
divisão celular - Mitose 
 2 - ESMAGAMENTO 
 3 - CORTES HISTOLÓGICOS 
 
Quando o material que se deseja estudar é formado 
por células firmemente unidas entre si, torna-se 
necessário o corte em fatias; finas, o suficiente para 
que a luz possa atravessá-las. 
 3 - CORTES HISTOLÓGICOS 
 
É possível, em alguns casos, cortar materiais 
firmes e rígidos, tais como folhas, caules e raízes de 
plantas, manualmente, com uma lâmina de barbear, e 
observá-los a fresco, isto é, vivos. 
 3 - CORTES HISTOLÓGICOS 
 
Na maioria dos casos, os tecidos analisados são 
demasiado moles e torna-se necessário uma 
preparação prévia dos tecidos antes deles serem 
analisados ao MO 
ETAPAS DO PROCESSO DE 
CORTES HISTOLÓGICOS 
• FIXAÇÃO 
• INCLUSÃO 
• CORTE 
• COLORAÇÃO 
 
ETAPAS DO PROCESSO DE CORTES HISTOLÓGICOS 
- Primeira providência - Preservar as 
células contra a deterioração. 
-O material biológico é mergulhado em líquidos 
fixadores (álcool, formol, ácido acético etc.), 
que matam rapidamente 
as células e conservam 
sua estrutura, como 
que "mumificando-as". 
Fixação 
ETAPAS QUE PRECEDEM A INCLUSÃO 
1 – Desidratação - retirada de água da peça, já que as 
substâncias inclusoras são insolúveis em água. Esta etapa é 
feita com a utilização 
de álcoois graduados. 
ETAPAS QUE PRECEDEM A INCLUSÃO 
2 – Diafanização - retirada do álcool da peça (as substâncias 
inclusoras dissolvem-se mal no álcool) e torná-la 
transparente. Utiliza substâncias solúveis em álcool e 
capazes de eliminá-lo, por exemplo o toluol, xilol, benzol, 
etc. 
 
3 – Impregnação – envolvimento pela parafina e conseqüente 
inclusão 
 
- Fatias finas do material biológico - 
tratamentos que o tornem rígido, para facilitar o 
corte. 
 - Impregnar o material com substâncias que 
endurecem logo depois de penetrar nas células. 
Inclusão 
- Por exemplo, mergulhar o material, que antes 
já passou por um processo de fixação, em 
parafina derretida pelo calor. 
- Depois do resfriamento, o material fica 
incluído dentro de um bloco de parafina e 
adquire rigidez suficiente para ser cortado. 
Inclusão 
Microtomia - Corte 
Um bloco de parafina com material biológico 
incluído pode ser cortado em fatias bem finas, da 
ordem de 5 a 7 micrômetros (0,005 a 0,007 min) 
de espessura - MICRÓTOMO 
 
MICRÓTOMO: Para ser submetido ao exame microscópio 
O tecido deve passar por um corte micrométrico 
Microtomia - Corte 
Diferentes planos de 
cortes histológicos 
Microtomia - Corte 
Diferentes planos de 
cortes histológicos 
Quando se observam ao microscópio 
preparações de material biológico fresco, pouco 
se distingue da estrutura interna das células. As 
diferentes estruturas celulares apresentam pouco 
contraste óptico, isto é, têm mais ou menos grau 
de transparência á luz, de modo que a aparência 
do conteúdo celular é homogênea. 
Coloração 
Coloração 
 Para superar esse problema desenvolvem-se 
técnicas de coloração, que consistem em mergulhar a 
célula em uma substância denominada corante, capaz 
de tingir diferenciadamente uma ou mais partes 
celulares. 
 
 
 
 
Etapas 
 
Finalidades 
 
Duração 
 1. Fixação em fixador simples ou 
mistura fixadora (líquido de Bouin, 
Helly, etc) 
 
Preservar a morfologia e a composição 
dos tecidos 
 
Cerca de 12 horas, dependendo do 
fixador e do tamanho da peça. 
 
2. Desidratação em álcool etílico de 
concentrações crescentes, começando 
em álcool 70% e terminando com 
álcool absoluto 
 
Remover a água dos tecidos 
 
6 a 24 horas. 
 
3. Clareamento ou diafanização em 
benzol ou xilol, solventes do álcool e 
parafina 
 
Embeber a peça em substância miscível 
com a parafina 
 
1 a 6 horas. 
 
4. Impregnação pela parafina fundida, 
geralmente realizada em estufa a 60ºC 
 
A parafina penetra nos vasos, nos 
espaços intercelulares e mesmo no 
interior das células, impregnando o 
tecido e tornando mais fácil obtenção 
dos cortes no micrótomo 
 
30 minutos a 6 horas 
 
5. Inclusão: a peça é colocada num 
molde retangular contendo parafina 
fundida 
 
Obtenção do bloco de parafina de 
forma regular, para ser cortado no 
micrótomo 
 
 
 
6.Corte ao micrótomo 
 
 
Obter cortes finos entre 0,02 a 0,1 um 
 
 
 
7. Coloração: uso de corantes 
específicos, geralmente basófilos 
 
A maioria dos tecidos é incolor o que 
torna difícil sua observação. A 
coloração é um modo de torna os 
componentes do tecidos visíveis. 
 
 
 
 
8. Montagem da lâmina 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 TABELA: Etapas pelas quais passam os fragmentos de orgãos removidos para estudo histológico 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RESUMO 
MICROSCOPIO ELETRÔNICO 
Usa feixe elétrons  aquecimento no vácuo de um filamento 
 
de tungstênio  emite elétrons 
 
 
 
ELÉTRONS  BOBINA 
 
  FEIXE  OBJETO 
 
  FILME FOTOGRÁFICO 
 
 
 
 Preparação de células para o M.E 
 
 fixação - glutaraldeído pH 7,2 ou tetróxido de 
ósmio (+ contraste) solução sais urânio ou chumbo 
 
 cortes 20 – 100 nm 
 
 inclusão resina epóxi (Epox, Araldite) 
 
 corte – micrótomo c/ navalhas de vidro ou 
diamante 
 
 
 
 Preparação de células para o M.E