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INT0165 - GENÔMICA, TRANSCRIPTÔMICA E PROTEÔMICA Ciências Biológicas (Bach.)- “2020.1” Lista de Exercícios I - GENÔMICA - 26/01-02/03/21 Aula 1: Revisão sobre as propriedades de proteínas e ácidos nucléicos. 1. Com relação à estrutura das proteínas, qual das afirmativas abaixo é verdadeira? a) A estrutura primária refere-se às ligações covalentes entre aminoácidos: é a sequência dos aminoácidos na cadeia polipeptídica, mais as eventuais pontes dissulfeto. b) Alfa-hélices e folhas-beta são exemplos de estruturas secundárias. c) As cadeias laterais (grupos R) dos aminoácidos podem ser hidrofílicas ou hidrofóbicas. d) As proteínas constituídas por duas ou mais cadeias polipeptídicas possuem estrutura quaternária. e) Todas as afirmativas acima estão corretas. 2. A estrutura terciária de uma proteína refere-se: a) à sequência de aminoácidos. b) à presença de alfa-hélices ou folhas-beta. c) ao enovelamento tridimensional particular da molécula. d) às interações da proteína com outras subunidades da mesma enzima. e) à interação de uma proteína com um ácido nucléico. 3. Com relação à carga elétrica de moléculas em solução aquosa, assinale as afirmativas abaixo com “V” ou “F” segundo sejam verdadeiras ou falsas: ( ) O equilíbrio de dissociação de um ácido fraco (representado por HA ⇄ A⁻ + H + ) pode ser deslocado para a direita (aumentando [A⁻] e diminuindo a [HA]) mediante o aumento do pH da solução (ou seja, a diminuição de [H + ]), pois isso fará com que mais moléculas do ácido HA sofram desprotonação, passando para a forma iônica A⁻. Em outras palavras, a adição de uma base forte à solução (p. ex. NaOH) aumenta a dissociação do ácido. ( ) Algumas das cadeias laterais das proteínas contém grupos químicos básicos ou ácidos (i.e. passíveis de protonação/desprotonação) e, por essa razão, a carga elétrica global de uma dada proteína em solução aquosa varia com o pH. ( ) A diminuição do pH da solução favorece a protonação dessas cadeias laterais que se comportam como ácidos ou bases, fazendo com que a carga da proteína torne-se mais positiva. Inversamente, a alcalinização da solução torna mais negativa a carga global da proteína, por induzir a desprotonação dessas cadeias. ( ) Existe um valor de pH no qual a carga elétrica global de uma dada proteína é zero. Esse valor de pH é referido como “ponto isoelétrico” daquela proteína. 4) Efeito do pH sobre a conformação de uma estrutura secundária α-helicoidal. O “desenrolamento” (ou desnaturação) de α-hélices existentes num polipeptídeo (transformando-o numa estrutura de conformação aleatória) pode ser acompanhada experimentalmente pela medida da uma propriedade chamada rotação específica, que é a capacidade de uma solução em girar o plano da luz polarizada. O poliglutamato, polipeptídeo constituído exclusivamente por resíduos de L-Glu, tem conformação α-helicoidal, em pH 3. Quando o pH da solução é elevado para 7, observa-se uma grande diminuição da rotação específica, como mostra a figura abaixo. Da mesma forma, a polilisina polipeptídeo (contendo apenas resíduos de L-Lis) também está na conformação de α-hélice em pH 10, mas quando o pH é reduzido para 7 a rotação específica da solução diminui. a) Qual é a explicação para o efeito das alterações de pH nas conformações do poli-(Glu) e poli-(Lys)? b) Por que a transição ocorre numa faixa tão estreita de pH? 5. a) Como se explica o fato de que o RNA é muito menos estável quimicamente do que o DNA? b) Comparando duas sequências de DNA dupla-fita contendo diferentes %CG, qual delas terá maior temperatura de desnaturação? Por quê? 6. Com relação aos ácidos nucléicos, assinale as afirmativas abaixo com “V” ou “F” segundo sejam verdadeiras ou falsas: ( ) As moléculas de DNA contêm cadeias nas quais se alternam uma pentose (a desoxirribose) e uma base nitrogenada ligadas covalentemente. ( ) A separação das duas fitas do DNA (desnaturação) pode ser conseguida pelo aumento da temperatura, o que provoca o rompimento das ligações covalentes entre as bases nitrogenadas que na dupla-fita estão pareadas. ( ) Comparado ao par AT, o par CG é mais forte por possuir três pontes de hidrogênio entre as bases e não apenas duas. ( ) Na replicação do DNA, a elongação de cada fita é feita por adição de novos nucleotídeos à extremidade 3’ da cadeia em construção. Aula 2: Bases da regulação da expressão gênica - Integração da informação genética ao metabolismo (ômicas) 1. Explique, no contexto da expressão gênica, a comparação “fotografia vs. filme”. 2. Quais são as quatro principais ômicas e quais os processos de regulação da expressão gênica determinantes em cada uma delas? 3. Explique o paralelismo entre o crescimento exponencial da produção de dados ômicos e a evolução da capacidade de armazenamento e processamento computacional. Como isso se relaciona com a Bioinformática. 4. Cite e descreva as etapas de regulação da expressão gênica em eucariotos. 5. Explique a interação entre fatores de transcrição e elementos cis . Aula 3: Estrutura dos genomas e genômica comparativa. Metagenômica. 1. “Quanto maior o genoma, maior o número de genes diferentes e maior a complexidade biológica de uma espécie.” Essa afirmação é falsa para qual grupo de organismos? Explique. 2. Complete a tabela, considerando a estrutura dos genomas: 3. Defina genômica comparativa e sintenia. 4. A metagenômica é mais informativa que a metaproteômica? Por que? 5. Qual grupo eucarioto apresenta genomas com as maiores regiões repetitivas e duplicadas? Aula 4: Sequenciamento de genomas, bancos de dados. Polimorfismos do DNA e métodos de detecção. 1. Explique o método de sequenciamento de DNA com base em didesoxirribonucleotídeos. 2. Como foi possível automatizar o sequenciamento de DNA via método de Sanger? 3. Cite 3 metodologias de sequenciamento de nova geração. 4. Cite, informe o link e descreva uma função 3 bases de dados públicas para depósito eanaĺise de biomoléculas geneticamente/metabolicamente informativas, completando a tabela abaixo. Dica: www.ncbi.nlm.nih.gov ; KEGG ; Característica Opções Procariotos Eucariotos Forma estrutural linear - circular - espiral Cromossomos único - vários DNA extra-cromossômico frequente - muito raro Introns raríssimos - comuns Densidade gênica alta - baixa http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 5. Explique como o sequenciamento de DNA pode auxiliar na detecção de polimorfismos. Biomolécula Base de Dados Função DNA RNA Proteínas Metabólitos
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