5 Eletroforese com Safer Dye

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Eletroforese em Gel de Agarose corado com Safer Dye 
 
 
OBJETIVO DA AULA 
 
Preparar um gel de agarose e montar uma corrida eletroforética utilizando safer dye 
como corante. 
 
 
PROCEDIMENTO 
 
Preparo do gel de agarose 
- Selar a forma de eletroforese com fita adesiva. 
- Utilizando um Erlenmeyer pesar a agarose (concentração de 1,0%) seguindo o quadro abaixo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
- Homogeneizar a agarose em 72 mL de TBE 1X. 
- Vedar o Erlenmeyer com plástico filme e fazer furos. 
 - Aquecer o frasco com agarose em micro-ondas até completa dissolução da agarose; 
- Homogeneizar 
- Colocar os pentes na forma de eletroforese. 
- Esperar temperatura chegar a 50°C e verter o gel na forma (cuidar para não fazer bolhas). 
-Enquanto ocorre a solidificação do gel de agarose preparar as amostras para corrida. 
 
Preparo das amostras e Ladder 
- Todo o preparo desta etapa deve ser realizado em Banho-gelo. 
- Em um Eppendorf de 0,5 mL preparar, as amostras e Ladder pipetando cada item na ordem e 
aplicando a gota dos reagentes no fundo do tubo. 
Centro Universitário Cesumar – Unicesumar 
Departamento de Ciências Biológicas e da Saúde 
Disciplina de Biologia Molecular e Engenharia 
Genética 
 
 
Amostra Ladder 
- Safer Dye 1 µL - Safer Dye 1 µL 
- Loading buffer 2 µL - Loading buffer 2 µL 
- Amostra 5 µL - Ladder 1kb 2 µL 
 Total 8 µL Total 5 µL 
 
- Deixar as amostras em Banho-gelo até o momento de aplicação no gel de agarose. 
IMPORTANTE: caso a amostra fique distribuída no Eppendorf, colocar na centrífuga e aplicar um 
minispin para que toda reação se concentre no fundo do tubo. 
 
Preparo da corrida eletroforética e aplicação das amostras 
- Após o gel endurecer, retire a fita adesiva e ajuste a forma na cuba de eletroforese (o local onde 
esta os poços deve ficar voltado para o pólo negativo/cor preto). 
- Adicionar tampão TBE 1X até cobrir o gel aproximadamente 2-5 milímetros. 
- Retirar os pentes do gel de agarose. 
- Aplicar 10 µL de cada amostra nos respectivos poços e o marcador de peso molécula no primeiro 
poço. 
- Feche a tampa da cuba ligue os cabos dos eletrodos na fonte de maneira que o DNA migre para o 
ânodo. 
- Ajustar da fonte da eletroforese 100 V, 60 Am, 80W para uma corrida de 60 minutos. 
- Ligue a fonte. 
- Corra o gel até que o azul de bromofenol migre a uma distância apropriada 
- Desligue a fonte, remova os cabos e a tampa da cuba. 
 
Revelação e registro dos resultados 
- Transfira o gel de corrida para o Transiluminador de LED. 
- Feche a porta e ligue o equipamento. 
- Fotografar o gel com os resultados. 
- Despreze o gel em recipiente adequado para inativação. 
- O tampão TBE 1X deve ser colocado em frasco e marcador a data de uso. Este tampão pode ser 
reutilizado em outras corridas.