Rotinas Laboratoriais

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15/07/2022

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ESTÉTICA E BELEZA
CONTEÚDO
ROTINAS LABORATORIAIS

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Dados Internacionais de Catalogação na Publicação - Brasil
Triagem Organização LTDA ME
Bibliotecário responsável: Rodrigo Pereira CRB 1/2167
Portal Educação
P842r Rotinas laboratoriais / Portal Educação. - Campo Grande: Portal Educação,
2013.
148p. : il.

Inclui bibliografia
ISBN 978-85-8241-700-3
1. Química - laboratório. 2. Bioquímica – princípios. I. Portal Educação. II.
Título.
CDD 542.1

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO
2 REGRAS DE SEGURANÇA NO LABORATÓRIO
2.1 SEGURANÇA NO TRABALHO
2.1.1 Risco Físico
2.1.2 Risco Químico
2.1.3 Risco Biológico
2.1.4 Grupos de Riscos Biológicos
2.2 CÓDIGO DE PRÁTICAS
2.2.1 Normas de Acesso
2.2.2 Normas de Proteção Individual
2.2.3 Normas de Procedimento
2.2.4 Controle da Segurança Biológica

3 O LABORATÓRIO CLÍNICO
3.1 INSTALAÇÕES
3.2 EQUIPAMENTOS E MATERIAIS DE LABORATÓRIO

4 PRINCÍPIOS DE BIOQUÍMICA
4.1 CARBOIDRATOS
4.1.1 Monossacarídeos
4.1.2 Polissacarídeos
4.2 PROTEÍNAS
4.2.1 Aminoácidos

4.2.2 Peptídeos e Proteínas
4.2.3 Enzimas
4.3 LIPÍDIOS
4.3.1 Ácidos Graxos
4.3.2 Triglicerídeos
4.3.3 Fosfolipídios

5 PRINCÍPIOS DE MICROBIOLOGIA
5.1 ESTRUTURAS PROCARIONTES
5.1.1 Membrana Citoplasmática
5.1.2 Parede Celular
5.1.3 Cílios e Flagelos
5.1.4 Material Genético
5.1.5 Componentes citoplasmáticos
5.2 NUTRIÇÃO E METABOLISMO
5.3 CRESCIMENTO MICROBIANO
5.3.1 Ciclo de Crescimento

6 PRINCÍPIOS DE HEMATOLOGIA
6.1 PLASMA
6.2 HEMÁCIAS
6.3 LEUCÓCITOS
6.4 PLAQUETAS

7 PRINCÍPIOS DE IMUNOLOGIA
7.1 IMUNIDADE INATA
7.1.1 Fatores Físicos
7.1.2 Fatores Químicos
7.1.3 Fatores Biológicos
7.2 IMUNIDADE ADQUIRIDA
7.3 ANTICORPOS E ANTÍGENOS

8 INTRODUÇÃO

9 TÉCNICAS DE PIPETAGEM E MICROPIPETAGEM
9.1 PIPETAS
9.2 MICROPIPETAS
9.2.1 Pipetagem Direta
9.2.2 Pipetagem Reversa

10 USO DE CAPELA E CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA
10.1 CAPELA
10.2 CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA
10.2.1 CBS Classe I
10.2.2 CBS Classe II
10.2.3 CBS Classe III
10.3 TRABALHANDO COM CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA
10.3.1 Luz ultravioleta
10.3.2 Limpeza

10.3.3 Cuidados durante operação CBS
10.3.4 Resumo de Utilização de CBS

11 QUALIDADE E AUTOMAÇÃO NO LABORATÓRIO DE ANÁLISES CLÍNICAS

12 PREPARO DE SOLUÇÕES
12.1 DEFINIÇÕES
12.2 CÁLCULOS
12.2.1 Percentual (%)
12.2.2 Concentração (g/l)
12.2.3 Molaridade (M)
12.2.4 Diluição
12.2.5 Mistura de Soluções
12.3 CUIDADOS NA PREPARAÇÃO DE SOLUÇÕES
12.4 ROTEIRO ILUSTRATIVO

13 PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
13.1 CLASSIFICAÇÃO QUANTO AO ESTADO FÍSICO
13.2 CLASSIFICAÇÃO QUANTO A CONSTITUIÇÃO
13.3 CLASSIFICAÇÃO QUANTO A FINALIDADE
13.4 PROCEDIMENTOS GERAIS PARA PREPARO DE MEIO DE CULTURA
13.4.1 Preparação e Distribuição
13.4.2 Controle de Qualidade

14 LAVAGEM E ESTERILIZAÇÃO
14.1 LAVAGEM
14.2 EMBALAGEM
14.3 ESTERILIZAÇÃO
14.3.1 Métodos Físicos
14.3.1.1 Calor Seco
14.3.1.2 Calor Úmido
14.3.1.3 Filtração
14.3.1.4 Radiação
14.3.2 Métodos Químicos
14.3.2.1 Óxido de Etileno
14.3.2.2 Formaldeído
14.3.2.3Composto de amônia
14.3.2.4 Ácido Paracético

15 ORGANIZAÇÃO DO AMBIENTE DE TRABALHO
15.1 FLUXO DE TRABALHO
15.2 EQUIPAMENTOS
15.3 CONTROLE DE ESTOQUE
15.4 REGISTROS

REFERÊNCIAS

1 INTRODUÇÃO

O trabalho em um laboratório é extremamente prazeroso e traz muito conhecimento aos
colaboradores atuantes nesta área. Porém, também existem várias regras e conhecimentos
específicos necessários para a realização de um trabalho de qualidade e seguro.
Ter comprometimento e perfil para assumir um lugar nesta rotina são os pré-requisitos
desta área. O funcionário deve ser detalhista, paciente, saber trabalhar em equipe, ser
habilidoso, criativo e interessado em aprender.
O trabalho em um laboratório não é como em um escritório, onde se pode parar quando
chegar o horário do fim do expediente. As células e microrganismos não esperam. É preciso
obedecer ao tempo ‘deles’.
Por isso a organização é um dos elementos fundamentais para uma rotina bem-
sucedida. Programar os ensaios e atividades é a chave do sucesso para a organização eficiente
do tempo.
Além disso, como se comportar em um laboratório, quais são os instrumentos
disponíveis para o trabalho neste ambiente, os ‘porquês’ e ‘como’ das técnicas usadas nas
análises, tudo isso abordaremos aqui neste conteúdo.
Com informações importantes para o dia a dia de um analista e com informações
teóricas sobre o conteúdo de Rotinas Laboratoriais visa trazer ao aluno conhecimentos da vida
prática de um laboratório e introduzi-lo à vida no laboratório.

2 REGRAS DE SEGURANÇA NO LABORATÓRIO

2.1 SEGURANÇA NO TRABALHO

A presença de materiais perfurocortantes, vidrarias que podem se quebrar e causar
cortes, soluções químicas, materiais biológicos potencialmente contaminados, além de inúmeros
outros fatores presentes em um laboratório podem levar a um acidente de trabalho. Por isso é
necessário que haja procedimentos específicos predeterminados e difusão desse conhecimento
dentro da equipe técnica para a prevenção de acidentes e manutenção da qualidade do
ambiente de trabalho. Para a manutenção da Segurança do Laboratório é preciso avaliar fontes
e fatores de risco à saúde do trabalhador e promover condições e procedimentos para minimizar
acidentes de trabalho.
Vamos inicialmente conhecer os riscos possíveis dentro de um ambiente laboratorial:

2.1.1 Risco Físico

São os riscos causados por fontes que gerem danos físicos ao operador, dentre esses
podemos citar:

Perfurocortantes
São provocados por instrumentos ou materiais perfurocortantes, como por exemplo,
perfurações com agulhas, lancetas ou cortes com bisturi, tesoura ou vidraria quebrada.
Radiações (Luz ultravioleta, infravermelho)
Exposição a fontes de radiação. Existem métodos de desinfecção e esterilização que
utilizam radiações com luz infravermelho, luz ultravioleta e raio gama. Estas em contato com o
operador, sem proteção específica, podem gerar danos físicos e até mutagênicos.

Calor
O laboratório biológico é rico em fontes de calor que podem causar acidentes: bico de
Bunsen, fornos de esterilização, estufas, autoclaves, são todas fontes que chegam a altas
temperaturas que sem o devido cuidado podem provocar sérios acidentes.

2.1.2 Risco Químico

Existem muitos produtos químicos que podem causar danos e estes podem ser
inflamáveis, tóxicos, carcinogênicos ou cáusticos.

FIGURA 1

FONTE: Disponível em: <http://commons.wikimedia.org>. Acesso em: 22 fev. 2012.

As soluções químicas sempre trazem em seu rótulo o fator de risco presente e as
condições de armazenagem necessárias, por isso é importante sempre ler o rótulo antes de
guardar os reagentes e de manipulá-los.

http://commons.wikimedia.org/

2.1.3 Risco Biológico

No caso de um laboratório de análises clínicas, por exemplo, esta é a principal fonte de
risco. Alguns exemplos são Culturas células, Micro-organismos, Parasitas e Toxinas produzidas
por micro-organismos. São necessáriosprocedimentos especiais para a manipulação e descarte
dos materiais biológicos.

2.1.4 Grupos de Riscos Biológicos

Os agentes biológicos são divididos de acordo com os seguintes critérios: grau de
patogenicidade, alteração genética, estabilidade, virulência, modo de transmissão, endemicidade
e disponibilidade de medidas profiláticas e tratamento eficaz. A ANVISA divide os agentes
biológicos em 5 classes, levando em conta o risco para o ser humano, animais, meio ambiente e
consequências epidemiológicas e a OMS possui uma classificação específica para trabalho
laboratorial, com 4 Grupos de Riscos. Por nosso conteúdo se tratar de Rotinas laboratoriais
utilizaremos o critério de classificação da OMS.
Grupo de Risco 1 (nenhum ou baixo risco individual e coletivo)
Um microrganismo que provavelmente não pode causar doença no homem ou em um
animal.
Grupo de Risco 2 (risco individual moderado, risco coletivo baixo)
Um agente patogênico que pode causar uma doença ao homem ou animais, mas que
é improvável que constitua um perigo grave para o pessoal dos laboratórios, à comunidade, o
gado ou o ambiente. A exposição a agentes infecciosos no laboratório pode causar uma infecção
grave, mas existe um tratamento eficaz e medidas de prevenção e o risco de propagação de
infecção é limitado.

