Creatinina K, Calcio e Ferro

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Creatinina K
Introdução
A determinação da creatinina (em sangue e urina) avalia a função renal. Além disso, determinação da concentração de creatinina no líquido amniótico é um dos parâmetros laboratoriais para a avaliação da maturidade fetal. 
O princípio do teste se baseia na observação de que a reação da creatinina com o picrato alcalino é muito rápida, enquanto a reação do picrato com os cromogênios é mais lenta. A medida da reação nos primeiros minutos permite a determinação da creatinina.
A creatinina e outros componentes do soro reagem com a solução de picrato em meio alcalino, formando um complexo de cor vermelha que é medido fotometricamente.
Creatinina + Ácido Pícrico Picrato de Creatinina
Interferências
Aumento da creatinina pode ocorrer por interferência de substâncias como o piruvato, ácido úrico, frutose, guanidina, hidantoína, ácido ascórbico, várias cefalosporinas, particularmente cefoxitina. A presença de lipemia, hemólise ou icterícia pode interferir na dosagem da creatinina. Trimetoprim, cimetidina, quinina, quinidina, procainamida reduzem a depuração da creatinina. Durante a gravidez e após exercícios físicos pode-se verificar aumento da depuração da creatinina.
Valores de Bilirrubina acima de 5 mg/dL interferem na reação. Valores de Hemoglobina até 180 mg/dL e Triglicérides até 900 mg/dL não interferem na reação, minimizado por procedimento descrito pelo kit, mas não fez parte da prática realizada pelo nosso grupo, por ausência de reagente.
Materiais:
Kit Creatinina K da Labtest (Lote 2001, Validade: 30/04/2013
Espectrofotômetro
Cubetas 2,0mL
Pipetas 1mL, 0,2mL
Ponteiras correspondentes
Tubos de ensaio
Cronômetro
Procedimento:
1.PREPARO DO PICRATO ALCALINO (Reagente de trabalho)
Misturamos 8ml de NaOH (nº 1) com 2ml volume de Ácido Pícrico (nº 2). 
2. PROCEDIMENTO
Ajustamos o fotômetro a zero em 510 nm com água destilada. 
Adicionamos 0,2 mL de cada um dos dois soros em teste a 2,0 mL do Picrato Alcalino. O mesmo fizemos com o padrão: 0,2mL do padrão a 2,0mL do Picrato Alcalino. 
Misturamos e aspiramos imediatamente para a cubeta. 
Disparamos o cronômetro e medir as absorbâncias aos 30 e 90 segundos.
Cálculos: 
A do Teste ou Padrão = A90 segundos – A30 segundos
A do Teste
Creatinina (não corrigida) = ----------------------- x 4 mg/dL
A do Padrão
Resultados: 
	
