Aula 05 de Genômica 2014.2 (Genômica e Oncologia)

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GENÔMICA E ONCOLOGIA
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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ÁRIDO 
CURSO: BIOTECNOLOGIA
DISCIPLINA: GENÔMICA E PROTEÔMICA
PROFESSOR: WESLLEY PAIVA
Introdução

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Células Humanas
Expostas a agentes 
mutagênicos
Erros na duplicação 
do DNA
Alterações sutis no DNA
Quanto maior o número de
divisões, mais chance de
ocorrerem defeitos no DNA.
Alterar função de determinados
genes, ocasionando altas taxas de
mutação.
Introdução
 Década de 80: Explosão do 
conhecimento genético do câncer;
- Foram identificados mais de 1 centena
de genes envolvidos no desenvolvimento de
tumores esporádicos e hereditários;
 Theodor Boveri (1914): Identificou o 
câncer como uma doença genética;
- O crescimento tumoral era uma
combinação cromossômica particular
incorreto e seria a causa do crescimento
anormal das células e seria transmitido para
as gerações seguintes.
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Alterações mais importantes do câncer
 Genes que controlam a proliferação celular
- Proto-oncogenes
- Genes Supressores
- Genes de Reparo
 Perfil Molecular Do Câncer
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Evasão da Apoptose
Autonomia da 
Sinalização Celular
Indiferença a Inibição do 
Crescimento
Capacidade de Invadir 
Tecidos
Angiogênese
Potencial de 
Crescimento Ilimitado
ONCOGENES
 Descoberta dos Proto-oncogenes (Década de 70)
 Estudo com vírus de sarcoma de Rous
- Retrovírus isolado a partir de um sarcoma de galinha e identificado por
Payton Rous. Esse estudo relacionou ainda mais o câncer e a genética.
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- Células em cultura poderiam ser transformadas;
- Transformação através de vírus e retrovírus;
- Um único gene seria responsável pela alteração (proto-oncogene);
ONCOGENES
 Final da década de 70
- DNA de células tumorais humanas foram transferidas para células não 
neoplásicas em cultura (Fibroblastos de camundongos -> NIH – 3T3).
- Verificar a ocorrência de transformação e recuperar as sequencias 
responsáveis.
- Estudos com modelos animais mostraram que o oncogene HRAS é ativo 
em animais com câncer, através da exposição a carcinógenos.
 Exemplo: Leucemia Mielóide Crônica
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Genes Supressores de Tumor
 Boveri -> Cromossomos Inibitórios;
- Esses cromossomos poderiam ser removidos dos tumores e provaram
que seriam parte do processo responsável por manter as células em
espera, até que algo possa ativa-las novamente;
 Ephrussi e colaboradores
- Características de formar tumor é reversível;
- Capacidade tumoral pode ser reprimida ao produzir células hibridas;
- Transferência de DNA (ainda que bem pequeno) pode suprimir o tumor;
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Genes Supressores de Tumor
 Cavenne et al 
- Utilizou RFLP para comparar genótipos constitutivos e de tumores de 
paciente com retinoblastoma;
 Gene RB
- Importante supressor
- Se tiver inativo -> Deixa de regular a proliferação = TUMOR
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Tumor maligno na retina
Detecta a deleção da banda
13q14 no gene que expressa
formação da retina.
 RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphisms) –
(Polimorfismos de Comprimento de Fragmentos de Restrição)
- Enzimas de restrição são responsáveis por clivar o DNA em fragmentos que 
diferem em seu comprimento.
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1- Após a clivagem, os produtos são colocados para 
correr em eletroforese em gel
2- Migração para membrana de nitrocelulose 
(imobilização dos fragmentos)
3- Adição de sonda previamente marcada
4- Locus de RFLP se definem como a combinação dos 
fragmentos clivados pela enzima e as sondas marcadas;
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RFLP
 Vantagens: 
- Cobre potencialmente todo o genoma(detecta variações em sequências de 
DNA de 4 a 8 pb);
- Expressão co-dominante;
- Alta taxa de reprodução e consistência;
 Desvantagens:
- Necessidade de marcação radioativa;
- Construção de biblioteca de cDNA;
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RFLP
 Aplicações:
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Marcadores Genéticos - RFLP
Identificação de genótipos, raças,
cultivos e fingerprints;
Distinção entre homozigotos e 
heterozigotos
Estudos Populacionais
 RFLP
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Marcadores Genéticos
 Os genes supressores podem ser inativados por:
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Genes Supressores de Tumor
Pequenas Inserções
Deleções de grandes regiões genômicas
Deleções Intragênicas
Silenciamento de região promotora por metilação
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Genes de Reparo de Danos do DNA
 Controle de taxa de mutações
 Se forem alterados = Aumento da tumorogênese
 Principal função: Eliminar os erros causados pela inserção ou deleção de 
sequencias que podem ocorrer durante a duplicação do DNA;
 Se não forem reparados, as deleções/inserções promovem o aumento no 
número de repetições em tandem (Microssatélites);
 Alteração nos Microssatélites = Genes de reparo defeituosos;
 Exemplo: Mutação em genes que reparam o DNA da linha germinativa dos 
pacientes com Câncer de Colón hereditário
- MLH1 (50% mutado)
- MSH2 (40% mutado)
Microssatélites
PATOLOGIA
GENÔMICA E ONCOLOGIA
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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ÁRIDO 
CURSO: BIOTECNOLOGIA
DISCIPLINA: GENÔMICA E PROTEÔMICA
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