Grupo de Risco 3 (alto risco individual, baixo risco coletivo)
Um agente patogênico que causa geralmente uma doença grave no homem ou no
animal, mas que não se propaga habitualmente de uma pessoa a outra. Existe um tratamento
eficaz, bem como medidas de prevenção.

Grupo de Risco 4 (alto risco individual e coletivo)
Um agente patogênico que causa geralmente uma doença grave no homem ou no
animal e que se pode transmitir facilmente de uma pessoa para outra, direta ou indiretamente.
Nem sempre está disponível um tratamento eficaz ou medidas de prevenção.

2.2 CÓDIGO DE PRÁTICAS

Cada laboratório possui um Código específico, de acordo com riscos conhecidos e
potenciais presentes. Porém, algumas normas são essenciais para a manutenção das Boas
Práticas Laboratoriais e aqui descreveremos uma lista básica de requisitos para o trabalho em
laboratório biológico.

2.2.1 Normas de Acesso
FIGURA 2

FONTE: Manual de Segurança Biológica em Laboratório – OMS.

1. O símbolo internacional de risco biológico (Figura acima) devem estar expostos nas
portas das salas onde se estão a manusear microrganismos do Grupo
de Risco 2 ou acima.
2. Só o pessoal autorizado deve entrar nas áreas de trabalho do laboratório.
3. As portas do laboratório devem permanecer fechadas.
4. É proibida a presença de pessoas não autorizadas nas áreas do laboratório.
5. O acesso aos compartimentos de animais requer autorização especial.
6. Nenhum animal deve entrar no laboratório, além dos necessários aos procedimentos.

2.2.2 Normas de Proteção Individual

FIGURA 3

FONTE: Disponível em: <http://biomedicinaemicro.blogspot.com>. Acesso em: 22 fev. 2012.

1. Uso obrigatório de jalecos, aventais ou uniformes exclusivos ao trabalho no laboratório.

2. PROIBIDO uso do avental fora do laboratório (cantina, cafetaria, escritórios, biblioteca,
salas do pessoal e banheiros). Ele deve ser considerado potencialmente contaminado
podendo, portanto, contaminar o ambiente externo e também o inverso, trazer
contaminações do ambiente externo para dentro do laboratório.

3. Obrigatório uso de luvas de procedimento em todos os trabalhos com contato direto ou
potencial com sangue, fluidos corporais, materiais ou animais potencialmente
infecciosos ou infectados. Após utilização, devem tirar-se as luvas sem tocar a parte
externa destas e lavar as mãos. Se necessário, utilizar dois pares de luvas de
procedimentos.

4. Uso de máscara. As máscaras de proteção são necessárias para a proteção tanto da
amostra quanto do operador. No caso de manipulação amostras potencialmente
contaminadas ou com presença confirmada de agentes biológicos do grau de risco 3
e/ou 4 a máscara deverá possuir sistema de filtração.

5. Lavagem das mãos antes e depois dos procedimentos técnicos e antes de sair do
laboratório. A lavagem das mãos deve ser feita nas palmas, costas e embaixo das unhas
e depois do enxágue, usar uma toalha ou papel para fechar a torneira.

6. Uso de óculos de segurança, viseiras ou outros dispositivos de proteção, sempre que
for necessário proteger rosto e olhos contra impactos, produtos químicos, radiação e
manipulação de material biológico potencialmente contaminado.

7. Obrigatório o uso de sapato fechado. Sandálias e chinelos não devem ser utilizados
nos laboratórios.

8. É proibido comer, beber, fumar e colocar lentes de contato nas áreas de trabalho do
laboratório.
9. É proibido guardar alimentos nas áreas de trabalho do laboratório.

10. A roupa de proteção laboratorial utilizada no laboratório não deve ser guardada nos
mesmos locais da roupa normal.

11. É proibida a utilização de acessórios tais como: anéis, brincos, colares e de
maquiagem.

2.2.3 Normas de Procedimento

1. Proibido pipetagem com a boca.

2. Nenhum material deve ser colocado na boca ou cheirado.

3. Todos os procedimentos técnicos devem ser efetuados de forma a minimizar a formação
de aerossóis e gotículas.

4. A utilização de agulhas e seringas hipodérmicas deve ser limitada, essas não devem ser
utilizadas como substitutos de pipetas ou qualquer outro fim, além de injeções ou
aspiração de fluidos de animais de laboratório.

5. Qualquer derrame, acidente, exposição efetiva ou potencial a materiais infecciosos deve
ser notificado ao supervisor do laboratório. Deve manter-se um registro escrito de tais
acidentes e incidentes.

6. Devem ser elaboradas normas escritas para a limpeza destes derrames e devidamente
aplicadas.

7. Os líquidos contaminados devem ser (química ou fisicamente) descontaminados antes
de serem lançados nos esgotos sanitários. Pode ser necessário um sistema de
tratamento de efluentes, segundo a avaliação de riscos do agente manuseado.

8. O laboratório deve estar arrumado, limpo e sem materiais que não sejam pertinentes
para as suas atividades.

9. As superfícies de trabalho devem ser descontaminadas após qualquer derrame de
material potencialmente perigoso e no fim de um dia de trabalho.

10. Todos os materiais contaminados, espécimes e culturas devem ser descontaminados
antes de serem descartados ou reutilizados.

11. A embalagem e o transporte devem obedecer aos regulamentos nacionais e/ou
internacionais pertinentes.

2.2.4 Controle da Segurança Biológica

O trabalho com materiais biológicos deve sempre ser controlado para a segurança
tanto da amostra analisada, para a garantia da qualidade do diagnóstico, quanto para preservar
a saúde do operador. Para tanto é necessária à adoção de algumas medidas para controle da
segurança biológica dentro de um laboratório.
Em um laboratório sempre há um diretor ou um supervisor que irá nomear, se não for
ele próprio, um Responsável Técnico pelo Laboratório. Este será o colaborador responsável pela
tomada de decisões no dia a dia, por implantar e atualizar os procedimentos e pela elaboração e
manutenção de um plano para garantia da segurança. Este plano pode ter vários nomes,
dependendo de cada empresa, mas aqui chamaremos de Plano de Controle de Segurança
Biológica.
O responsável técnico do laboratório pode designar um outro colaborador a seu critério
para a elaboração deste plano. Todos os funcionários são responsáveis pela manutenção da
Qualidade e Segurança dentro de um laboratório e por isso é necessário o treinamento e
atualização de todos os envolvidos para o laboratório ser um ambiente mais seguro.
É preciso ter um Manual de Segurança e/ou Operacional, com todasas regras e
procedimentos que devem ser adotados. É imprescindível que todos realmente saibam e sigam
este manual e por isso são necessários treinamentos periódicos destas normas. Para não se
tornar maçante e para melhor entendimento das informações e conceitos do Manual podem ser
realizados além dos treinamentos, cursos de reciclagem e aperfeiçoamento para toda a equipe.
O Manual de Segurança deve ser conhecido por todos e disponível dentro do laboratório, para
ser consultado sempre que necessário.
A manutenção da limpeza do laboratório é obrigatória e deve ser realizada
frequentemente, além de sua higienização também é necessária à desinfecção do ambiente com
produtos antimicrobianos. Também é necessário um controle para evitar a entrada e presença
de pragas como roedores e de artrópodes, que podem atuar como fonte de contaminação para o

ambiente. É recomendado o laboratório ter portas e janelas com vedação ou com sistemas que
impeçam a invasão de artrópodes, como por exemplo, telas e um programa de dedetização
periódico.

3 O LABORATÓRIO CLÍNICO

A função principal do trabalho de um Laboratório Clínico é fornecer subsídios clínicos
aos médicos para que possam confirmar ou rejeitar um diagnóstico e/ou monitorar pacientes em
tratamento. Dessa forma, a obtenção de um resultado laboratorial é apenas uma parte da rede
necessária para um diagnóstico e/ou tratamento de um paciente. Trata-se de uma importante
etapa, pois se houver algum erro, por motivos técnicos ou de manipulação, pode haver uma falsa
interpretação pelo médico e consequente ineficácia no tratamento ou prejuízos maiores ainda. O
trabalho dentro do laboratório exige uma série de procedimentos que devem ser padronizados e
sempre reavaliados quanto à sua eficácia, além de passar por constante controle de qualidade
de todas as etapas envolvidas: equipamentos, insumos, amostras, procedimentos e equipe
técnica. Aliás, a responsabilidade e execução de atividades de um laboratório é sempre
desenvolvida e pensada como um trabalho em equipe.
A equipe do Laboratório Clínico é composta por vários profissionais como: Médicos,
Biólogos, Biomédicos, Técnicos, Auxiliares, Secretárias e Equipe de limpeza. Sem o médico o
paciente não pode ter uma receita para continuar seu tratamento e sem a faxineira, por exemplo,
o ambiente não mantém as condições de limpeza e qualidade necessárias para a realização dos
exames. Por isso é que todos os membros da equipe são necessários e importantes para a
garantia da qualidade do resultado final.
Um laboratório clínico pode contar com diversos setores ou atuar com um ou mais
tipos de exames em um ambiente único. Algumas das especialidades encontradas são:
Citologia, Hematologia, Bioquímica, Imunologia, Parasitologia e Biologia Molecular. Em todas
essas especialidades é necessária uma estrutura básica

3.1 INSTALAÇÕES
FIGURA 4

FONTE: Disponível em: <http://miltonkennedy.blogspot.com/2011_04_01_archive.html>.
Acesso em: 12 mar. 2012.

As instalações laboratoriais, além de compatíveis com as regulamentações municipais,
estaduais e federais, devem ser de acordo com o grau de segurança biológica necessária para o
trabalho. Isto é, dependendo do grupo de risco do material manipulado é o nível de segurança
exigido para o laboratório. Segundo a ANVISA são quatro os níveis de Biossegurança: NB-1,
NB-2, NB-3 e NB-4 e esses estão relacionados com os requisitos crescentes de segurança para
o manuseio de agentes biológicos, de acordo com o grau de risco. O nível de Biossegurança
exigido para um ensaio é determinado pelo agente biológico de maior classe de risco envolvido
no laboratório e quando o potencial patogênico é desconhecido é preciso ser feita uma análise
de risco para saber em qual nível de segurança deverá ser manipulado o agente. Independente
do nível de segurança biológica alguns critérios são os mesmos e os descreveremos a seguir.