	Teste 1
	Teste 2
	Padrão
	Abs 30 segundos (ʎ)
	0,093
	0,062
	0,063
	Abs 90 segundos (ʎ)
	0,12
	0,065
	0,179
	Dosagem (ml/dL)
	0,93
	0,10
	-
Discussão:
O teste 1 encontra-se dentro dos valores de referência (0,70 a 1,20), levando-se em consideração o sexo (masculino) do paciente. No entanto o teste 2 encontra-se muito abaixo dos valores de referência, visto que o paciente também é do sexo masculino. Diversos fatores podem ter contribuído para este resultado. Primeiramente, está descrito na bula do Kit que o controle da temperatura é absolutamente indispensável para a reprodutibilidade dos resultados. É necessário utilizar um equipamento com cubeta termostatizada a 37 ºC. No laboratório, não possuíamos cubeta termostatizada, desta forma, não podemos considerar o teste como válido. Além disso, o kit estava fora de validade, então, apesar de termos encontrado no teste 1 valor aceitável, não podemos considera-lo como correto. Além destes problemas técnicos, não podemos deixar de levar em conta o estado físico do paciente, uma vez que seu estado esteja de tal forma debilitado que esse valor encontrado seja referente ao seu quadro clínico, cabendo ao médico ou ao responsável do laboratório, quando portar as indicações clínicas ou prontuário do paciente analisar se o resultado condiz com o esperado tendo-se em conta o quadro do paciente.
Cálcio
O cálcio é um mineral de extrema importância no organismo humano, presente nas cartilagens, dentes e ossos. Possui importante papel na coagulação sanguínea, contração muscular, processos de formação óssea, integridade celular, possui papel importante no mecanismo de ação de hormônios (paratormônio, calcitonina) e ativação de enzimas.
A dosagem da elevação do nível de cálcio sérico é considerada o teste bioquímico de triagem mais comum e confiável para o diagnóstico de hiperparatireoidismo primário ou secundário.
O princípio do teste basea-se na reação do cálcio com a púrpura de ftaleina em meio alcalino formando um complexo de cor violeta que é medido em 570nm. É importante ressaltar que 
Interferencias:
Plasmas citratados, oxalatados, fluoretados ou com EDTA fornecem resultados falsamente diminuídos porque formam complexos estáveis com o cálcio. Valores de bilirrubina até38ml/dL, hemoglobina até 180ml/dL e triglicérides até 900ml/dL não produzem interferências significativas. Valores de triglicérides acima de 900mg/dL produzem resultados falsamente elevados por interferência fotométrica. Essas interferências podem ser minimizada por método descrito no kit, mas não fez parte da prática realizada pelo nosso grupo, por falta de reagente.
Materiais
Kit Calcio Liquiform da Labtest (Lote 2003, Validade: 31/10/2013
Espectrofotômetro
Cubetas 2,0mL
Pipetas 1mL, 0,02mL
Ponteiras correspondentes
Tubos de ensaio
Cronômetro
Procedimento:
Preparo do reagente de trabalho 
Misturamos 6mL do reagente 1 a 2,0mL do reagente 2 para fazer nosso reagente de trabalho.
Ajustamos o comprimento de onda para 570nm.
Colocamos reagente de trabalho 2,0mL tanto nas cubetas de teste, que foram duas, quanto no padrão e ajustamos o zero do aparelho na cubeta denominada teste 1. A seguir adicionamos 0,04mL da amostra 1 na cubeta correspondente, misturamos bem e medimos a absordância. Repetimos o procedimento (zerar, adicionar 0,04mL de amostra/padrão, misturar, medir) para o teste 2 e para o padrão.
Os resultados de absorbância e da dosagem já calculada foram:
	
