2 - Microscopia

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RABELO, R. N. 
INSTRUMENTOS 
DE 
MICROSCOPIA 
Profª Juliana de Andrade Cintra 
RABELO, R. N. 
MÉTODOS DE ESTUDO EM 
MICROBIOLOGIA 
UNIDADES DE MEDIDAS 
 
 MO: 
 Sistema métrico. 
 MO e seus componentes estruturais: 
 Micrômetro (m). 
 Conhecido como mícron (). 
 Um  = 0,000001 (10-6). 
 Uma unidade após o ”” deve ser dividida por um 
milhão (106). 
 Um nanômetro (nm). 
 Anteriormente conhecido como milimicrôn (m) = 
0,000000001 (10-9). 
 Uma unidade após o “nm” deve ser dividida por um bilhão 
(109). 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
APARECIMENTO DO MICROSCÓPIO 
 
Estudo: 
Ciências da saúde. 
 
 
 
 Importância: 
Permite observações. 
 Fora do alcance da visibilidade direta do olho 
humano. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
APARECIMENTO DO MICROSCÓPIO 
 
 Estrutura pormenorizada dos seres vivos. 
 
 Infinidade de coisas minúsculas que são 
conhecidas. 
 Estariam no campo da ignorância humana. 
 Não existisse o microscópio. 
 
 Missão: 
 Longe de se julgar cumprida. 
 Muito ainda se deve esperar. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
Final do século XVI. 
 
Depois de quatro séculos. 
 
Aperfeiçoar e dar novas utilizações às lentes. 
 
Galileu: 
 Criou a lupa. 
 Primeiras observações de objetos e seres. 
 Cientistas da época: 
 Encontraram nos seres que já conheciam. 
 Novos pormenores e características. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
 No século XVI: 
 
 Antonie Van Leeuwenhoek e Zacharias Jansen. 
 
 Fabricantes de óculos. 
 
 Desenvolveram: 
 Primeiros microscópios simples e compostos. 
 
 Utilizavam: 
 Luz refletida pelo objeto fortemente iluminado. 
 
 Vários modelos foram construídos: 
 Valor histórico = Robert Hooke. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
1830: 
 Joseph Jackson Lister. 
 Microscópio foi melhor desenvolvido. 
 Tipo hoje usado nos laboratórios. 
 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
1838: 
Schleiden e Showann 
 Disponível microscópios de boa qualidade. 
 Descobriu que os tecidos animais e vegetais: 
 Agregados de células. 
Marco formal: 
 Início da Biologia Celular. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
MICROSCÓPIO ÓPTICO COMPOSTO 
 
Possui: 
Série de lentes. 
 
Utiliza: 
 Luz visível como fonte de iluminação. 
 
 Índice de Refração: 
 Medida de velocidade relativa com que a luz 
passa através de um material. 
 Alterada pela coloração/opacidade. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
MICROSCÓPIO ÓPTICO COMPOSTO 
 
Preservar: 
Direção dos raios de luz na maior ampliação: 
 Usa-se óleo de imersão. 
 Entre a lâmina e a lente objetiva de imersão. 
 
Campo Brilhante 
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O óleo de imersão = Índice de Refração 
que o vidro. 
Mesmo efeito do diâmetro da objetiva . 
Melhora a potência de resolução das lentes. 
Se não usado: 
 Imagem: 
 Borrada e com má resolução. 
 
 Iluminado com luz brilhante. 
 Produz iluminação de campo brilhante. 
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MICROSCÓPIO DE CAMPO ESCURO 
 
Usado para examinar MO vivos. 
 Invisíveis no microscópio óptico comum. 
 
 
 Não podem ser corados por métodos-
padrão. 
Distorcida pela coloração. 
 Características não podem ser identificadas. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
MICROSCÓPIO DE CAMPO ESCURO 
 
 Condensador Normal. 
 Usa condensador de campo escuro: 
 Disco opaco. 
 
 
 
 Usado para examinar MO não corados. 
 Suspensos em líquido. 
 
 
 Espiroquetas muito delgados. 
 Treponema pallidum. 
 Causador da sífilis. 
Campo Escuro 
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MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE 
 
Exame detalhado: 
Estruturas internas do MO vivos. 
MO não necessitam ser fixado ou corados. 
 
 
Contraste de Fase 
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MICROSCOPIA DE CONTRASTE COM 
INTERFERÊNCIA DIFERENCIAL (CID) 
 
 Semelhante à microscopia de contraste de fase. 
 Maior resolução. 
 
 
 
 
 
 Imagem apresenta cores semelhantes. 
 Quase tridimensionais. 
CID 
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MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA 
 
 Observar: 
 MO que fluorescem sob iluminação especial. 
 
 Se a amostra não fluoresce. 
 Corantes fluorescentes: 
 Fluorocromos. 
 MO parecem luminosos: 
 Brilhantes. 
 
 Imunofluorescência: 
 Útil para diagnosticar Raiva. 
Imunofluorescência 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
MICROSCOPIA CONFOCAL 
 
Amostras são coradas. 
 Iluminados com laser. 
 Usado em conjunto com computadores. 
 Para construir imagens tridimensionais. 
 
 
Confocal 
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MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
 Visualização: 
 Estruturas menores que 0,2m. 
 Vírus: 
 De Varredura : 1.000 a 10.000 vezes. 
 
 
 
 
 
 
 
 De Transmissão: 10.000 a 100.000 vezes. 
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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPIA 
MICROSCOPIA DE TUNELAMENTO 
 
 Imagem revela: 
 Protuberâncias e depressões dos átomos na 
superfície da mostra. 
 Resolução maior. 
 Microscópio eletrônico. 
 
 
MICROSCOPIA DE FORÇA ATÔMICA 
 
• Usado: 
• Observar a estrutura detalhada das moléculas 
biológicas.