Metodos de Estudo em Histologia

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ì	
  
Métodos	
  de	
  Estudo	
  em	
  Histologia	
  
Professores:	
  
Samuel	
  Noronha	
  
Camilla	
  Pa0	
  
Faculdades	
  Metropolitanas	
  Unidas	
  
Curso	
  de	
  Medicina	
  Veterinária	
  
Disciplina	
  de	
  Química	
  Fisiológica	
  
São	
  Paulo,	
  2015	
  
Histologia	
  
ì  É	
  o	
  estudo	
  das	
  células	
  e	
  dos	
  tecidos	
  de	
  um	
  corpo	
  e	
  
de	
  como	
  as	
  estruturas	
  se	
  organizam	
  para	
  cons:tuir	
  
os	
  órgãos.	
  
Preparando	
  a	
  amostra…	
  
Coleta	
  do	
  material	
  	
  
Fixação	
  
Clivagem	
  	
  
Processamento	
   Inclusão	
  
Microtomia	
  
Coloração	
  
Coleta	
  
ì  A	
  coleta	
  consiste	
  em	
  remover	
  as	
  amostras	
  de	
  tecido	
  
de	
  um	
  determinado	
  organismo.	
  
Amostra	
  de	
  um	
  
organismo	
  ainda	
  vivo	
  
(cirurgias	
  e	
  biópsias)	
  
post	
  mortem	
  
Análise	
  mascroscópica	
  
(cor,	
  tamanho,	
  
aparência,	
  boa	
  qualidade	
  
da	
  amostra)	
  
Fixação	
  
ì  Uma	
  das	
  etapas	
  mais	
  importantes	
  
ì  Interrompe	
  o	
  o	
  metabolismo	
  celular,	
  preservando	
  
as	
  estruturas	
  celulares	
  e	
  extra-­‐celulares	
  
ì  Evita	
  a	
  autólise	
  tecidual	
  e	
  conserva	
  a	
  amostra	
  
Fixação	
  
Química	
  
(ex.:	
  fixadores	
  aldeídos)	
  
Fixação	
  
Física	
  
(ex.:	
  micro-­‐ondas)	
  
Fixadores	
  
ì  Fatores	
  que	
  influenciam	
  na	
  fixação:	
  
ì  Temperatura;	
  
ì  Espessura	
  do	
  tecido;	
  
ì  Tempo	
  de	
  exposição	
  ao	
  fixador;	
  
ì  Penetracão	
  do	
  fixador;	
  
ì  Tipo	
  de	
  fixador	
  x	
  natureza	
  da	
  amostra	
  
Clivagem	
  
ì  Redução	
  do	
  tamanho	
  da	
  amostra	
  para	
  facilitar	
  a	
  
penetração	
  dos	
  fixadores	
  e	
  a	
  difusão	
  dos	
  demais	
  
reagentes.	
  
Processamento	
  
ì  Difusão	
  de	
  reagentes	
  para	
  o	
  interior	
  dos	
  tecidos	
  e	
  
na	
  remoção	
  do	
  líquido	
  tecidual.	
  
ì  Inclusão	
  do	
  material	
  
ì  Parafina:	
  desidratação	
  (álcool	
  eYlico),	
  clarificação	
  
(xilol)	
  e	
  impregnação	
  (parafina	
  ou	
  outros).	
  
	
  
Microtomia	
  
ì  Elaboração	
  de	
  cortes	
  de	
  4	
  a	
  6	
  μm	
  para	
  possibilitar	
  a	
  
observação	
  do	
  tecido	
  no	
  microscópio	
  de	
  luz.	
  
Coloração	
  
ì  Facilitar	
  a	
  observação	
  do	
  tecidos	
  
ì  Compostos	
  orgânicos	
  que	
  possuem	
  um	
  cromógeno	
  
(dá	
  cor)	
  e	
  coram	
  sele:vamente	
  os	
  componentes	
  
teciduais,	
  como	
  as	
  células	
  e	
  a	
  matriz	
  extracelular.	
  
De	
  acordo	
  com	
  a	
  carga	
  iônica,	
  os	
  corantes	
  podem	
  
ser	
  ·∙ácidos,	
  básicos	
  ou	
  neutros.	
  	
  
ì  HE:	
  H:núcleo	
  e	
  E:	
  citoplasma	
  
Microscopia	
  
ì  Confocal:	
  analisa	
  um	
  plano	
  nas	
  amostras	
  de	
  
tecidos.	
  
ì  Fluorescência:	
  Detecção	
  de	
  parYculas	
  que	
  emitem	
  
luz.	
  Interessante	
  para	
  estudar	
  as	
  estruturas.	
  
ì  Eletrônica	
  de	
  transmissão:	
  Grande	
  ampliação.	
  
Moléculas.	
  
ì  Eletrônica	
  de	
  varredura:	
  Pseudo	
  3D	
  
ì  Estereológico:	
  analisa	
  os	
  3	
  eixos	
  
Cultura	
  de	
  células	
  
Imuno-­‐histoquímica