A instalação deve ter paredes e piso lisos, não porosos, com cantos arredondados,
com acabamentos impermeáveis e resistentes a produtos químicos, para facilitar a limpeza e a
descontaminação da área. O chão deve ser de material antiderrapante e é proibido encerar o
chão. Também é proibido o uso de carpetes, cortinas, persianas ou similares e quando
necessário utilizar películas protetoras ou outras formas para proteção solar. As janelas e as
Você sabia? Que para entrar nos Laboratórios de Biossegurança
níveis NB-3 e NB-4 é preciso trocar de roupa e para sair é preciso
tomar banho?

portas devem ser de materiais que facilitem a limpeza e a manutenção e com acabamentos que
retardem o fogo. As instalações físicas devem estar de acordo com as regulamentações de
segurança do Corpo de Bombeiros em relação à proteção contra incêndio e as rotas de fuga e
saídas de emergência devem estar identificadas e conhecidas por todos. Os laboratórios devem
possuir portas para o controle do acesso ao público. As portas devem ser mantidas fechadas e
possuir visores, exceto quando haja recomendação contrária.
Pisos e bancadas devem ser nivelados e a bancada também deve ser de material liso,
impermeável e de fácil limpeza, resistente a calor moderado e ação de solventes orgânicos,
ácidos, álcalis e solventes químicos. O mobiliário deve ser robusto e de fácil limpeza, a
circulação dentro do laboratório deve ser facilitada com espaçamento entre bancadas, cabines e
equipamentos. Todos os equipamentos, bancada e mobiliário devem ter espaço na parte inferior
para facilitar a limpeza e descontaminação. O ambiente deve ser bem iluminado e possuir
circulação de ar – mesmo que artificial e temperatura amena. Prevendo casos de falta de energia
elétrica a instalação deve ser equipada com um sistema de iluminação de emergência e fonte de
energia alternativa (gerador, no-break) para abastecimento de equipamentos de uso contínuo
essencial como: congeladores, geladeiras, estufas entre outros.
Deve haver pia separada, para lavagem e higienização das mãos, e ambientes, fora do
laboratório, para descanso, alimentação e guarda de objetos pessoais como, bolsas, carteiras e
roupas.

Resumo Características Físicas Laboratório:
1. Paredes, chão e bancadas lisos, impermeáveis e fáceis de limpar e
descontaminar;
2. Chão e bancadas niveladas;
3. Espaço entre mobiliário e bancadas para circulação do pessoal;
4. Chão antiderrapante;
5. Ambiente bem iluminado;
6. Boa circulação de ar;
7. Sistema de geração de energia em casos de falta de luz;
8. Sistemas de segurança contra incêndios;
9. Sistema de controle de acesso de pessoas ao laboratório;
10. Local separado para: lavagem das mãos, descanso e alimentação.

3.2 EQUIPAMENTOS E MATERIAIS DE LABORATÓRIO

Há vários equipamentos e materiais para o auxílio das técnicas no Laboratório, e a
cada dia são desenvolvidos e aperfeiçoados para facilitar o dia a dia do operador e tornar a
rotina mais ágil e eficaz. A seguir está uma relação dos equipamentos e materiais mais comuns.

Capela
É uma cabine com sistema de exaustão para o trabalho com reagentes tóxicos e
voláteis. Existe uma barreira, de vidro ou acrílico, entre o operador e o material manipulado. É
considerado um Equipamento de Proteção Coletiva.

FIGURA 5

Cabines de Segurança Biológicas

São usadas para proteção do operador e/ou da amostra manipulada. Existem vários
tipos de Cabines de Segurança Biológicas (CBS) e esses variam de acordo com o grau de risco.
A mais simples é a Cabine de Fluxo Laminar que é usada apenas para a proteção do material
FONTE: Disponível em: < http://www.nalgon.com.br/imagens/prod3700.jpg >.
Acesso em: 12 mar. 2012.

manipulado – como no caso de preparo de meios de cultura e soluções estéreis. Outros modelos
de Cabines de Segurança Biológica variam da classe I a III, onde protegem amostra e operador,
e a cadanível que aumenta possuem mais filtros e dispositivos de segurança.

FIGURA 6

FIGURA 7 Estufa
Pode ser utilizada tanto para secagem de amostras e
materiais ou para cultura bacteriológica (não a mesma estufa, uma
para cada finalidade). Chega a temperaturas altas, geralmente em
torno de 150ºC. Existem variações destas estufas com mais recursos,
como controle de umidade e de CO2.

FONTE: Disponível em: <
http://www.sotelab.com.br/produtos/imagens/cabin
es/cabine_de_seguranca.png />. Acesso em: 12
mar. 2012.

FONTE: grupo tchê química

FIGURA 9 - FONTE: Disponível em: <
http://www.tecmed.ind.br/autoclaves/i
mg%27s/P23avs.gif >. Acesso em: 12
mar. 2012.

Forno Pasteur
Forno utilizado para esterilização a seco. Chega a altas
temperaturas, entre 250 e 300ºC.

Autoclave
Equipamento usado para esterilização úmida. Funciona
como uma grande panela de pressão, utiliza temperaturas em
torno de 120ºC e 1 a 1,5 atm de pressão.

FIGURA 10 Centrífuga
Equipamento utilizado para acelerar a decantação (sedimentação) de
amostras e soluções. Existem variações quanto ao tipo e tamanho de
tubo utilizado - podem ter rotores com capacidade para tubos de 100 ml a
100ul - capacidade de tubos - de 4 a 100 tubos, por exemplo –
velocidade rotacional - de 100 rpm (rotação por minuto) a 10.000rpm – e
com ou sem refrigeração.

FIGURA 8: FONTE: Disponível em:
<laboratorioscolasticocde.myblog.it>.
Acesso em: 10 jan 2012.

FONTE: Disponível em:
<www.eppendorf.com>.
Acesso em: 12 mar. 2012.

http://laboratorioscolasticocde.myblog.it/

Usado para homogeneização de amostras líquidas. Há grande variedade de modelos:
Agitadores

FIGURA 11

Vortex: tem por princípio a agitação do tubo

FIGURA 12

Agitador orbital: possui uma agitação mais ‘delicada’, onde uma bandeja faz movimentos
planos.

- FONTE: Disponível em: <www.analiticaweb.com.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.

FONTE: Disponível em: <www.analiticaweb.com.br>.
Acesso em: Acesso em: 12 mar. 2012.

Agitador magnético: dentro do frasco (balão, erlenmeyer, etc.) é colocada uma barra magnética
e o imã na plataforma do agitador movimenta esta barra em movimentos circulatórios.

FIGURA 13

Microscópio
Um instrumento essencial para grande parte das técnicas laboratoriais clínicas,
sobretudo as citológicas e hematológicas. Existem muitos tipos de microscópios, porém os mais
conhecidos são:

Microscópio Óptico: tipo mais comum usa luz para iluminar as estruturas e a
observação é feita através de lentes de refração e oculares de vidro. Uma variação é o
Microscópio Fluorescente, que possui o mesmo princípio porém usa um comprimento de onda
diferente. Também existe uma versão de Microscópio óptico digital onde uma câmera de
vídeo é associada para visualização em monitor.

FONTE: Disponível em: <www.analiticaweb.com.br>.
Acesso em: 12 mar. 2012.

Barra magnética

FIGURA 14

Microscópio Eletrônico: Utiliza elétrons para tornar a estrutura visível. Existem
microscópios eletrônicos que produzem imagem em 2D (Transmissão) e em 3D (Varredura).

FIGURA 15

Banho-maria
Microscópio óptico comum
Microscópio óptico digital
FONTE: Disponível em: <http://www.biomedicinapadrao.com>.
Acesso em: 12 mar. 2012.

Microscópio eletrônico
Imagem vírus da poliomielite por
um microscópio de transmissão
Imagem de grãos de pólen por um
microscópio de varredura
FONTE: Disponível em:
<commons.wikimedia.org>. Acesso em: 12
mar. 2012.

Equipamento para aquecimento e incubação de amostras, soluções e cultura. Existem
modelos com funções adicionais como, timer, agitação ou suportes acoplados para frascos
específicos.
FIGURA 16

Bico de Bunsen
É a fonte de calor mais comum usada em laboratório. Consiste em um bico de gás com
uma válvula para controle da intensidade da chama.

FIGURA 17

Entrada de ar
(janela)
Entrada de gás
FONTE: Disponível em: <www.cial-paulinia.com.br>.
Acesso em: 12 mar. 2012.

FONTE: Disponível em: <www.rapidonline.com>. Acesso em:
Acesso em: 12 mar. 2012.

Para ligar o bico de bunsen a entrada de ar (janela) deve estar fechada, para evitar que
entre acidentalmente uma chama pela tubulação de gás. Quando a janela está fechada o bico
produz uma chama amarela – chama ‘fria’, pouco oxidante e inadequada para o aquecimento – e
quando a janela está aberta, devido à entrada de ar que alimenta a chama, ela torna-se azul e é
chamada de ‘quente’ por possuir maiores temperaturas. Considera-se a área ao redor da chama
– cerca de 30 cm – como zona estéril.

FIGURA 18

Balança analítica e semianalítica

As balanças mais utilizadas são as analíticas e semianalíticas. A diferença entre elas é o
grau de precisão na medição. Enquanto a semianalítica tem uma precisão de até três casas
decimais (0,001g) a analítica chega até quatro a cinco casas decimais. O tipo de balança
encontrada então dependerá da necessidade de precisão nas técnicas utilizadas. Existem vários
detalhes envolvidos para a realização de uma medição técnica adequada: a bancada deve estar
nivelada e sem pessoas circulando perto ou trabalhando na mesma bancada – para evitar
vibrações que alterariam o valor do resultado medido, deve haver uma verificação da calibração
Chama amarela
‘fria’
Chama azul
‘quente’
FONTE: Disponível em: <commons.wikimedia.org>.
Acesso em:: 12 mar. 2012.

