Processamentos de tecidos histologicos

Prévia do material em texto

PROCESSAMENTO 
DE 
TECIDOS HISTOLÓGICOS
PREPARO DAS PEÇAS
O tecido a fresco contêm cerca 
de 85% de líquido, que ficam retidos 
em seu interior mesmo após a 
fixação.
Para que se torne possível o 
corte dos tecidos, é necessário que 
eles passem por três etapas de 
processamento:
• Desidratação;
• Diafanização ou Clareamento;
• Impregnação ou infiltração.
Este processamento pode ocorre por diferentes formas:
▪ Processamento manual – O técnico manualmente corre o material por 
cubas contendo os reagentes, obedecendo o tempo de permanência em cada 
cuba;
▪ Processamento automático – O técnico coloca o material em 
aparelhos programáveis para realizarem o processamento;
▪ Processamento automático aquecido – Igual ao anterior, porém todas as 
cubas possuem aquecimento, tornando o processamento mais rápido e mais 
eficaz. 
Processamento automático
 DESIDRATAÇÃO
A desidratação é o primeiro passo do processamento do 
tecido. Esse processo consiste em retirar a água que há no 
tecido. É feita pelo álcool etílico, pois é o reagente mais 
vantajoso para este fim.
Durante a desidratação é possível verificar que a peça 
além de readquirir a sua cor natural, ela diminui de tamanho, 
explicado pela saída da água, que ocupa um determinado 
espaço no tecido. O processo de diminuição do volume da 
peça é chamado de retração. 
A retração provocada pelo álcool varia de acordo com a 
técnica de desidratação empregada.
Para evitar uma grande retração tecidual, não se deve iniciar 
a desidratação em álcool absoluto e sim fazer uma desidratação 
progressiva, isto é iniciar por álcoois de baixa graduação, 70° ou 
80° e ir elevando a concentração até atingir o álcool absoluto.
É necessário a troca regular das cubas de processamento, 
pois sendo a água mais densa que o álcool, esta se deposita no 
fundo do recipiente, ocasionando uma má desidratação e 
interferindo em todo processamento. 
Os protocolos variam de acordo com o tipo de 
processamento.
Peças mais gordurosas como mama, são melhores 
processadas em aparelhos automáticos aquecidos. Já as biópsias 
gástricas são melhores processadas manualmente, pois são 
pequenas e o tempo de processamento deve ser controlado.
 Quando o processamento ocorre em aparelho, o protocolo 
varia de 5 à 6 cubas com álcool com o tempo de uma hora em 
cada cuba.
Cuidado com o álcool
DIAFANIZAÇÃO OU CLARIFICAÇÃO
É a operação pela qual o álcool da peça é substituído por um 
solvente da parafina.
Os solventes mais utilizados são: Xilol, Benzol e Toluol. Esses 
diafanizadores, que são insolúveis em água e bem solúveis em 
álcool etílico, têm a densidade maior que o álcool, deste modo o 
álcool se encontra na parte superior da cuba.
DIAFANIZAÇÃO OU CLARIFICAÇÃO
Em um processamento manual não se deve agitar o 
recipiente que contém o diafanizador, para que ele fique 
separado do álcool que vai sair da peça.
Quando a peça ainda não está completamente desidratada e 
é passada para o diafanizador forma-se uma nuvem branca.
As bibliografias sugerem 3 cubas de diafanizadores, com uma 
hora de permanência em cada uma.
IMPREGNAÇÃO OU INFILTRAÇÃO PELA PARAFINA
Como a parafina é sólida à temperatura ambiente, esta deve ser 
aquecida um pouco acima do seu ponto de fusão (58°- 60°). Esta 
temperatura deve ser monitorada para nunca ultrapassar os 60°, 
pois são as elevações das temperaturas que tornamos tecidos 
muito retraídos, extremamente duros e difíceis de serem 
cortados, e não uma maior permanência da peça em parafina. 
IMPREGNAÇÃO OU INFILTRAÇÃO PELA PARAFINA
O diafanizador que embebe a peça, dissolve a parafina; deste 
modo, é uma solução de parafina com o diafanizador que aos 
poucos vai penetrando na peça. A peça deve ser impregnada por 
uma parafina cada vez mais pura.
Como o diafanizador é um dissolvente da peça, para se 
conseguir uma boa consistência de bloco de parafina, ele precisa 
ser eliminado totalmente da peça.
USO DO FORNO DE MICROONDAS
O forno de microondas pode fazer o papel da estufa no 
laboratório, servir para encurtar o tempo de fixação, inclusão na 
parafina e mesmo na coloração especial.
O tempo – cada laboratório deverá encontrar o seu ótimo, 
testando. Em geral 1 minuto de microondas equivale a 1hora de 
do tempo de incubação da temperatura ambiente.
A temperatura – os tecidos podem queimar-se em 
temperaturas muito elevadas. Usar no máximo 80%.
USO DO FORNO DE MICROONDAS
Precauções: para evitar exposição excessivas de energia 
do forno deve-se ter os seguintes cuidados:
✓ Não tentar operar no forno com a porta aberta, porque poderá 
danificar a energia do microondas;
✓ Não colocar qualquer objeto entre a face frontal e a porta ou 
deixar sujeira ou resíduos de limpeza acumular-se nas 
superfícies de fechamento; 
✓ Não operar em microondas danificado.
OBSERVAÇÕES:
✓ Algumas bibliografias não indicam o processamento aquecido, 
por prejudicar o tecido e o aspecto dos preparados. Exemplo o 
álcool que é mais volátil que a água, o aquecimento determinará 
hidratação do próprio álcool prejudicando o processamento;
✓ Quando o material for mal processado é possível reprocessá-lo. 
Porém deve-se ter o cuidado de fazer o caminho inverso antes 
de iniciar um novo processamento;
✓ Lembrar sempre que para ter um bom processamento é 
necessário primeiro ter uma boa fixação;