Aula 01 DPPH

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UTFPR - TOLEDO 
MESTRADO EM PROCESSOS QUÍMICOS E BIOTECNOLÓGICOS 
TÓPICOS ESPECIAIS EM BIOTECNOLOGIA: ATIVIDADE ANTIOXIDANTE 
PROFA. DRA. SOLANGE MARIA COTTICA 
AULA PRÁTICA 01 – DPPH 
 
1. Solução de DPPH 
Para o preparo da solução de DPPH• 0,1192 mmol L-1, dissolver 4,70 mg de 
DPPH• em metanol e completar o volume para 100,0 mL em um balão volumétrico com 
metanol, homogeneizar e transferir para um frasco de vidro âmbar. Preparar e usar apenas 
no dia da análise. Proteger da luz durante o preparo da solução e a realização das análises. 
 
2. Preparo de amostras e padrões 
Para o preparo da amostra a ser analisada, pesar 20,0 mg do extrato e dissolver em 
10,0 mL de metanol, perfazendo uma concentração de 2,0 mg mL-1. 
Para a construção da curva de calibração empregando o padrão Trolox (MM 250,29 
g mol-1), prepara-se uma solução de concentração 2000 μmol L-1, em balão volumétrico 
de 50,0 mL, dissolvendo-se 25,0 mg deste padrão em metanol e completando-se o 
volume. A mesma deve ser armazenada em frasco de vidro ao abrigo da luz, e recomenda-
se que seja preparada e utilizada apenas no dia da análise. A partir da diluição da solução 
de Trolox de 2000 μmol L-1 são preparadas, em balões volumétricos de 10,0 mL, outras 
soluções de Trolox de concentrações: 0, 100, 500, 1000 e 1500 μmol L-1. 
 
3. Procedimento 
Testar volumes iniciais da solução do extrato da amostra de 25, 50, 75 e 100 
µL nas cubetas, em triplicata. Ao abrigo da luz, adicionar 2,0 mL da solução metanólica 
do radical DPPH e aguardar 30 min para a leitura da absorbância em λ= 517 nm contra o 
branco (metanol). Realizar a leitura da absorbância da solução metanólica 
do radical DPPH. Definido o volume a ser trabalhado com a amostra, repetir o 
procedimento com as demais amostras e soluções padrão. 
 
4. Resultados 
Construir uma curva de calibração da absorbância média versus concentração de Trolox 
(µmolL-1) e obter a equação da reta. Para cada absorbância obtida, calcular a concentração 
de extrato em equivalente Trolox (ET). Em seguida, dividir o valor obtido pela 
concentração do extrato (g L-1) para obter µmol ET por grama de extrato. 
Para expressar os resultados por grama de amostra (µmol ET g-1 amostra), multiplica-se 
o resultado anterior pela massa de extrato obtido na extração e divide pela massa de 
amostra inicial (g). Por fim, faz-se a média das concentrações obtidas.