FONTE: Disponível em:
<www.sxc.hu>. Acesso em:
12 mar. 2012.
com pelo menos 1 hora de antecedência ao primeiro uso do dia, o prato e cabine devem ser
limpos com um pincel – para retirada de sujidades e resíduos – antes da pesagem, o operador
deve utilizar luvas durante todo o procedimento – para não deixar resíduos de gordura na
vidraria utilizada e evitar, assim, alteração da medida – entre outros inúmeros detalhes técnicos.

FIGURA 19

FIGURA 20

Tubos de Ensaio: utilizados para fazer reações químicas em pequena escala e
para aquecer soluções.

FIGURA 21

Béquer: utilizado para preparo de soluções.

FIGURA 22
FONTE: Disponível em:
<www.splabor.com.br>. Acesso em: 12 mar.

FONTE: Disponível em: <www.cdcc.sc.usp.br>. Acesso
em: 12 mar. 2012.

Erlenmeyer: usado para titulações.

FIGURA 23

Kitassato: parte de conjunto usado para filtrações a vácuo.

FONTE: Disponível em: <www.cdcc.sc.usp.br>.
Acesso em: 12 mar. 2012.

FIGURA 24

Balão Volumétrico: frasco calibrado de precisão utilizado
para diluir e preparar soluções.

FIGURA 25

Balão de fundo redondo: usado para aquecer líquidos e
realizar reações
que envolvam desprendimento de gases.
FONTE: Disponível em: <www.onixmetrologia.com.br>. Acesso em:
12 mar. 2012.
FONTE: www.pro-analise.com.br>.
Acesso em: 12 mar. 2012.
http://www.cdcc.sc.usp.br/
http://www.onixmetrologia.com.br/
http://www.pro-analise.com.br/

FIGURA 26

Proveta: usado para medidas aproximadas de volumes líquidos.

Bureta: Serve para dar escoamento a volumes variáveis de líquidos. FIGURA 27
É uniformemente calibrada, graduada em décimos de mililitro.
Possui uma torneira que permite o controle de escoamento.

Pipetas
Graduada: usada para medir volumes de líquidos.

FIGURA 28

FONTE: Disponível em: <www.cdcc.sc.usp.br>.
Acesso em: 10 mar. 2012.
FONTE: boj.pntic.mec.es>. Acesso
em: 09 fev. 2012.
FONTE: Disponível em: <noticias.vidrado.com>. Acesso em: 09 fev. 2012.
http://www.cdcc.sc.usp.br/

Volumétrica: usadapara medidas precisas de variados líquidos.

FIGURA 29

Funil: usado para transferência de líquidos e para filtrações.

FIGURA 30

Vidro de relógio: recipiente usado para pesagens.
FIGURA 31

FONTE: Disponível em: <www.jpdiagnostica.com.br>. Acesso
em: 10 fev. 2012.
FONTE: Disponível em: <www.fcf.usp.br>. Acesso em: 05
fev. 2012.
http://www.fcf.usp.br/

Placa de Petri: usado principalmente para cultivo – células,
bactérias, fungos, etc.

FIGURA 32

Bastão de vidro: usado para homogeneização e transferência de líquidos.

FIGURA 33

Dessecador: Recipiente de vidro resistente que contém em seu interior substâncias que são
higroscópicas (absorvem a umidade de outras substâncias). É
utilizado para esfriar ou preservar algum material ou reagente sem
que haja absorção de umidade.
FONTE: Catálogo Brand
FONTE: Disponível em: <www.frascolex.com.br>. Acesso em:
09 fev. 2012..
http://Fonte:%20www.frascolex.com.br

FIGURA 34

FIGURA 35

Almofariz e pistilo: Usado para triturar sólidos, pulverizar e
homogeneizar mistura e sólidos.

FIGURA 36

Tela de amianto: usada para distribuir uniformemente o calor
durante um aquecimento.

FONTE: Grupo Tchê Química
FONTE: Disponível em: <nalgon.com.br>. Acesso em: 12 mar.
2012
FONTE: www.agracadaquimica.com.br>.
Acesso em: 10 fev 2012.
http://www.nalgon.com.br/

Suporte universal, mufa e garra: usados na sustentação de peças para diversos fins.

FIGURA 37

Tripé: usado como suporte de telas de amianto em processos de aquecimento com o bico de
Bunsen.

FIGURA 38

FONTE: Disponível em: <www.cgomes.uac.pt>. Acesso
em: 12 mar. 2012
FONTE: www.cap-lab.com.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.
http://www.cgomes.uac.pt/
http://www.cap-lab.com.br/

Pinça de madeira: usada para segurar tubos de ensaio.

FIGURA 39

Pipetador ou pera: instrumento de sucção para auxílio na pipetagem.

FIGURA 40

FONTE: www.cdcc.sc.usp.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.
FONTE: images.linuxidx.com>. Acesso em: 12 mar. 2012.
http://images.linuxidx.com/

FIGURA 41

Pisseta: de plástico, usado para
líquidos de uso constante como: água destilada, álcool 70%.

Alça para inoculação: Para inoculação em meios de cultura.
Podem ser de metal (platina) ou descartáveis

FIGURA 42

FONTE: Catálogo Brand
FONTE: www.cdcc.sc.usp.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.

Capilar: tubos de vidro extremamente finos, aberto em ambas às extremidades. Utilizado em
técnicas que necessitam de pequenos volumes líquidos.

FIGURA 43

Exercícios de Fixação:

1 Quais dos critérios abaixo descritos são usados para a classificação dos Grupos de Riscos dos
agentes biológicos?

a) Patogenicidade, modo de transmissão, medidas profiláticas e tratamentos disponíveis.

b) Grau de sujidade da amostra, número de agentes biológicos envolvidos, tempo de exposição,
tempo de tratamento.

c) Modo de transmissão, tipo de micro-organismo, capacidade de infecção do agente,

d) Medidas de controle do agente, grau de sujidade da amostra, capacidade de proliferação.

FONTE: Catálogo Brand

e) Número de agentes biológicos envolvidos, capacidade de proliferação, medidas profiláticas e
de tratamento disponíveis.

2 Assinale verdadeiro ou Falso: Como deve ser a estrutura de um laboratório?

( ) Cor clara, chão e paredes de azulejo, bancadas largas e corredores estreitos para melhor
aproveitamento do espaço.

( ) Piso e paredes de azulejo, bancadas fixas na parede com armários embutidos e centro livre
da sala livre.

( ) Chão e paredes laváveis e com cantos arredondados, chão e bancada nivelados e espaço
para circulação de pessoas e limpeza do ambiente.

( ) Muitas bancadas distribuídas, chão e paredes brancos laváveis e equipamentos em todas as
paredes.

Resp.
1 – A
2 – F; F; V; F; F

4 PRINCÍPIOS DE BIOQUÍMICA

4.1 CARBOIDRATOS

Os carboidratos são as biomoléculas mais abundantes na natureza. A celulose, os
açúcares e amidos, são todos carboidratos. Existem carboidratos em toda nossa volta e por isso
a seguir veremos sua estrutura e quem são.
4.1.1 Monossacarídeos

Os monossacarídeos com quatro, cinco, seis e sete átomos de carbono em seus
esqueletos são chamados de tetroses, pentoses, hexoses e heptoses. A cada um destes
comprimentos de cadeia existem aldoses e cetoses correspondentes, por exemplo: aldotetroses,
cetopentoses e assim por diante.

FIGURA 44

FONTE: Adaptado de Lehninger
Grupo cetose
CETOSE
Grupo
aldeído
ALDOSE
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5a/DL-Fructose.svg
http://en.wikipedia.org/wiki/Image:D-glyceraldehyde-2D-Fischer.png

São exemplos de hexoses bastante familiares à glicose, a galactose, a manose e a
frutose.

FIGURA 45

Além dos monossacarídeos simples existem os derivados, nos quais um grupo
hidroxila é trocado por outro grupo substituinte.

FIGURA 46

FONTE: Lehninger
FONTE: Adaptado de Lehninger
cetose
aldeídos

4.1.2 Polissacarídeos

Os dissacarídeos são constituídos por dois monossacarídeos unidos covalentemente
entre si por uma ligação glicosídica.

FIGURA 47

Quando uma hidroxila (OH) da molécula de um monossacarídeo reage com o átomo de
carbono da outra molécula de açúcar, há a formação da ligação glicosídica com a liberação de
H2O. Os oligossacarídeos são pequenos polímeros que possuem vários monossacarídeos. Já os
polissacarídeos possuem uma grande quantidade de monossacarídeos ligados, são polímeros
de média até alta massa molecular. Também são conhecidos como glicanos. Os polissacarídios
Ligação
glicosídica
FONTE: Adaptado de Lehninger.

podem ser compostos por um (Homopolissacarídeos) ou por mais tipos de monossacarídeos
(Heteropolissacarídeos) e podem estar ligados entre si em cadeias lineares ou ramificados.
FIGURA 48

O amido e o glicogênio, que servem como reserva energética para a maioria dos seres
vivos, são homopolissacarídeos e suas moléculas de glicose estão unidas por ligações do tipo α
(alfa) já a celulose e quitina, também são homopolissacarídeos, porém, as moléculas de glicose
estão unidas por ligações do tipo β (beta).

4.2 PROTEÍNAS

Proteínas são macromoléculas biológicas que estão presentes em todas as células,
fazem parte da estrutura dos seres vivos e são os instrumentos moleculares pelos quais a
informação genética é expressa. São variáveis quanto ao tamanho e função, porém todas são
constituídas pelo mesmo conjunto de aminoácidos.

