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Disciplina: MICROBIOLOGIA IDisciplina: MICROBIOLOGIA I Aula: Crescimento BacterianoAula: Crescimento Bacteriano Profa Dra Cristina L S Petrarolha Silva FEA Fundação Educacional de Andradina FISMA-FCCA 11--Considerações GeraisConsiderações Gerais � Crescimento em bactérias: ◦ Individual ◦ populacional � Crescimento é um somatório dos processos metabólicos progressivos, que normalmente conduz à divisão com concomitante produção de duas células-filhas a partir de uma. http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/divisao/divisao.html#fissaohttp://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/divisao/divisao.html#fissao http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/divisao/Mitose.jpg www.youtube.com � Tamanho bacteriano adulto ◦ O que é? ◦ Quem o influencia?◦ Quem o influencia? � Idade bacteriana ◦ O que é? Termos para crescimento Termos para crescimento microbianomicrobiano � Taxa de crescimento (velocidade específica de crescimento): é a variação no número ou massa de microrganismos por unidade de tempo. � Tempo de geração: é o intervalo de tempo necessário para que uma célula se duplique.necessário para que uma célula se duplique. ◦ O tempo de geração é variável para os diferentes organismos, podendo ser de 10 a 20 minutos até dias, sendo que em muitos dos organismos conhecidos, este varia de 1 a 3 horas. ◦ O tempo de geração não corresponde a um parâmetro absoluto, uma vez que é dependente de fatores genéticos e nutricionais. IMPORTANTEIMPORTANTE � Toda bactéria tem seu ambiente ideal onde encontra condições ótimas de crescimento.crescimento. � Uma pop bacteriana é um SISTEMA DINÂMICO, com células se dividindo e células morrendo o tempo todo. Tubo à direita, meio BHI sem semeadura; tubo à esquerda, meio BHI após crescimento bacteriano. Observar turvação indicativa de multiplicação microbiana http://www.microbiologia.vet.br/ImagensBacteriologia.htm Meio com crescimento bacteriano apresentando sedimento (deposição de bactérias). 22-- Métodos de medidaMétodos de medida � Desenvolvimento da cultura bacteriana: ◦ Aumento da quantidade de protoplasma ◦ Aumento do número de microorganismos 2.12.1-- Métodos para estimar Métodos para estimar massa ou aumento de massa ou aumento de protoplasmaprotoplasma ◦ DIRETOS � Centrifugação � Peso Seco ◦ INDIRETOS◦ INDIRETOS � Nitrogênio � Colorimetria ou espectrofotometria � Consumo de Metabólito ou Acúmulo de produto do metabolismo � Turbidimetria � Turbidímetro � Leitura em 660nm � Curva padrão � Não destrutiva Não diferencia céls viáveis� Não diferencia céls viáveis das céls mortas ColorímetroColorímetro 2.22.2-- Métodos para estimar o Métodos para estimar o número de microorganismosnúmero de microorganismos � DIRETOS ◦ Contadores de partículas ◦ Câmaras de contagem ◦ Esfregaços corados◦ Esfregaços corados � INDIRETOS (células viáveis) ◦ Diluição Seriada ou do número mais provável (NMP) ◦ Plaqueamento em Meio Sólido (UFC) Contagem direta Contagem direta � Câmara de Neubauer Contagem indiretaContagem indireta http://mednt.jp/dilution%2Btechnique Contagem IndiretaContagem Indireta � Técnica da Diluição Seriada http://bervieira.sites.uol.com.br/dilui.htm Contagem em placas:Contagem em placas: Contagem em placas:Contagem em placas: Técnica Técnica PourPour PlatePlate http://www.practicalbiology.org/areas/advanced/health-and-disease/hygiene/making-a-pour- plate,98,EXP.html http://biology.clc.uc.edu/fan khauser/Labs/Microbiology /Meat_Milk/Pour_Plate.htm Técnica da membrana filtranteTécnica da membrana filtrante Técnica número mais provávelTécnica número mais provável � http://laboratoriodemicrobiologiadeali mentos.blogspot.com/ 33-- Curva de CrescimentoCurva de Crescimento � Utilizar apenas CULTURA PURA � Representação gráfica do aumento do número de indivíduos em um determinado período de tempo 33-- Curva de CrescimentoCurva de Crescimento � fases de desenvolvimento de uma cultura bacteriana � adaptação, desenvolvimento (crescimento), � extinção de nutrientes e morte � Fases: lag, exponencial, estacionária e morte Curva de Crescimento Sistema Curva de Crescimento Sistema FechadoFechado Fase Fase LagLag ou Latenteou Latente � Período de adaptação, intensa atividade metabólica � Ausência de divisão � Longa: inóculo pequeno, cultura velho, meio e T desfavoráveis � Pode inexistir Fase Fase logarítimicalogarítimica ou exponencialou exponencial � Divisão máxima � Progressão geométrica de razão 2� Progressão geométrica de razão 2 � Fatores determinantes do crescimento Fase estacionáriaFase estacionária � Escassez de nutrientes ou acúmulo de metabólitos � Bactérias crescem muito lentamente ou número de mortes é igual ao de novas Fase de declínio ou morteFase de declínio ou morte � Morte das bactérias � Lento ou exponencial Curva de Crescimento Sistema Curva de Crescimento Sistema FechadoFechado � Curva Diáuxia ◦ duas fontes de carbono ◦ após término da primeira, inicia-se uma nova curva Crescimento em culturas Crescimento em culturas contínuascontínuas � Estes são respectivamente controlados pela concentração do nutriente limitante (fonte de C ou N) e pela taxa de fluxo (taxa de diluição).pela taxa de fluxo (taxa de diluição). � Em baixas concentrações do nutriente limitante, a taxa de crescimento é proporcional à concentração do nutriente � Se houvesse: ◦ Suprimento ilimitado de nutrientes + ◦ Ambiente inalterável + ◦ Espaço ilimitado QuimiostatoQuimiostato http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento. htm Equações para determinação dosEquações para determinação dos parâmetros de crescimentoparâmetros de crescimento � O tempo de geração pode ser calculado quando uma cultura encontra-se em fase exponencial, pela fórmula abaixo: N=No.2nN=No.2n � onde � N= número final de células � No= número inicial de células � n= número de gerações n= log(N) - log(No)/0,301 G = t/n � onde G= tempo de geração t= tempo de crescimento n= determinado acima. 44-- Efeito dos fatores ambientais Efeito dos fatores ambientais no Crescimento Bacterianono Crescimento Bacteriano � 4.1-Temperatura � Tipos de Bactérias em Relação a Temperatura � 4.2- pH � 4.3- Tensão de Oxigênio � 4.4- Água � 4.5- Pressão Osmótica Fontes de ConsultaFontes de Consulta � TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM, F.; Microbiologia. 4. ed. rev. e atual. São Paulo: Atheneu, 2005. 718 p. � Imagens: � Imagens: ◦ www.google.com.br
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