Meios de cultura e Técnicas de Semeadura

Prévia do material em texto

Pedro Manoel Rocha Medrado
Química III
Meios de cultura e Técnicas de Semeadura
Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Goiás
Anápolis
2017
 INTRODUÇÃO
A presença de bactérias é uma constante nos mais variados ambientes terrestre. Pode-se verificar sua presença no solo, na água, no ar e colonizando o nosso corpo, exemplo disso é a imensa quantidade de microrganismos existentes em nossa própria pele. Dada sua presença nesses distintos ambientes é indispensável que se tenha métodos e técnicas que possibilitem seu estudo. Nesse sentido, tal estudo normalmente requer o seu isolamento e identificação. Para tanto, faz-se uso de diversos meios de cultua (CERQUEIRA, 2007).
Meios de cultura é o conjunto de substâncias necessárias ao crescimento e multiplicação dos microrganismos. Tal conjunto inclui fontes de carbono, nitrogênio, sais minerais e água que, por sua vez, favorecem o crescimento in vitro de bactérias. Desse modo, a maioria dos microrganismos desenvolvem-se em meios de cultura (SANT'ANNA; CERQUEIRA, 2007).
A inoculação de bactérias nos diferentes meios envolve várias técnicas de semeadura (CERQUEIRA, 2007). Inocular consiste em contaminar propositalmente um meio de cultura para que seja possível o desenvolvimento dos microrganismos e posteriormente sua identificação. Deve-se sempre atentar a certos cuidados na manipulação feita em laboratório a fim de que se evite a contaminação indesejada, tanto das culturas bacterianas quanto do instrumental necessário à manipulação (SANT'ANNA; CERQUEIRA, 2007).
Ao método pelo qual se transfere um determinado número de microrganismos de um meio de cultura para outro meio de cultura denomina-se técnicas de semeadura ou mais genericamente como repique. Alguns métodos assépticos são utilizadas visando a não contaminação dos meios de cultura e materiais. Os métodos incluem: desinfecção da área de trabalho e das mãos; manusear os materiais próximos a zona de segurança do bico de Bunsen, que corresponde a aproximadamente dez centímetros em volta deste; esterilização de alças e agulhas bacteriológicas, que devem ser deixadas em contato com a chama esterilizante até ponto de incandescência e sempre aquecer da base para a ponta; flambar (fazer assepsia) a boca dos tubos e frascos antes da retirada e depois da colocação das tampas, assim como antes da inoculação. Deve-se evitar ao máximo introduzir alças quentes dentro da amostra, uma vez que isso pode causar a contaminação do ambiente pela formação de aerossóis e a morte dos microrganismos devido ao intenso calor desprendido pela alça (TÉCNICAS... 2017 e SANT'ANNA; CERQUEIRA, 2007).
Dependendo das características físicas dos meio de origem e destino, além da finalidade da inoculação, podem-se utilizar uma gama de técnicas de inoculação. As quais estão apresentadas abaixo:
Semeadura em meios sólidos
Semeadura em meios semissólidos
Semeadura em meios líquidos
OBJETIVOS
Executar e determinar a finalidade das principais técnicas de semeadura de bactérias em diferentes meios (sólidos, semissólidos e líquidos), tanto em tubos quanto em placas;
Caracterizar os diferentes meios de cultura e a finalidade de cada um;
Identificar e executar as técnicas de assepsia em laboratório.
PARTE EXPERIMENTAL
MATERIAIS
Placa de Petri com ágar
Tubo com ágar inclinado
Placa de Petri estéril
Tubo com ágar semissólido
Tubo com ágar em camada alta
Cultura bacteriana em caldo
Cultura bacteriana em ágar
Amostra de água em tubo
Pipetas estéreis
Alça e agulha bacteriológicas
MÉTODOS
A partir da amostra de água
Com o auxílio de uma pipeta estéril, transferiu-se 1 mL da amostra de água para uma placa estéril e adicionou-se o meio fundido, fazendo-se assim a técnica do pourplate.
Ressalta-se que foram utilizadas em todas as inoculações e afins as técnicas de assepsia a fim de se evitar a contaminação dos meios de cultura e materiais.
A partir de cultura em placa
A partir de um crescimento previamente isolado e obtido em placa, pegou-se uma colônia deste com auxílio de uma alça bacteriológica e fez-se a transferência para o tubo com caldo, através do processo de difusão.