FONTE: Lehninger

4.2.1 Aminoácidos

As proteínas são polímeros de aminoácidos. Comumente, são encontrados 20
aminoácidos diferentes. Todos esses possuem uma estrutura geral em comum e são α-
aminoácidos, pois possuem um grupo carboxila e um grupo amino ligados ao mesmo átomo de
carbono (o carbono α). O grupo R (cadeias laterais) ligado ao carbono α é o que difere em cada
aminoácido.
Esses, não podem ser sintetizados pelo nosso organismo e podem apenas ser obtidos
através da alimentação (animal ou vegetal), são chamados de aminoácidos essenciais. Além
destes existem outros, que podem ser produzidos pelo corpo, são conhecidos como aminoácidos
não essenciais.
FIGURA 49

AMINOÁCIDOS ESSECIAIS

AMINOÁCIDOS NÃO ESSENCIAIS
Fenilalanina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Treonina
Triptofano
Ácido Aspártico
Ácido Glutâmico
Alanina
Arginina
Asparagina
CisteínaGlicina
FONTE: Lehgninger
carbono α

Valina Glutamina
Histidina
Prolina
Serina
Tirosina

4.2.2 Peptídeos e Proteínas

Os aminoácidos podem se unir por ligações peptídicas, formando peptídeos e
proteínas. Quando há a união de poucos aminoácidos são considerados oligopeptídeos e
quando muitos estão unidos o produto é chamado de polipeptídeo. As proteínas podem ter
milhares de aminoácidos e são distinguidas dos polipeptídeos por seu alto peso molecular.
A sequência de aminoácidos, em uma proteína, é característica para cada proteína e
esta é chamada de sua estrutura primária. Há vários níveis de estrutura proteica, podendo
chegar até a estrutura quaternária. A cada nível estrutural a proteína se dobra, enovela, ficando
mais compactada e com uma estrutura mais complexa.

FIGURA 50

FONTE: Lehgninger

Estas estruturas são mantidas por forças e ligações químicas entre as moléculas e
dependem de condições especiais para manterem esta conformação estrutural. Condições
diferentes, como por exemplo, elevação de temperatura, resulta em perda da estrutura
tridimensional e é denominada de desnaturação. A função de uma proteína depende de sua
forma estrutural, ou seja, a forma como a estrutura secundária, terciária e/ou quaternária estão
dobradas. Desse modo, se por algum motivo a proteína perder sua forma ela também deixará de
ter sua função.

4.2.3 Enzimas

Uma das qualidades básicas e fundamentais para a manutenção e sucesso da vida é a
capacidade de uma célula, ou ser vivo, realizar reações químicas. É fácil entender esta relação
ao lembrar que para a vida existir é necessário energia. E para a obtenção, armazenamento e
liberação de energia são necessárias inúmeras reações químicas. E onde as enzimas entram
neste contexto? Bem, algumas reações não ocorreriam espontaneamente na natureza, ou então
demorariam horas ou até mesmo anos para acontecer. E aí que as enzimas entram, elas são as
catalizadoras destas reações, ou seja, são aceleradoras de todo este processo.
As enzimas, com exceção de um pequeno grupo de moléculas de RNA, são proteínas. E
sua função, assim como de todas as proteínas, depende de sua forma. Desse modo, se uma
enzima for desnaturada também perderá sua função.
Muitas enzimas têm seu nome de acordo com o substrato em que age ou o tipo de
atividade. Em geral sempre terminam com o sufixo ‘ase’ – lípase, amilase, protease. As enzimas
são classificadas de acordo com as reações que catalisam, abaixo podemos ver a Classificação
internacional de enzimas e o tipo de reação catalisada por cada grupo de enzimas.

FIGURA 51

4.3 LIPÍDIOS

Os lipídios são a principal forma de reserva energética em muitos organismos.
Também podem agir como cofatores (auxiliando enzimas nas reações), como sinalizadores e até
como pigmentos. Porém, sua principal função é estrutural, como componente das membranas
celulares, que são bicamadas lipídicas. São insolúveis na água e possuem estruturas químicas
diversificadas que podem ser extraídos por solventes não polares.

FONTE: Lehgninger

4.3.1 Ácidos Graxos

As gorduras e óleos são derivados de ácidos graxos. Os ácidos graxos, como seu
próprio nome já diz, possuem em sua composição um ácido carboxílico com uma cadeia de
hidrocarboneto associada (grupo R).

FIGURA 52

A cadeia de hidrocarbonetos varia de 4 a 36 átomos de carbono. Em alguns casos essa
cadeia não é ramificada e saturada, isto é, não contém ligações duplas entre os carbonos.
Alguns, poucos, contêm ramificações ou grupos hidroxila.

4.3.2 Triglicerídeos

Os lipídios mais simples que possuem ácidos graxos em sua composição são os
trigliceróis, popularmente chamados por triglicerídeos. São compostos por 3 moléculas de
ácido graxo unidas por uma ligação do tipo éster a uma molécula de glicerol.

FONTE: Lehgninger
Grupo R
Ácido carboxílico

FIGURA 53

4.3.3 Fosfolipídios

Também chamados de glicerofosfolipídios, são os lipídios que compõem a membrana
celular. Sua estrutura é feita de dois ácidos graxos ligados a um ácido fosfatídico. Sua
característica principal, e o que torna possível como membrana, é o fato de possuir um grupo
polar (grupo fosfato), hidrofílico e um grupo apolar (ácidos graxos) hidrofóbico.

Glicerol
Triglicerídeos
FONTE: Lehgninger

5 PRINCÍPIOS DE MICROBIOLOGIA

A Microbiologia é a ciência que estuda os micro-organismos, sua bioquímica, biologia e
interação com outros seres vivos. Os micro-organismos compreendem um imenso grupo com
membros que podem ser encontrados em células únicas ou em agrupamentos celulares e que
podem existir em praticamente todos os tipos de ambientes. Os membros deste grupo de estudo
são todos seres microscópicos que podem ser encontrados nos Reinos Monera (bactérias) e
Protista (protozoários), alguns no Reino Fungi (leveduras e bolores). Os micro-organismos
podem ser diferenciados dos organismos multicelulares por serem autônomos realizando todos
os seus processos vitais e se multiplicar, mesmo consistindo em uma única célula.

A célula é a unidade básica do ser vivo, separa-se de outras pela membrana celular,
que consiste em uma barreira física que separa o interior da célula do exterior e atua também
como selecionador do que deve ou não entrar na célula, através de vários mecanismos de
permeabilidade. Dentro da célula encontra-se o material genético, o DNA, que fica no núcleo ou
nucleoide, e possui todas as informações para a formação e manutenção celular. Ocupando o
interior da célula está o citoplasma, onde ficam todas as organelas que compõem a maquinaria
celular. Essa é a composição básica de qualquer célula.

FIGURA 54

Você sabia? Que vários autores não consideram os vírus como seres vivos. Isto porque
os vírus usam a maquinaria celular de outros seres vivos para reprodução e produção da
própria constituição da partícula viral.
Membrana Celular
DNA
Organelas
Citoplasma
FONTE: arquivo pessoal.

5.1 ESTRUTURAS PROCARIONTES

Dependendo do tipo de ser vivo, serão encontradas estruturas e composições
diferentes. Existem basicamente dois tipos de organizações celulares: eucariotos e procariotos.
A diferença entre eles é o modo como o material genético se encontra. No caso dos seres
eucariotos o DNA está organizado em um núcleo. Já nos procariontes o núcleo encontra-se
desorganizado, na realidade nem existe um núcleo propriamente dito, mas apenas o DNA ‘solto’
no citoplasma, são os seres vivos mais primitivos. O nosso foco serão as células procariotas, já
que as bactérias, grupo dominante na microbiologia clínica, são procariontes.

5.1.1 Membrana Citoplasmática

Fina e flexível é a barreira que separa a parte interna da célula do meio exterior. A
espessura gira em torno de 8nm, e se rompida à célula morre. As membranas biológicas são
feitas de duas camadas de fosfolipídios, intercaladas por proteínas. O fosfolipídio é considerado
um lipídio complexo porque tem associado ao lipídio uma molécula de fósforo, isso o torna
anfipático, ou seja, tem uma parte hidrofóbica (lipídio) e uma hidrofílica (fósforo).

FIGURA 55

proteínas
Molécula fosfolipídeo
fosfolipídeos
FONTE: Microbiologia de Brock

5.1.2 Parede Celular

A parede celular é a parte externa da célula procarionte. Sua estrutura é mais resistente
do que a membrana, oferece proteção e é quem dá a forma bacteriana. Quanto à forma, as
bactérias podem ser: cocos, bacilos, cocobacilos, vibrião, espirilo ou espiroqueta. Podem ser
encontradas sozinhas ou em arranjos, quando em grupos. Veja a seguir algumas formas e
arranjos comuns de bactérias.

FIGURA 56

5.1.3 Cílios e Flagelos

Essassão as estruturas responsáveis pela locomoção de grande parte dos micro-
organismos. São muito finos, parecendo um fio de cabelo. Podem ser compridos e únicos (ou em
pequeno número), no caso dos flagelos, ou curtos e numerosos, como os cílios. Um micro-
organismo pode possuir apenas um ou os dois tipos de estrutura e ao baterem milhares de
vezes por minuto e em alta velocidade causam o deslocamento da bactéria.

FIGURA 57
FONTE: Alterado de <http://little-monsters-espaa.blogspot.com.br/2010/11/bacterias.html>

FONTE: Alterado de http://pathmicro.med.sc.edu/fox/coli1.jpg. Acesso em: 16 mar.2012.

5.1.4 Material Genético

FIGURA 58

O nucleoide, também conhecido por DNA bacteriano, consiste em uma única grande
molécula de DNA com proteínas associadas, sem delimitação por membrana.
Nas bactérias, ainda como material genético, existem os plasmídeos, que são
moléculas circulares de DNA capazes de se reproduzir independentemente do DNA
cromossômico.

cílios
flagelos
DNA bacteriano plasmídeos

FONTE: Disponível em:
<http://pt.wikipedia.org/wiki/Wikip%C3%A9dia:Artigos_de
stacados/arquivo/Plasm%C3%ADdeo>. Acesso em: 26
mar. 2012.
http://pt.wikipedia.org/wiki/DNA
http://pt.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9cula
http://pt.wikipedia.org/wiki/DNA
http://pt.wikipedia.org/wiki/Cromossoma
http://pt.wikipedia.org/wiki/Cromossoma

5.1.5 Componentes citoplasmáticos

O citoplasma é uma solução aquosa que preenche o interior da célula bacteriana. Nele
está o DNA, ribossomos e demais organelas. Os ribossomos são partículas de RNA e proteína
e atuam na síntese proteica. Existem também grânulos ou inclusões, que podem variar de
bactéria para bactéria quanto à composição, mas basicamente são reservas de energia ou de
constituintes estruturais.