	Teste 1
	Teste 2
	Padrão
	Abs (ʎ)
	0,061
	0,135
	0,128
	Dosagem
	4,77
	10,55
	-
O cálculo da dosagem foi feito a partir da fórmula:
 Abs do teste
Cálcio (ml/dL) = ------------------- x 10
Abs do Padrão
Discussão:
A partir desses dados podemos concluir que a concentração de Cálcio no soro do primeiro paciente encontrava-se abaixo dos valores de referência, enquanto a concentração no segundo paciente estava dentro dos limites de referência (8,8 a 11,0 mg/dL).
Não podemos confiar nos resultados obtidos por este teste pois o kit estava fora da validade e o soro armazenado, não temos informações exatas de há quanto tempo. 
Ferro sérico
O ferro é essencial para a maioria dos organismos vivos, pois participa de numerosos processos vitais, desde os processos oxidativos celulares ao transporte de oxigênio para os tecidos. A hemostasia do ferro é regulada principalmente pela absorção e não pela excreção. O ferro é transportado no sangue por uma proteína, a transferrina, e armazenado nos tecidos ligado a outra proteína chamada ferritina, que é uma reserva de ferro rapidamente mobilizável.
Na deficiência de ferro o fígado estimula a produção de transferrina, porém, na má nutrição ela se apresenta em valores muito baixos apesar do déficit de ferro.
A avaliação do ferro sérico é essencial nas anemias ferroprivas, assim como nos estados de excesso de ferro, como transfusões repetidas, hemocromatose idiopática, cirrose, talassemia e anemia sideroblástica que são as causas mais comuns de aumento do ferro sérico.
A deficiência de ferro é consequência de: (1) suprimento inadequado; (2) aumento da demanda; (3) perda sanguínea ou a combinação destes. O suprimento inadequado é característico das crianças alimentadas com leite. Já o aumento de demanda é característica da gravidez e das crianças nos primeiros 5 anos de vida. Menstruação abundante, hemorragias gastrointestinais, hemorroidas, carcinoma de cólon e parasitoses são causas comuns de deficiência de ferro sérico por perda sanguínea no adulto.
O princípio do método basea-se na mimetização da reação que ocorre no lisossomo, onde, em meio ácido o ferro ligado à transferrinase dissocia em íon férrico, que é reduzido à forma de íon ferroso por ação da hidroxilamina.
Após a adição de Ferrozine forma-se um complexo magenta brilhante cuja absorbância, medida a 560 nm, é proporcional à quantidade de ferro na amostra.
Interferências:
Valores de bilirrubina até 19mg/dL e triglicérides até 900mg/dL não produzem interferências significativas. Valores de bilirrubina maiores que 19mg/dL e triglicérides maiores que 900mg/dL produzem resultados falsamente elevados. 
As amostras devem ser colhidas em jejum e pela manhã. O ritmo circadiano afeta as concentrações de ferro, sendo obtidos valores inferiores à tarde. Esta diferença pode ser crítica, atingindo até 30%. Idade, sexo, período de gestação, uso de contraceptivos orais e estrogênio alteram as concentrações de ferro.
 Materiais
Kit de dosagem Labtest Ferro Sérico (Lote 1002, Validade 31/03/2013)
Espectrofotômetro
Cubetas 2,0mL
Banho-maria a 37 °C
Pipetas de 1000µl, 500 µl e 50 µl
Cronômetro
Tubos
Água destilada
 Procedimento
Em 4 diferentes tubos de ensaio, colocamos os reagentes conforme a tabela a seguir:
	
	Branco
	Teste 1
	Teste 2
	Padrão
	Tampão (nº 1)
	2,0mL
	2,0mL
	2,0mL
	2,0mL
	Amostra respectiva
	─
	0,50mL
	0,50mL
	─
	Padrão (nº 2)
	─
	─
	─
	0,50mL
	Água deionizada
	0,50mL
	
	
	
 Misturamos e determinamos a absorbância do teste em 560 nm, acertando o zero com o branco. Desta forma obtivemos a absorbância A1. Devolvemos o conteúdo das cubetas aos seus respectivos tubos. A seguir, adicionamos 0,050mL de Ferrozine® (nº 3) em cada um dos tubos. 
Misturamos e incubamos em banho-maria a 37 °C por 10 minutos. Determinamos as absorbâncias do teste e padrão novamente em 560 nm, acertando novamente o zero com o branco. Desa forma obtivemos as absorbâncias A2.
 Resultados
Após a medição das absorbâncias foram encontrados os seguintes resultados:
	
	Teste 1
	Teste 2
	Padrão
	Abs 1 (ʎ)
	0,012
	0,006
	-
	Abs 2 (ʎ)
	0,089
	0,13
	0,38
	Dosagem (µg/dL)
	101,32
	163,16
	
O cálculo é feito pela seguinte fórmula:
Ferro (µg/dL) = ______A2 - A1______ x 500
 Absorbância do padrão
Discussão
De acordo com os resultados obtidos, ambas as amostras estão dentro do valor de referência, adulto até 170µg/dL. Importante ressaltar que as amostras fornecidas não foram coletadas no dia do teste e que o teste estava fora da validade há mais de um ano, o que não nos possibilita confiar nos resultados obtidos.