A partir de cultura em caldo
A partir de um crescimento previamente obtido em caldo, realizou-se os passos abaixo:
Para evitar-se repetições desnecessárias, todas as transferências abaixo foram realizadas com o auxílio de uma alça/agulha bacteriológica e também transferiu-se o inóculo para:
O tubo com caldo, por meio da técnica de difusão.
O tubo com ágar inclinado, através da técnica de estria.
A placa com ágar, por meio da técnica de esgotamento em estrias.
O tubo com ágar semissólido, através da técnica de picada central.
Após a realização de todas as inoculações incubou-se os meios a 37 ºC por aproximadamente 48 horas. Decorrido tal tempo, voltou-se ao laboratório observando-se e interpretando o crescimento das bactérias nos meios. Deu-se destaque ao meio empregado no isolamento de colônias, item (iii) acima.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
As bactérias que foram utilizadas nas inoculações desta prática foram a Staphylococcus aureus e a Escherichia coli.
O crescimento das colônias deu-se de forma unânime em todos os meios de cultura, ou seja, a semeadura foi um sucesso! Fato que pode ser constatado nas fotografias que seguem ao longo dos RESULTADOS E DISCUSSÃO.
Na Fotografia 1 pode-se ver o desenvolvimento das bactérias de Staphylocuccus aureus por meio da técnica de pourplate, a qual é utilizada para contagem bacteriana.
Fotografia 1: Colônia de Staphylococcus aureus
Fonte: fotografado por Beatriz Carvalho
Nas Fotografias 2 e 3 abaixo evidencia-se a técnica de semeadura por esgotamento em estrias em três estrias. Tal método de semeadura é utilizado para obtenção de colônias isoladas. Em 2, Staphylococcus aureus.
Fotografia 2: Colônia de Staphylococcus aureus
Fonte: fotografado por Beatriz Carvalho
Fotografia 3: Colônia de bactérias
Fonte: fotografado por Beatriz Carvalho
O tubo com ágar inclinado, que foi inoculado com Escherichia coli, através da técnica de estria sinuosa está retratado na Fotografia 4 abaixo. Esta técnica de semeadura em meio sólido permite a obtenção de uma intensa massa de microrganismos.
Figura 4: Colônia de Escherichia coli
Fonte: fotografado por Beatriz Carvalho
Na Fotografia 5 a seguir, Escherichia coli inoculada em tubo com ágar semissólido por meio da técnica picada central, a qual proporciona uma pequena massa de microrganismos.
Fotografia 5: Escherichia coli
Fonte: fotografado por Beatriz Carvalho
Como verifica-se, as bactérias desenvolveram plenamente nos meios empregados.
 CONCLUSÃO
A partir da experiência realizada pode-se compreender e determinar as principais técnicas de semeadura de bactérias nos diferentes meios, assim como também a identificação e execução dos procedimentos de assepsia em laboratório. Uma vez que os microrganismos desenvolveram-se perfeitamente nos meios de cultura, os objetivos da aula foram atingidos com muito êxito.
REFERÊNCIAS
CERQUEIRA, Aloysio de Mello Figueiredo. APOSTILA DE AULAS PRÁTICAS: DISCIPLINA - BACTERIOLOGIA. 2007. Disponível em: <http://www.uff.br/labac/Apostila_Pratica_Farm-Odonto>. Acesso em: 24 jul. 2017.
SANT’ANNA, Raquel de Souza; CERQUEIRA, Aloysio de Mello Figueiredo. Apostila de Aulas Práticas: Bacterologia - Nutrição. 2007. Disponível em: <http://www.uff.br/labac/Apostila_Pratica_Nutricao.pdf>. Acesso em: 24 jul. 2017.
TÉCNICAS DE SEMEADURA E MEIOS DE CULTURA: Técnicas assépticas e semeadura de bactérias em meios de cultura. Técnicas assépticas e semeadura de bactérias em meios de cultura. Elaborada por UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE - INSTITUTO BIOMÉDICO - MIP – BACTERIOLOGIA. Disponível em: <http://www.uff.br/bacteriologia/aulaspraticas/tecnicasdesemeadura.htm>. Acesso em: 24 jul. 2017.