5.2 NUTRIÇÃO E METABOLISMO

Para que um ser vivo cresça, replique e tenha energia para todos os processos
envolvidos em sua manutenção são necessárias várias reações químicas que podem ser
chamadas de metabolismo. As reações metabólicas ocorrem tanto para a produção de energia
– Catabolismo – quanto para o consumo de energia – Anabolismo. E é com base nestes
conhecimentos que o cultivo celular em laboratório ocorre. Assim como nós precisamos de
alimentos para nosso corpo ter energia e manter o metabolismo, as bactérias também. Para a
manutenção de uma cultura de bactérias precisamos alimentá-las com nutrientes. Nem todos os
nutrientes são necessários nas mesmas quantidades, alguns são necessários em grandes
quantidades – Macronutrientes – enquanto outros, apenas com traços, são suficientes –
Micronutrientes. A seguir estão alguns exemplos de Macro e Micronutrientes.

FIGURA 59

5.3 CRESCIMENTO MICROBIANO

Em microbiologia, crescimento pode ser entendido como aumento no número de
células. A célula bacteriana é capaz de se duplicar e na maioria dos micro-organismos ocorre
por fissão binária. A medição desse crescimento por unidade de tempo é chamada de taxa de
MACRO Nutrientes Função celular
Carbono (C) 50% da constituição celular
Nitrogênio (N) 12% da constituição celular (aminoácidos)
Fósforo (P) Componente dos ácidos nucléicos e fosfolipídios
Enxofre (S) Componente de aminoácidos
Potássio (K) Componente de várias enzimas
Magnésio (Mg) Componente de membranas, ácidos nucléicos e enzimas
Cálcio (Ca) Componente de membranas e esporos.
Ferro (Fe) Papel chave na respiração, nos citocromos e proteínas.
MICRO Nutrientes Função celular
Cobalto (Co) Constituição de vitaminas
Cobre (Cu) Participação na respiração
Manganês (Mn) Ativador de enzimas
Zinco (Zn) Atuação na replicação celular

crescimento. Cada célula gera outras duas novas células, este intervalo de tempo é chamado
de geração e, o tempo necessário para que isso ocorra de tempo de geração. Este tempo é
variável de um organismo para outro, algumas bactérias levam dias para se dividir enquanto
outras, em questão de minutos se multiplicam, já a maioria das bactérias leva de 1 a 3 horas
para se duplicar. Este tempo também depende da qualidade e condições do ambiente. Em um
meio de cultura com os nutrientes adequados, quantidade suficiente, e com umidade e
temperaturas ideais, levarão a cultura de bactérias ao seu desenvolvimento máximo.

5.3.1 Ciclo de Crescimento
Como já vimos, cada célula dá origem a 2 células filhas e por isso o padrão de aumento
populacional é exponencial. Entretanto, existem fases no crescimento bacteriano em que não
são tão aceleradas. Quando uma população microbiana é inoculada em um novo meio (natural
ou em laboratório), o crescimento não se inicia de imediato. Isso porque o organismo precisa de
um período para adaptação, a este período damos o nome de Fase lag. A fase seguinte é a
Fase exponencial, onde as células encontram-se em seu pico de multiplicação. Depois de um
período de crescimento acelerado há certa estabilização na população microbiana e isso
acontece porque chega um período em que as células, assim como se dividem e ‘nascem’, outro
tanto de células também morrem e somado à limitação da capacidade de nutrientes e espaço
disponível, o crescimento chega a uma Fase estacionária ou platô. Se uma população que
atingiu a fase estacionária permanecer nestas condições sem acréscimo de nutrientes, depois de
um tempo haverá um maior número de morte celular do que de novas células, a esta fase, dá-se
o nome de Fase de morte ou declínio.
FIGURA 60

FONTE: Arquivo pessoal.
Fase lag
Fase exponencial
Fase estacionária
(platô)
Fase de morte
(declínio)
Número de
células
Tempo

6 PRINCÍPIOS DE HEMATOLOGIA

O sangue apresenta duas fases, uma líquida e uma sólida. A fase líquida é o plasma
e a fase sólida é composta pelos chamados elementos figurados, que são os glóbulos
vermelhos e brancos e as plaquetas. De forma geral o sangue é responsável pela nutrição de
todas as células do corpo, pela defesa contra agentes desconhecidos e pela manutenção
estrutural dos tecidos (cicatrização).

6.1 PLASMA

A parte líquida do sangue é o plasma, um líquido denso amarelado com composição
de 90% de água e 10% de proteínas, carboidratos, ácidos graxos, vitaminas, minerais,
hormônios e eletrólitos que possuem fundamental importância para a nutrição e manutenção das
atividades celulares.

6.2 HEMÁCIAS

FIGURA 61

Fonte: Disponível em:
<http://www.topnews.in/health/new-finding-may-pave-

way-improved-diabetes-treatment-23294>. Acesso em 26 mar. 2012.

As hemácias, também conhecidas por eritrócitos ou glóbulos vermelhos, são as células mais
abundantes no sangue. É devido à hemoglobina, presente nas hemácias, que o sangue possui
sua cor vermelha característica. É ela também a responsável pelo transporte do oxigênio e gás
carbônico. A hemácia, nos mamíferos, não possui núcleo e tem um formato de disco bicôncavo.
Seu tamanho varia de 6 a 8,5 micrômetros. As hemácias, assim como todos os elementos
figurados do sangue, são produzidos pela medula óssea e sua vida média é de 120 dias. A
escassez de glóbulos vermelhos é o motivo da anemia e o excesso destas células é chamado de
policitemia.

6.3 LEUCÓCITOS
Os leucócitos, ou glóbulos brancos, são as células representantes do sistema imune do
organismo. São eles que defendem o corpo do ataque e presença de agentes agressores ou
tóxicos. Os leucócitos são divididos em dois principais grupos: granulócitos e agranulócitos, de
acordo com a presença ou não de grânulos no citoplasma. Os granulócitos, por sua vez, estão
divididos em: neutrófilos, eosinófilos e basófilos e os agranulócitos podem ser monócitos ou
linfócitos.
FIGURA 62

Você sabia? Que os homens possuem mais hemácias do que as mulheres. Enquanto o
valor normal, para mulheres adultas, é de 4 a 5 mil hemácias por microlitrode sangue os
homens podem ter até 6 mil hemácias por microlitro.

FONTE: Disponível em: <ap-imune.webuda.com/>. Acesso em: 27 fev. 2012

Normalmente uma pessoa sadia apresenta de 6000 a 8000 leucócitos por ml de sangue.
Os leucócitos são produzidos e armazenados na medula óssea e são liberados na corrente
sanguínea apenas quando necessário e tem uma vida útil de 2 a 3 dias.

6.4 PLAQUETAS

As plaquetas são pedaços de células com formato arredondado formados a partir de
um megacariócitos, que é uma célula gigante produzida na medula óssea e fragmentada. A cada
ml são encontrados de 150 a 400 mil plaquetas em um indivíduo saudável, e cada plaqueta
possui uma vida média de 10 dias. Possuem papel fundamental na formação de coágulos,
graças a sua propriedade de adesão e agregação umas com as outras. Além disso, liberam
outras substâncias participantes do processo de coagulação sanguínea, tais como enzimas e
hormônios com propriedades coagulantes e vasodilatadoras.

http://ap-imune.webuda.com/

7 PRINCÍPIOS DE IMUNOLOGIA

Imunidade é a proteção de nosso corpo contra doenças. O chamado sistema imune
atua contra qualquer invasor, que pode ser um microrganismo infeccioso ou mesmo uma
substância estranha ao organismo, como macromoléculas, proteínas ou polissacarídeos não
reconhecidos pelo sistema.

7.1 IMUNIDADE INATA

Logo no início de uma infecção a imunidade inata – ou natural – é quem reage em
defesa do organismo, isso porque ela já está presente no organismo antes de qualquer invasor
chegar. A imunidade inata consiste em mecanismos que existem antes da infecção, que são
capazes de rápidas respostas aos micro-organismos e que, reagem essencialmente do mesmo
modo às infecções repetidas. A imunidade inata é ativada por estruturas comuns presentes nos
micro-organismos, que podem ser semelhantes a outras substâncias estranhas.
São componentes deste tipo de imunidade fatores físicos, químicos e biológicos.

7.1.1 Fatores Físicos

São barreiras mecânicas à invasão de agentes não desejados. A pele é nossa primeira
linha de defesa, agindo como um muro de proteção devido sua impermeabilidade. A região do
interior do nariz possui pelos que juntamente com o muco produzido agem como uma ‘cola’ onde
partículas ficam presas.

7.1.2 Fatores Químicos

Substâncias antimicrobianas são secretadas pelo nosso organismo como sistema de
defesa. São exemplos deste mecanismo a presença de lisozimas e fosfolipases na lágrima,
saliva e muco nasal, que são inibidoras do crescimento bacteriano, o pH do estômago é
altamente ácido o que reduz drasticamente as condições de vida de microrganismos neste meio.

7.1.3 Fatores Biológicos

Proteínas do sangue regulam e coordenam atividades do sistema imunológico e
existem também células brancas, neutrófilos e macrófagos, que fagocitam agentes intrusos,
além de células matadoras naturais (natural killers) que matam as próprias células hospedeiras
quando invadidas por micro-organismos.

7.2 IMUNIDADE ADQUIRIDA

Após este primeiro contato, o sistema imune tem outra resposta tardia, mais complexa
e específica, a imunidade adquirida. Os componentes da imunidade adquirida são os linfócitos
e seus produtos. Esta imunidade é específica contra diferentes tipos de invasores e é aumentada
a cada exposição repetida destes agentes porque possui uma memória imunológica.
Existem dois tipos de resposta imune adquirida: imunidade humoral e imunidade
celular. A imunidade humoral é mediada pelos anticorpos, que são produzidos pelos linfócitos B.
Os anticorpos reconhecem, se ligam aos agentes invasores, neutraliza-os e os ‘marcam’ para

que sejam eliminados posteriormente. Já a imunidade celular é mediada pelos linfócitos T. Sua
ação consiste em destruir os micro-organismos que invadem os fagócitos e outras células do
hospedeiro.
A imunidade adquirida também pode ser dividida em imunidade ativa e passiva. A
imunidade ativa ocorre quando o sistema imune do indivíduo entra em contato com o micro-
organismo ou substância estranha, e reage produzindo anticorpos e células imunes. Esse tipo de
imunidade pode durar por vários anos. A vacinação é um exemplo de imunidade ativa. Quando
um anticorpo ou linfócito específico é transferido para o organismo este é chamado de
imunidade passiva. Este tipo de imunidade produz uma ação temporária, com rápida e eficiente
proteção. Um exemplo desse tipo de imunidade é a transferência de anticorpos da mãe para o
feto. Esses dois tipos de imunidade geram proteção ao indivíduo, porém, no caso da imunidade
passiva não há constituição de memória imunológica, pelo fato dos anticorpos não terem sido
produzidos neste organismo.

7.3 ANTICORPOS E ANTÍGENOS

Os anticorpos são glicoproteínas produzidas pelos linfócitos B. Depois de sintetizados
os anticorpos, também conhecidos como imunoglubulinas, podem ficar presos aos linfócitos B ou
secretados. Os anticorpos ligados à membrana do linfócito funcionam como mediadores da
imunidade humoral, servindo como ponte de ligação com os agentes infecciosos. Quando a
parte sólida do sangue e o plasma são separados, resta o que chamamos de soro, que é onde
ficam os anticorpos secretados pelos linfócitos, por isso, o estudo dos anticorpos e suas reações
com antígenos é chamada de sorologia.
São chamados de antígenos ou imunógenos, as moléculas ou macromoléculas, que se
ligam especificamente aos anticorpos, desencadeando uma resposta imune do organismo. No
caso de antígenos macromoleculares a região ou regiões que se ligam ao anticorpo são os
epítopos. Estes epítopos podem ser uma proteína, um carboidrato, um lipídio ou até mesmo um
ácido nucleico.
A ligação antígeno-anticorpo funciona como um sistema de encaixe molecular, como
uma interação chave-fechadura altamente específica. Apesar disso, podem ocorrer reações

cruzadas, em que o anticorpo pode reconhecer uma molécula muito semelhante ao antígeno
original. Abaixo está uma figura representando um anticorpo e um antígeno ligados. Perceba
como apenas um dos antígenos exemplificados possui encaixe perfeito no sítio de ligação do
anticorpo.

FIGURA 63

Exercícios de Fixação:

3 O termo que preenche corretamente a lacuna é:
_____________ são macromoléculas biológicas que fazem parte da estrutura dos seres vivos,
estão em todas as células e são os instrumentos moleculares pelos quais a informação genética
é expressa.
a) Lipídios
b) Proteínas
c) Carboidratos
d) Enzimas
e) Monossacarídeos

Antígenos
Antígeno
Sítio de ligação
ANTICORPO
Ligação ‘chave-fechadura’
Antígenos
Antígeno
Sítio de ligação
ANTICORPO
Ligação ‘chave-fechadura’
FONTE: Disponível em: <wikipedia.org>. Acesso em: 27 fev.2012.

4 Em relação aos conceitos aprendidos em microbiologia assinale verdadeiro ou falso dentre as
abaixo citadas.
( ) A diferença entre os eucariotos e procariotos é que os procariotos possuem vacúolos e os
eucariotos não.
( ) A membrana plasmática é fina e flexível e se rompida a célula morre.
( ) Macronutrientes são assim chamados devido ao tamanho das moléculas que os compõem.
( ) Fase lag é o período de tempo em que os micro-organismos estão com o crescimento mais
acelerado.

5 Faça a correlação correta:
a) Forma a fase líquida do sangue
b) Forma a fase sólida do sangue
c) Células atuantes no sistema imunológico
d) Pedaços de células que atuam na coagulação sanguínea

I - plaquetas
II - leucócitos
III - plasma
IV - elementos figurados

6 Múltipla escolha
O que é imunidade humoral?
a) A imunidade humoral é aquela na qual os anticorpos se ligam aos agentes invasores,
neutraliza-os e os ‘marcam’ para que sejam eliminados posteriormente.
b) A imunidade humoral é aquela mediada pelos linfócitos T, e consiste na destruição dos micro-organismos que invadem os fagócitos e outras células do hospedeiro.

c) A imunidade humoral é aquela que ocorre quando o organismo está debilitado e os linfócitos T
atacam agentes invasores.
d) A imunidade humoral é aquela onde um anticorpo ou linfócito específico é transferido para o
organismo.

Respostas
3 – B
4 – F; V; F; F;
5 – A – plasma / B – elementos figurados / C – leucócitos / D – plaquetas.
6 – A

8 INTRODUÇÃO

A qualidade de um resultado diretamente ligada às técnicas empregadas no dia a dia.
Muitos são os fatores que podem alterar esta qualidade e até mesmo fornecer resultados
imprecisos e errados. A qualidade dos reagentes e da amostra colhida, a manutenção e
calibração dos equipamentos e materiais utilizados, a técnica utilizada e como o operador realiza
as análises são exemplos destas variáveis. Não adianta um laboratório ter uma boa quantidade
de amostra, os mais caros e avançados equipamentos se o operador, ou técnico, estiver
destreinado realizando as análises sem cuidado e técnica apropriada. Por isso a seguir
estudaremos as técnicas e modos corretos de operação dos equipamentos fundamentais
encontrados nos laboratórios.

9 TÉCNICAS DE PIPETAGEM E MICROPIPETAGEM

A coisa que mais fazemos em um laboratório é medir volumes. Existem inúmeros
instrumentos para esta finalidade: balão volumétrico, béquer, erlenmeyer, mas os mais usados e
que exigem maior técnica são as pipetas e micropipetas.

9.1 PIPETAS

Como já vimos no primeiro módulo Existem dois tipos de pipetas: graduadas e
volumétricas. As pipetas volumétricas possuem uma dilatação no centro do corpo da pipeta que
a torna mais precisa e possui apenas uma opção de volume, o volume total. As pipetas
graduadas são as mais comuns e possuem uma graduação indicativa do volume. Na parte
superior da pipeta estão informações auxiliares como: volume total da pipeta, qual volume
corresponde cada traço da graduação e temperatura máxima que pode ser submetida. Nesta
pipeta da figura abaixo, por exemplo, é uma pipeta de 25 ml onde cada traço corresponde a 0,1
ml e pode chegar até 20ºC sem problemas.
FIGURA 64
FONTE:
Disponível em:

volumétrica graduada

<http://t.r4.com.br/templates/casaq/www.casadaquimica.com/SUB/detalhe/8321/>. Acesso em:
14 mar. 2012.
Esses são detalhes que precisamos prestar atenção antes de escolher a pipeta,
dependendo para que iremos utilizar. É aconselhável, antes de iniciar um procedimento, verificar
quais volumes terão de ser pipetados e escolher a pipeta com volume mais próximo e com a
graduação correta. No caso de em uma análise for necessário pipetar 3 ml de um reagente e 7
ml de outro então o adequado é usar uma pipeta de 5 ml e outra de 10 ml. Uma dúvida
recorrente é quando o volume necessário é ‘quase’ o de uma pipeta, por exemplo, uma
pipetagem de 10,5 ml. O que fazer neste caso? O correto é usar uma pipeta com volume maior
mais próxima. Se só tiver a de 20 ml, deverá ser essa a opção. Algumas vezes a pipeta precisa
ser esterilizada, em autoclave, a temperatura chega a 121ºC, neste caso é necessário escolher
uma pipeta que resista tanto sua integridade quanto sua calibração, a altas temperaturas.
Sempre use pipetas sem pontas ou partes quebradas, limpas e secas. Também se usa colocar
um pequeno chumaço de algodão hidrofóbico na extremidade superior da pipeta como uma
espécie de filtro de proteção.
A pipetagem consiste em aplicar uma pressão negativa na abertura superior da pipeta
para a sucção de líquidos. É expressamente proibido pipetar com a boca e também nem há
necessidade, pois existem no mercado vários tipos e modelos de dispositivos auxiliares para
pipetas.

FIGURA 65

Pipetador tipo pipump
FONTE: compresaude.com.br
Pipetador tipo pipetaid
FONTE: ciencor.com.br
Pêra
FONTE: taroa.com.br

Ao pipetar uma solução sempre se enche a pipeta até seu volume máximo e então é
feita a dispensa do líquido até ao volume desejado. O operador deve olhar de frente para a
marcação, em linha reta, para verificar se o volume está na marcação. Quando um líquido está
em um recipiente cilíndrico ele não fica em linha reta, há uma espécie de curva, a parte inferior
desta é o menisco. Quando medimos um líquido os olhos devem estar na altura do menisco e a
pipeta deve estar verticalmente reta.

FIGURA 66

FONTE: kontrol-kalidad.blogspot.com FONTE: juntadeandalucia.es

9.2 MICROPIPETAS

As micropipetas são utilizadas para volumes pequenos, em torno de 1 a 1000ul
(microlitros). Existem micropipetas para diversas faixas de volume e usam ponteiras descartáveis
para cada pipetagem. Existem as micropipetas monocanal que utilizam uma ponteira de cada
vez e micropipetas multicanal que são usadas para trabalhar em microplacas ou tiras de
microtubos, com várias ponteiras (em geral de 8 a 12) de cada vez.

FIGURA 67

Existem dois estágios no embolo da micropipeta que dependendo da modalidade de
pipetagem (direta ou reversa) é usado.

FIGURA 68

FONTE: tudolab.com.br
Micropipeta
Monocanal
Micropipeta
Multicanal
Micropipeta
Multicanal
1ºestágio
2ºestágio
Fonte: frilabo.pt
embolo
1ºestágio
2ºestágio
Fonte: frilabo.pt
1ºestágio
2ºestágio
1ºestágio
2ºestágio
Fonte: frilabo.pt
embolo

9.2.1 Pipetagem Direta
É o modo padrão de pipetagem, usada para amostras com viscosidade normal. Na
pipetagem direta, primeiro esvazia-se o ar da ponteira apertando o embolo até o 1º estágio e
leva-se a ponteira, com o embolo ainda apertado, até metade do líquido que será pipetado. Em
seguida se solta lentamente o embolo até o preenchimento da ponteira. Para transferir, com o
recipiente receptor inclinado, colocar a ponteira até o meio do tubo e apertar o embolo até o final
(2º estágio), dispensando lentamente todo o líquido e só quando estiver fora do líquido, solta o
embolo.

FIGURA 69

9.2.2 Pipetagem Reversa

2º estágio
1º estágio
PREPARAÇÃO ASPIRAÇÃO TRANSFERÊNCIA ESGOTAMENTO REPOUSO
Segurar o embolo
até o 1º estágio –
fora do líquido
Soltar o embolo –
dentro do líquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado
Apertar o embolo até
o 2º estágio -
devagar
Soltar
completamente o
embolo – fora do
líquido
Fonte: adaptado de Infotec - Labtest
2º estágio
1º estágio
PREPARAÇÃO ASPIRAÇÃO TRANSFERÊNCIA ESGOTAMENTO REPOUSO
Segurar o embolo
até o 1º estágio –
fora do líquido
Soltar o embolo –
dentro do líquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado
Apertar o embolo até
o 2º estágio -
devagar
Soltar
completamente o
embolo – fora do
líquido
2º estágio
1º estágio
PREPARAÇÃO ASPIRAÇÃO TRANSFERÊNCIA ESGOTAMENTO REPOUSO
Segurar o embolo
até o 1º estágio –
fora do líquido
Soltar o embolo –
dentro do líquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado
Apertar o embolo até
o 2º estágio -
devagar
2º estágio
1º estágio
PREPARAÇÃO ASPIRAÇÃO TRANSFERÊNCIA ESGOTAMENTO REPOUSO
Segurar o embolo
até o 1º estágio –
fora do líquido
Soltar o embolo –
dentro do líquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado
Apertar o embolo até
o 2º estágio -
devagar
Soltar
completamente o
embolo – fora do
líquido
Fonte: adaptado de Infotec - Labtest

Esta modalidade de pipetagem é utilizada mais frequentemente para amostras densas,
difíceis de pipetar. Antes de imergir a ponteira no líquido aperta-se o embolo até o 2º estágio e
então, dentro do líquido, solta-se o embolo totalmente. Colocar em seguida a ponteira dentro do
recipiente de transferência ligeiramente inclinado e soltar o embolo até o 1º estágio, lentamente.

FIGURA 70

2º estágio
1º estágio
PREPARAÇÃO ASPIRAÇÃOTRANSFERÊNCIA RE-ASPIRAÇÃO REPOUSO
Segurar o embolo
até o 2º estágio –
fora do líquido
Soltar o embolo –
dentro do líquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado e
apertar até o 1º
estágio
Se for aspirar outro
líquido, manter
pressionado no 1º
estágio
Depois de pipetar,
soltar
completamente o
embolo – fora do
líquido e se não for
mais pipetar
descartar a ponteira
Fonte: adaptado de Infotec - Labtest
2º estágio
1º estágio
PREPARAÇÃO ASPIRAÇÃO TRANSFERÊNCIA RE-ASPIRAÇÃO REPOUSO
Segurar o embolo
até o 2º estágio –
fora do líquido
Soltar o embolo –
dentro do líquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado e
apertar até o 1º
estágio
Se for aspirar outro
líquido, manter
pressionado no 1º
estágio
Depois de pipetar,
soltar
completamente o
embolo – fora do
líquido e se não for
mais pipetar
descartar a ponteira
Fonte: adaptado de Infotec - Labtest

10 USO DE CAPELA E CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA

10.1 CAPELA
FIGURA 71

F
ONTE: Disponível em: <http://www.lmf.df.ufscar.br/images/capela.JPG>. Acesso em: 15 mar.
2012.

Como já vimos anteriormente Capelas são câmaras para manipulação de reagentes e
substâncias tóxicas e voláteis. Os frascos contendo estes reagentes devem ser abertos apenas
dentro da Capela, com o sistema de exaustor ligado e com a tampa frontal parcialmente aberta,
com espaço suficiente apenas para colocar os braços dentro. Apesar de estar trabalhando
dentro da capela com os reagentes tóxicos e perigosos ainda é obrigatório o uso de EPI para
este tipo de manipulação, como óculos de segurança, luvas e dependendo do tipo de produto, se
muito concentrado e/ou tóxico, até máscara com sistema de filtração.

10.2 CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA

As Cabines de Segurança Biológica (CBS) tem por objetivo proteger o operador, o
meio ambiente e as amostras manipuladas. Há vários níveis de CBS que dependem do grau de
segurança necessário e nível de periculosidade dos agentes biológicos envolvidos nas
atividades. A seguir conheceremos quais são os tipos existentes de Cabines de Segurança
Biológica.

10.2.1 CBS Classe I

O ar é sugado para a cabine através da abertura frontal, circula pelo seu interior e
depois é eliminado por um condutor que fica na parte de trás da cabine, passando antes por um
filtro especial – filtro HEPA. Quando manipulamos meios líquidos e amostras podemos gerar
aerossóis que consiste no desprendimento de partículas microscópicas contendo os agentes
infecciosos – vírus, bactérias, etc.
O sistema das cabines de segurança faz o ar no interior da cabine circular, evitando
dessa forma que estes aerossóis e que os agentes infectantes permaneçam na cabine.
FIGURA 72

A: Abertura frontal
B: Painel de observação
C: Filtro exaustor HEPA
FONTE: Manual de Segurança Biológica OMS.

10.2.2 CBS Classe II

As câmaras da Classe II diferem das anteriores por proteger também o interior da
cabine de contaminações externas. O ar que entra na cabine passa antes por um filtro do tipo
HEPA e assim tanto operador quanto amostras são protegidas de contaminações. Neste sistema
70% do ar é recirculado dentro da cabine e 30% é expelido, depois de passar por outro filtro
HEPA. As CBS Classe II são adequadas para a manipulação de agentes dos grupos de rico 2 e
3.

FIGURA 73

Existem quatro tipos de CBS da Classe II : A1, A2, B1 e B2. A diferença entre eles está
na quantidade de ar recirculado e a velocidade de captação externa do ar. Sendo que as CBS
Classe II dos tipos B possuem no máximo 30% de recirculação do ar.
FONTE: Manual de Segurança Biológica OMS.

A: Abertura frontal
B: Painel de observação
C:Filtro exaustor HEPA
D:Conduta traseira
E:Filtro HEPA de abastecimento

FIGURA 74

10.2.3 CBS Classe III

Esse tipo de cabine oferece a maior proteção para o operador e é o tipo indicado para
uso com agentes biológicos do grupo de risco 4. O ar expelido da cabine passa por um sistema
de filtração com 2 filtros HEPA e atua com pressão negativa, ou seja, nenhum ar sai da cabine a
não ser pelo sistema de filtragem. A manipulação na CBS Classe III costuma ser realizada com
luvas grossas de borracha presas a mangas na parte frontal da cabine, sendo essa totalmente
vedada.

FONTE: Manual de Segurança Biológica OMS.
A: Abertura frontal
B: Painel de observação
C:Filtro exaustor HEPA
D: Filtro
de admissão HEPA

FIGURA 75

10.3 TRABALHANDO COM CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA

Independente da Classe de segurança alguns cuidados são necessários antes, durante
e após a operação na Cabine de Segurança Biológica, para a garantia da qualidade do trabalho
e segurança do meio ambiente e operador.

10.3.1 Luz ultravioleta

A: Porta-luvas (cobrindo o braço todo)
B: Painel de observação
C: Filtros exaustores HEPA duplos
D: Filtros de admissão HEPA
FONTE: Manual de Segurança Biológica OMS.

A maioria das cabines possui lâmpadas de luz ultravioleta que servem para
esterilização antes e após o uso da cabine. Essa lâmpada deve ficar acesa de 15 a 30 minutos
apenas. É preciso ter uma planilha para anotação acumulativa das horas utilizadas, pois, este
tipo de lâmpada possui um período de vida útil e após este tempo não tem mais o mesmo poder
de ação esterilizante. Também não se deve olhar diretamente para a luz ultravioleta e nem usar
a cabine com ela acessa, pois ela pode queimar a pele e córnea, sendo recomendado que
quando esta luz estiver acesa evitar ficar por perto.

10.3.2 Limpeza

A limpeza da cabine deve ser realizada antes do uso, antes de ligar a luz ultravioleta e
após o uso, após o período de esterilização com a luz ultravioleta. A limpeza deve ser realizada
com algodão ou gaze embebido em álcool 70%. Em casos especiais, quando há uso com
agentes biológicos de maior risco, deve-se primeiro efetuar uma limpeza com hipoclorito de
sódio diluído e depois um enxágue com água no mínimo destilada, terminando a limpeza com
álcool 70%. Uma vez por semana, ou em menos tempo dependendo do uso da cabine, deve ser
feita uma limpeza mais profunda. Nesta limpeza profunda toda a área de trabalho deve ser
lavada com água e sabão neutro e enxaguada. Em qualquer processo de limpeza deve-se ter
muito cuidado para não molhar e estragar os filtros HEPA. O enxágue deve ser feito de forma
delicada, não jogando água, mas sim com o auxílio de uma esponja ou pano, exclusivos para
esta finalidade ou com gaze e algodão.

10.3.3 Cuidados durante operação CBS

Depois de limpar, passar álcool 70% e ligar a luz ultravioleta, o motor da cabine deve
ser ligado e permanecer em repouso por 15 a 30 minutos antes do uso. Este repouso é
necessário para que haja uma renovação do ar dentro da cabine, garantindo desta forma que o
ar interno ao início do procedimento esteja estéril.

Todo o sistema da cabine tem como princípio a circulação de ar, há uma ‘cortina’ de ar
na abertura frontal que evita a entrada de ar que não seja previamente filtrado. Por isso não
pode haver circulação de pessoas na frente da CBS, a cabine deve ser posicionada, dentro do
laboratório, de forma a evitar este tipo de situação, evitando, por exemplo, colocá-la em frente a
uma porta. O operador também não pode trabalhar com movimentos bruscos, para evitar a
‘quebra’ desta cortina de ar, devendo, inclusive, aguardar alguns minutos depois de organizar os
materiais e já com as mãos dentro da cabine.
Todo material que será utilizado dentro da cabine deve ser previamente desinfetado de
alguma forma. O mais comum é embeber todo o material com álcool 70% antes de colocá-los
dentro da cabine. As vidrarias e insumos